Online трансляция


Глаукома: теории, тенденции, технологии

Глаукома: теории, тенденции, технологии

7-8 декабря 2018 г.
Трансляция проводится из трех залов:
7 декабря - Зал Сокольники
7,8 декабря - Зал Арбат
7 декабря - Зал Чистые Пруды


Партнеры


Surgix Монолит Optec R-optics Valeant thea Allergan Фокус santen tradomed sentiss sentiss






Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 30 2018
№ 29 2018
№ 28 2017
№ 27 2017
№ 26 2017
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 3 2018 г.
№ 2 2018 г.
№ 1 2018 г.
№ 4 2017 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 3 2018 г.
№ 2 2018 г.
№ 1 2018 г.
№ 4 2017 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 3 2018
№ 2 2018
№ 1 2018
№ 4 2017
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 5 2018
№ 4 2018
№ 3 2018
№ 2 2018
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2018
Выпуск 3. 2018
Выпуск 2. 2018
Выпуск 1. 2018
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (45) 2018
№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№4 (41) Октябрь 2018
№3 (40) Сентябрь 2018
№2 (39) Июнь 2018
№1 (38) Март 2018
№5 (37) Декабрь 2017
№4 (36) Октябрь 2017
№3 (35) Август 2017
№2 (34) Май 2017
№1 (33) Март 2017
....
Отражение Отражение
№ 1 (6) 2018
....


facebooklogo     youtubelogo



Сборники статей


Год
2016

Обоснование применения нестероидной противовоспалительной терапии для профилактики развития пролиферативной витреоретинопатии


Органзации: В оригинале: ГБОУ ВПО МГМСУ им. А.И. Евдокимова Минздрава России



Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Общая характеристика работы


Актуальность темы
    Пролиферативная витреоретинопатия (ПВР) – это тяжелая патология глаза, которая характеризуется избыточным воспалением, формированием соединительнотканных мембран и приводит к слепоте. Она является одной из основных причин рецидива регматогенной отслойки сетчатки, которая встречается в 6,1-17,9 случаев на 100 тысяч населения (Mitry D., 2010). ПВР в послеоперационном периоде развивается в 16% случаев (Bonnet M., 1995; Kon C.H., 2000).

    В настоящее время самым эффективным способом лечения ПВР считают хирургический (Silicone Study Group 1992; de Silva DJ, 2008). Даже после тщательного удаления мембран с поверхности сетчатки, частота рецидивов ПВР в первые три месяца после операции составляет в среднем 45% (Нероев ВВ, 2012; Шишкин ММ, 2012; Bonnet M, 1995; Kon C.H, 2000). Заболевание диагностируют на поздних стадиях, когда мембраны сформированы и обширны. Поэтому в дополнение к уже существующим хирургическим методам назрела необходимость разработки терапевтических подходов для профилактики ПВР.

    В основе процесса развития заболевания лежит воспалительная реакция, характеризующаяся наличием альтерации, экссудации и пролиферации. В момент нарушения целостности сетчатки одним из первых активируется каскад арахидоновой кислоты. Из арахидоновой кислоты циклооксигеназы (ЦОГ-1 и ЦОГ-2) синтезируют провоспалительные простагландины, которые организуют процесс воспаления в поврежденной области. Провоспалительная ЦОГ-2 экспрессируется и клетками поврежденной сетчатки, и клетками идиопатических мембран (Maloney S., 2009), и образующимися на глазном дне при сахарном диабете мембранами (Kase S., 2010). Далее происходит увеличение проницаемости сосудов и выход провоспалительных клеток крови в преретинальное пространство. Клетки начинают синтезировать цитокины и факторы роста, что с одной стороны приводит к еще большему увеличению проницаемости сосудов, а с другой – стимулирует пролиферацию клеток ПЭС, глиальных и иммунных клеток на поверхности сетчатки и стекловидного тела (Sen H., 1988; Lagua H., 1975; Vinores S., 1990; Charteris D., 2002; Oberstein S., 2011; Johnsen E., 2012). Клетки синтезируют матрикс, а через 2 недели от начала развития ПВР у них появляется сократительная активность. Это момент формирования фиксированных складок отслоенной сетчатки с выраженным ее укорочением (Glaser B., 1987; Walshe R., 1992).

    Для уменьшения воспаления в клинике применяют стероидные препараты, которые блокируют действие фосфолипазы А2 и подавляют весь каскад метаболизма арахидоновой кислоты (Tano Y., 1980; Acar N., 2010; Chen W., 2011), включая образование липоксинов. Липоксин А4 подавляет воспаление и способствует его разрешению (Gronert K., 2010). Стероидные препараты имеют ряд побочных эффектов: повышение ВГД и ВЧД, развитие задней субкапсулярной катаракты, повышение уровня глюкозы в крови, снижение местного иммунитета (Майский В., 2006). К данной группе препаратов относится триамцинолона ацетонид, широко используемый в офтальмологии.

    Действие НПВС при интравитреальном введении не изучено. НПВС блокируют работу ЦОГ, синтез липоксина А4 сохраняется. Для исследования нами выбран лорноксикам – НПВС с выраженным обезболивающим, противовоспалительным и антиагрегантным действием. Препарат не оказывает токсического действия на сетчатку (Diakonis VF, 2013). В качестве положительного действия рассматриваем его способность уменьшать пролиферацию фибробластов и глиальных клеток (Гаврилова СА, 2008; Тихонович МВ, 2012). НПВС не имеют побочных эффектов стероидных препаратов.

    Можно предположить, что данные свойства лорноксикама будут эффективны для профилактики развития ПВР.
Цели и задачи исследования
    Цель исследования

    Изучить роль провоспалительных факторов в динамике развития пролиферативной витреоретинопатии и обосновать применение нестероидного противовоспалительного препарата (лорноксикама) для профилактики развития данного заболевания.

    Задачи исследования

    1. Доказать наличие провоспалительных, ростовых и нейротрофических факторов в эпиретинальных мембранах человека на поздних стадиях ПВР.

    2. Создать диспазную модель пролиферативной витреоретинопатии у крыс и разработать критерии оценки состояния глаза крыс в эксперименте.

    3. Обосновать преимущества применения нестероидной противовоспалительной терапии при ПВР по разработанным критериям в сравнении со стероидной терапией.

    4. Изучить динамику изменений экспрессии циклооксигеназ в сетчатке и хориоидее на разных сроках развития пролиферативной витреоретинопатии в диспазной модели у крыс.

    5. Провести сравнительный анализ изменений экспрессии циклооксигеназ в сетчатке и хориоидее в ответ на введение стероидного и нестероидного противовоспалительных препаратов при пролиферативной витреоретинопатии.
Научная новизна исследования
    1. Впервые доказано, что в развивающихся при ПВР эпиретинальных мембранах на поздних стадиях заболевания экспрессируются циклооксигеназы первого и второго типов, нейротрофины BDNF и NGF и эндотелиальный фактор роста сосудов, что способствует поддержанию воспаления в глазу и росту мембран. Наблюдается прямая корреляционная зависимость между экспрессией ЦОГ-1, VEGF и BDNF.

    2. Впервые создана модель пролиферативной витреоретинопатии у крыс на основе интравитреального введения диспазы и разработаны критерии оценки состояния глаза и изменений сетчатки в данной модели, основанные на офтальмоскопических и морфологических данных.

    3. Впервые исследовано действие нестероидного противовоспалительного препарата (лорноксикам) на состояние глаза и изменения морфологических показателей сетчатки и хориоидеи при развитии ПВР в диспазной модели у крыс.

    4. Впервые сравнили влияние нестероидного противовоспалительного препарата (лорноксикам) и стероидного противовоспалительного препарата (триамцинолона ацетонид) на состояние животных и их глаз, морфологические изменения сетчатки и хориоидеи, выраженность и частоту образования пролиферативных мембран.

    5. Впервые изучили изменения экспрессии циклооксигеназ в сетчатке и хориоидее на разных стадиях развития заболевания в диспазной модели ПВР у крыс и проанализировали действие нестероидного противовоспалительного препарата (лорноксикам) и стероидного противовоспалительного препарата (триамцинолона ацетонид) на неё.
Практическая значимость
    1. Выявлено, что в эпиретинальных мембранах при ПВР синтезируются провоспалительные факторы, на синтез и экспрессию которых можно влиять терапевтически.

    2. Разработана схема терапевтического лечения ПВР, которая эффективнее применяемых в настоящее время в офтальмологии терапевтических методов профилактики пролиферативной витреоретинопатии.

    3. Учитывая доказанный минимальный риск осложнений, возможность повторного введения, высокую эффективность профилактики ПВР, внедрение нестероидной противовоспалительной терапии в офтальмологическую практику позволит уменьшить количество рецидивов отслойки сетчатки после хирургического лечения и снизить частоту встречаемости и тяжесть послеоперационных осложнений.

    4. Нестероидный противовоспалительный препарат (лорноксикам) доступен для широкого внедрения в офтальмологическую практику.
Основные положения, выносимые на защиту
    1. Доказано, что на ранних стадиях развития пролиферативной витреоретинопатии происходит увеличение экспрессии провоспалительных циклооксигеназ в сетчатке и хориоидее, это сопровождается запуском целого каскада морфологических изменений. В образующихся на поздних стадиях данного заболевания мембранах также синтезируются провоспалительные циклооксигеназы, эндотелиальный фактор роста сосудов и нейротрофины, что поддерживает высокий уровень воспаления в глазу и способствует дальнейшему росту мембран.

    2. Обосновано применение нестероидной противовоспалительной терапии для профилактики развития пролиферативной витреоретинопатии на основании полученных в ходе исследования данных, отражающих преимущества использования НПВС в сравнении со стероидной терапией. Лорноксикам, блокируя действие циклооксигеназ и нормализуя их экспрессию в сетчатке и хориоидее, препятствует развитию эндофтальмита, предупреждает ремоделирование сетчатки на всех сроках ПВР, значительно снижает частоту образования мембран и выраженность в них фиброзных процессов.
Внедрение в практику
    Разработанная диспазная модель ПВР и критерии оценки состояния глаза при данной патологии у крыс внедрены и эффективно используются в практике на кафедре физиологии и общей патологии ФФМ МГУ. Их используют в научных целях для изучения фундаментальных вопросов воспаления и для разработки терапевтических подходов в лечении, также анализ получаемых результатов исследования включен в обучающий план кафедры физиологии и общей патологии ФФМ МГУ.
Апробация диссертации
    Основные положения диссертации доложены на VI всероссийской с международным участием школе-конференции по физиологии кровообращения (Москва, 2016), на 14ом международном конгрессе «EURETINA» (Лондон, 2014), на XI и XII международных научно-практических конференциях «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии» (Москва, 2014 и 2013), на международной конференции «ISOCB Ocular Cell Biology Conference» (Оксфорд, 2013), и на международном молодежном научном форуме «Ломоносов - 2012» (Москва, 2012).
Публикации
    По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ, из них - 4 в центральных рецензируемых журналах из списка ВАК РФ, 2 иностранные публикации. Получено два патента РФ на изобретение № 2558991 приоритет от 31.01.2014 и № 2458656 приоритет от 17.06.2011.
Объем и структура диссертации
    Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, включающих описание материалов и методов, результатов, заключения, выводов, списка литературы. Работа изложена на 173 страницах компьютерного текста, содержит 22 таблицы, 25 рисунков. Список литературы включает 265 источников, из них 6 отечественных и 259 зарубежных.

Содержание работы


Материалы и методы исследования
    Работа состоит из клинической и экспериментальной частей.

     1. В клиническую часть вошли 11 пациентов (11 образцов): 6 мужчин и 5 женщин в возрасте от 31-ого до 74-х лет (60,2±11,2 года) с РОС и наличием выраженной ПВР (на стадии от B до D3). У двух пациентов в анамнезе первичная отслойка сетчатки, у девяти – рецидив отслойки сетчатки. У всех пациентов локализация разрывов сетчатки периферическая. Длительность заболевания у пациентов варьировала от 4-х до 36-ти месяцев (13,2±8,8 месяцев). Пациенты с другой глазной патологией из исследования были исключены. Всем пациентам проводили стандартные офтальмологические обследования до и после операции. В полученных при хирургическом вмешательстве эпиретинальных мембранах ПЦР-анализом определяли мРНК циклооксигеназ (ЦОГ-1 и ЦОГ-2), эндотелиального фактора роста сосудов (VEGF), мозгового нейротрофического фактора (BDNF) и фактора роста нервов (NGF).

    2. Экспериментальная часть исследования выполнена на трехстах половозрелых самцах беспородных крыс (300 глаз), массой 354±110 гр. В ходе эксперимента оценивали общее состояние животных: массу, внешний вид, активность; проводили общий осмотр глаза и его придатков; выполняли непрямую офтальмоскопию с видеорегистрацией глазного дна и стекловидного тела. Разработка диспазной модели пролиферативной витреоретинопатии у крыс Для разработки модели ПВР использовали протеолитический фермент, расщепляющий белки внеклеточного матрикса, диспазу. Раствор фермента в трех дозах 0,015U/мкл, 0,035U/мкл, 0,075U/мкл вводили интравитриально в объеме 2 мкл, контрольным животным вводили 0,9% NaCl эквивалентно, дополнительно исследовали интактный контроль. Эксперимент выполнен на 70 крысах. Энуклеацию проводили на 1-ой, 6-ой и 8-ой неделях эксперимента. Полученные срезы глаз окрашивали гематоксилин-эозином и азаном по методу Гейденгайна (на соединительную ткань). Оценка состояния сетчатки и хориоидеи осуществляли по разработанным оригинальным критериям: толщина отдельных слоев сетчатки и общая толщина сетчатки, толщина хориоидеи, продолжительность волнообразных изменений ядерных слоев сетчатки и её отслойки, наличие кист и розеток в сетчатке, выраженность деструкции фоторецепторов, наличие суб- и/или эпиретинальных кровоизлияний и суб- и/или эпиретинальных мембран (рис. 1).

    Высокие дозы фермента на поздних сроках эксперимента вызывали сильные деструктивные изменения сетчатки, когда не представлялось возможным выделить в ней конкретные слои. Скорость их появлений зависела от дозы фермента: максимальная доза вызывала деструкцию на 6-ой неделе эксперимента, а средняя доза - на 8-ой неделе. Минимальная доза диспазы не вызывала столь выраженных изменений сетчатки. Интравитреальное введение 2 мкл диспазы в дозе 0,015 U/мкл приводило к формированию в 100% случаев выраженных фиброзных мембран на 42 сутки эксперимента. Именно эта доза была выбрана для моделирования заболевания.

    Исследование действий противовоспалительных препаратов на динамику развития ПВР у крыс

    Протокол экспериментов. Для исследования эффективности противовоспалительной терапии при моделировании ПВР крысам через 20 мин после интравитреальной инъекции 0,015U/мкл диспазы вводили лорноксикам в дозе 8 мг/мл или триамцинолона ацетонид (ТА) в дозе 40 мг/мл. На вторые и третьи сутки лорноксикам вводили внутрибрюшинно в дозе 230 мкг/кг, ТА – внутримышечно в дозе 571 мкг/кг, контрольные крысы получали 0,9% NaCl эквивалентно, дополнительный контроль - интактные крысы. Энуклеацию проводили на 1-ый, 3-ий, 7-ой и 42-ой день эксперимента. Всего выполнили 130 экспериментов. Экспериментальные группы животных: Физ р-р - животные, получавшие 0,9% NaCl; Лорн – животные, получавшие лорноксикам; Триам – животные, получавшие триамцинолона ацетонид; Дисп - животные, получавшие внутриглазную инъекцию 2 мкл диспазы; Дисп+Лорн – животные с диспазной витреоретинопатией, получавшие лорноксикам; Дисп+Триам -животные с диспазной витреоретинопатией, получавшие ТА; ИК – интактные животные в качестве контроля.

    Схема и дозы вводимых препаратов выбраны исходя из рекомендованных для людей. Гистологические методы оценки состояния сетчатки глаз. Полученные срезы глаз окрашивали гематоксилин-эозином. Фотографирование срезов и обсчет проводили с использованием программы «AxioVision». Исследование экспрессии циклооксигеназ в сетчатке и хориоидее в диспазной модели ПВР у крыс, и влияния противовоспалительных препаратов на этот процесс

    Во всех группах изучали динамику продукции циклооксигеназ 1 и 2 типов, эксперимент выполнен на 100 животных. Протокол эксперимента описан выше. На депарафинизированные срезы наносили первичные антитела к ЦОГ-1 или ЦОГ-2 (кролик против крысы) фирмы Abcam и вторичные (козел против кролика), меченные пероксидазой. Активность собственных пероксидаз подавляли H2O2. В качестве отрицательного контроля использовали окрашенные вторичными антителами срезы сетчатки интактных крыс. Подсчет концентрации циклооксигеназ в слоях сетчатки и в хориоидее осуществляли в программе «ImagePro».

    Статистическую обработку результатов проводили в программах Microsoft Excel 2011, Statistica 10.0, IBM SPSS Statistics 22. Использовали метод χ-квадрат или точный критерий Фишера; дисперсионный анализ смешанной линейной модели; непараметрический U-критерий Манна-Уитни; метод ранговой корреляции по Спирмену. Различия считали значимыми при p<0,05.

Результаты исследования


Результаты анализа экспрессии ростовых, трофических и провоспалительных факторов в эпиретинальных мембранах
    В 11-ти образцах эпиретинальных мембран пациентов с тяжелыми формами течения как рецидивирующей, так и первичной ПВР методом ПЦР выявлена экспрессия мРНК ЦОГ-1 и ЦОГ-2, VEGF и BDNF. мРНК NGF обнаружили только в трех образцах. Экспрессия провоспалительных факторов не зависела от пола, возраста пациентов, частоты рецидивирования заболевания и исхода лечения.

    Впервые было выявлено, что чем больше в мембране экспрессировалось ЦОГ-1, тем больше в ней обнаруживали VEGF (Spearman R=0,71; р<0,05) и BDNF (Spearman R=0,74; р<0,01). Уровни продукции мРНК VEGF и BDNF также положительно связаны между собой (Spearman R=0,61; р<0,05). Ранее считалось, что зрелые мембраны имеют низкий уровень воспаления.

    Таким образом, было показано, что на поздних стадиях ПВР в мембранах синтезируются провоспалительные факторы и факторы, обеспечивающие сохранность и пролиферацию клеток - VEGF и BDNF, что поддерживает высокий уровень воспаления и ростовых процессов в больном глазу.

    Эти результаты позволили выработать рабочую гипотезу о том, что подавление синтеза простагландинов в ранний срок развития заболевания снизит уровень воспаления и уменьшит процессы фиброзирования и роста мембран.
Результаты действия противовоспалительных препаратов на динамику развития ПВР у крыс
     Введение диспазы сопровождалось развитием катаракты у четверти животных 25% (р<0,01) и гемофтальма более, чем у половины животных в группе (р<0,001).

    Лорноксикам на ранних сроках развития ПВР не влиял на частоту образования катаракты и гемофтальма. При использовании ТА для профилактики ПВР наблюдали тенденцию к увеличению частоты развития катаракты и гемофтальма на 18% (р=0,11) и на 15% (р=0,13) соответственно по сравнению с группой, получившей диспазу. В этой группе эндофтальмиты сопровождали развитие ПВР у четверти животных (p<0,05 по сравнению с группой Дис).

    Оба противовоспалительных препарата сдвигали момент образования волнистых изменений в сетчатке с первых на третьи сутки эксперимента. Лорноксикам сдерживал увеличение частоты встречаемости «розеток» в сетчатке при развитии ПВР (р<0,05). Препарат на 34% (р<0,05) уменьшил частоту поражения фоторецепторов, при этом состояние пораженных фоторецепторов в группе Дисп+Лорн было в 2 раза лучше (р<0,05), чем в группе Дисп, и выраженность их изменений была сопоставима с таковой у животных, получавших физ. р-р. Триамцинолона ацетонид не обладал данными действиями.

    Диспаза в месте непосредственного контакта с сетчаткой приводила к нарушению целостности ретинальных и/или хориоидальных сосудов, что сопровождалось кровоизлиянием. Нарушение гематоофтальмического барьера стимулировало развития мембран, которые образовывались эпи- и/или субретинально. ТА не повлиял на частоту развития мембран. Использование лорноксикама на 43% (р<0,05) снизило частоту развития мембран. В тех случаях, когда при применении лорноксикама мембраны образовывались, на 42 сутки эксперимента они всегда были меньше по размеру и почти не содержали выраженных фиброзных тяжей. Морфологически это многоклеточные структуры, похожие на молодые мембраны на 7 сутки у животных без лечения (рис. 2). Вероятно, хирургическое удаление данного типа мембран будет менее травматично для сетчатки.

    Большое внимание было уделено изучению состояния сетчатки и хориоидеи. Было выявлено, что интавитреальная инъекция физиологического раствора сопровождается утолщением сетчатки на 54 мкм (p<0,001), вызванным отеком всех её слоев, кроме ганглионарного. На 42 сутки отек спадает, и толщина сетчатки становится сопоставима с интактной. То есть нарушение целостности глазного яблока запускает слабую реакцию воспаления. При этом толщина хориоидеи не изменялась на протяжении всего эксперимента. Введение диспазы ухудшило состояние сетчатки и хориоидеи. Изменения появились с первых суток и нарастали с увеличением длительности эксперимента. На 1-ые сутки происходило увеличение ВЯС и НПС на 33% (p<0,05) и на 50% (p<0,01) соответственно, что было вызвано отеком ганглионарного слоя сетчатки. На 3-и сутки общая толщина сетчатки уменьшалась на 21% (p<0,05) по сравнению с группой ИК, в основном за счет уменьшения толщины НЯС, ВПС в 1,4 раза (p<0,05) и нейроганглионарного слоя в 1,5 раза (p<0,01) вследствие гибели фоторецепторов и ганглионарных клеток сетчатки. На 7-ые сутки после внутриглазной инъекции диспазы происходило значительное увеличение толщины всех слоев, кроме СПК и НГС, при этом общая толщина сетчатки увеличилась в 2 раза (p<0,05) по сравнению с ИК. Толщина хориоидеи увеличивалась в 3 раза (p<0,01). Однако в отличие от группы Физ р-ра, при использовании диспазы не происходило уменьшения толщины сетчатки к 42 суткам эксперимента. Толщина хориоидального слоя была больше на 68% (p<0,01), а толщина сетчатки – на 59% (p<0,05) по сравнению с группой ИК, что связано с процессами глиоза и фиброза в сетчатке.

    Использование ТА в диспазной модели ПВР у крыс уменьшало выраженность изменений слоёв сетчатки по сравнению с группой, получавшей только диспазу. Препарат сдерживал появление изменений толщины слоев сетчатки на 1-ые сутки. На 3-и сутки наблюдали уменьшение слоя хориоидеи и НГС сетчатки на 37% (p<0,01) и 29% (p<0,05) соответственно. К 7-ым суткам наблюдали общее утолщение сетчатки в 1,6 раза (p<0,01). В данном случае оно происходило из-за расширения СПК в 1,9 раза (p<0,01), НЯС в 1,5 раза (p<0,05) и ВЯС в 1,6 раза (p<0,05). Хориоидея также увеличивалась в размерах в 4 раза (p<0,001). К концу эксперимента в группе Дисп+Триам осталось только три крысы, у которых можно было анализировать сетчатку, у остальных животных наблюдался эндофтальмит. К 42 суткам НГС уменьшается по сравнению с ИК на 24% (p<0,05).

    Лорноксикам нивелировал действие диспазы, и толщины сетчатки и хориоидеи не менялись на протяжении всего эксперимента.

    Таким образом, применение лорноксикама на ранних стадиях ПВР препятствовало развитию эндофтальмита, предупредило ремоделирование сетчатки и хориоидеи на ранних и поздних стадиях заболевания, на 43% снизило частоту образования мембран и значительно уменьшило их фиброзирование. Использование ТА способствовало увеличению частоты развития катаракты, гемофтальма, в 8 раз увеличило количество случаев эндофтальмита, не предупредило отёк сетчатки, развившийся на седьмые сутки эксперимента, ухудшило состояние хориоидеи и НГС.
Результаты действия противовоспалительных препаратов на экспрессию циклооксигеназ в диспазной модели пролиферативной витреоретинопатии у крыс
    На 1-ые сутки после введения диспазы обнаружили ЦОГ-1 в ЭС, в НПС и во внутренних сегментах фоторецепторов, где в норме данный фермент отсутствует. ТА усилил действие диспазы на экспрессию ЦОГ-1 в ЭС, НЯС и ВЯС, и в НГС на 7%, 6%, 29% и 9% соответственно (p<0,05). В группе Дисп+Триам возросла экспрессия ЦОГ-1 в слоях, где в норме её нет: в хориоидее на 45% (p<0,05), во внутренних сегментах фоторецепторов на 38% (p<0,05) и в НПС на 16% (p<0,05) соответственно по сравнению с животными из группы ИК. Использование лорноксикама привело к возвращению экспрессии ЦОГ-1 к норме не только по распределению в слоях сетчатки, но и по концентрации в них.

    ЦОГ-2 также стала определяться во всех слоях сетчатки и в хориоидее после введения диспазы. При этом в НГС произошло увеличение экспрессии ЦОГ-2 по сравнению с группой ИК на 32% (p<0,05). Использование НПВС в дополнение к инъекции диспазы вернуло количество ЦОГ-2 во внутренних сегментах фоторецепторов к норме. Лорноксикам снизил экспрессию ЦОГ-2 в НГС на 9% по сравнению с группой, не получавшей лечения. ТА не повлиял на экспрессию данной изоформы фермента в НГС по сравнению с группой Дисп.

    На 3-и сутки эксперимента экспрессия ЦОГ-1 во всех группах соответствовала норме. ЦОГ-2 по-прежнему присутствовала во всех слоях сетчатки и в хориоидее в группе Дисп. Лорноксикам сдвинул момент увеличения экспрессии ЦОГ-2 в НГС с первых на третьи сутки и нормализовал содержание фермента в ЭС.

    На 7-ые сутки эксперимента в группе, получавшей диспазу, экспрессия ЦОГ-1 была снижена на 28% (p<0,05) в ВЯС по сравнению с группой ИК.

    Противовоспалительные препараты оказали протективный эффект на уровне данного слоя. В группе Дисп+Триам была увеличена продукция ЦОГ-1 в хориоидее в 1,5 раза (p<0,05), в ЭС в 2 раза (p<0,01), в слое внутренних сегментов фоторецепторов в 1,4 раза (p<0,05) и в НГС в 1,3 раз (p<0,05) по сравнению с базовым уровнем. Данные изменения могли быть вызваны ишемией сетчатки. При использовании лорноксикама для профилактики ПВР данных изменений в экспрессии ЦОГ-1 не наблюдали.

    Экспрессия ЦОГ-2 на 7-ые сутки после введения диспазы снижалась также в НЯС и ВЯС на 34% (p<0,01) и 31% (p<0,05) по сравнению с группой ИК соответственно, что, вероятно, было вызвано гибелью клеток в данных слоях. Противовоспалительные препараты на этот эффект диспазы не повлияли. На шестой неделе эксперимента экспрессия ЦОГ-1 была снижена во внутреннем ядерном слое на 30% (p<0,05) у всех групп животных, получавших диспазу. Картина экспрессии ЦОГ-2 мало отличалась от той, что была получена на седьмые сутки эксперимента.

    Во всех мембранах, развившихся вследствие ПВР, аналогично мембранам у людей обнаружили экспрессию циклооксигеназ первого и второго типов.

    Таким образом, введение диспазы с первых суток эксперимента изменяло экспрессию циклооксигеназ первого и второго типов в сетчатке и хориоидее.

    Противовоспалительные препараты оказали в основном эффект на экспрессию ЦОГ-1. При этом лорноксикам с первых суток нормализовал профиль экспрессии фермента, в то время как ТА, наоборот, увеличивал концентрацию ЦОГ-1 в сетчатке и хориоидее с первых по седьмые сутки эксперимента, что способствовало поддержанию высокого уровня воспаления в глазу и развитию пролиферативной витреоретинопатии.

Выводы

    1. Методом ПЦР-анализа было доказано, что на поздних стадиях ПВР в эпиретинальных мембранах человека экспрессируются провоспалительные циклооксигеназы (ЦОГ-1 и ЦОГ-2), эндотелиальный фактор роста сосудов (VEGF), нейротрофический фактор роста (BDNF) и фактор роста нервов (NGF). Выявлена положительная корреляционная зависимость между экспрессией ЦОГ-1, VEGF и BDNF.

    2. Созданная модель пролиферативной витреоретинопатии у крыс позволяет изучить течение заболевания с момента его инициации до поздних стадий. Интравитреальное введение 2 мкл раствора диспазы в дозе 0,015U/мкл запускает воспалительный процесс и на 42 сутки стабильно приводит к развитию выраженных фиброзированных мембран. Разработаны критерии оценки состояния глаз крыс, полностью характеризующие ПВР на ранних и поздних стадиях развития.

    3. В эксперименте in vivo доказано, что блокирование ЦОГ-1 и ЦОГ-2 с помощью лорноксикама в острую стадию ПВР оказывает выраженный противовоспалительный эффект, что препятствует развитию эндофтальмита, предупреждает ремоделирование сетчатки на всех сроках развития ПВР, на 43% снижает частоту образования мембран и выраженность в них фиброзных процессов. Ингибирование фосфолипазы А2 с помощью триамцинолона ацетонида приводит к увеличению частоты развития эндофтальмита и не сопровождается уменьшением проявлений признаков ПВР ни в острый, ни в хронический период заболевания.

    4. Методом иммуногистохимического окрашивания определено, что экспрессия ЦОГ-1 и ЦОГ-2 при моделировании ПВР имеет сложную динамику. В первые сутки концентрация обоих ферментов возрастает во всех слоя сетчатки. На третий день экспрессия ЦОГ-1 нормализуется; концентрация ЦОГ-2 уменьшается во всех слоях, за исключением эпителиального, где её содержание остается в 1,3 раза выше нормы. С седьмых суток эксперимента экспрессия ЦОГ-1 и ЦОГ-2 уменьшается в ядерных слоях сетчатки более чем на 30%.

    5. При введении нестероидного противовоспалительного препарата лорноксикама в условиях эксперимента in vivo сохраняется профиль экспрессии ЦОГ-1, соответствующий здоровому контролю, тогда как стероидный препарат триамцинолона ацетонид усиливает экспрессию ЦОГ-1 в слоях сетчатки, содержащих ядра клеток, и в хориоидее на ранних сроках развития ПВР.

    6. Доказано, что подавление циклооксигеназного звена воспалительной реакции является перспективной стратегией терапевтической профилактики развития пролиферативной витреоретинопатии.

Практические рекомендации

    1. Рекомендуется включение интравитреального введения в конце выполнения операции и системного применения в последующие два дня после операции нестероидного противовоспалительного препарата лорноксикама в схему терапевтической профилактики пролиферативной витреоретинопатии у людей, перенесших хирургическое лечение регматогенной отслойкой сетчатки и отслойки сетчатки, осложненной ПВР.

    2. Рекомендуется исключить интравитреальное использование триамцинолона ацетонида при наличии острого воспаления в глазу.

    3. Рекомендуется включить результаты по роли циклооксигеназ в функционировании сетчатки глаза и регуляции ими ростовых процессов в условиях изменяющейся синтетической активности в учебный курс офтальмологии, физиологии и фармакологии для студентов медиков и биологов.

    4. Рекомендуется созданную модель пролиферативной витреоретинопатии у крыс использовать как корректную модель изучения функционирования сетчатки и хориоидеи в условиях здоровья и при изменяющейся синтетической активности клеток сетчатки.

    5. Рекомендуется разработанную модель применять для оценки влияния лекарств на пролиферативные процессы в сетчатке, для разработки новых терапевтических стратегий пролиферативных заболеваний с последующей перспективой их использования в клинике.

Список работ, опубликованных по теме диссертации


Список литературы
    1. Тихонович М., Иойлева Е., Гаврилова С. Роль воспаления в развитии пролиферативной витреоретинопатии // Клиническая медицина. – 2015. – Т. 93, № 7. – С. 14–20.

    2. Ердяков А., Тихонович М., Ржавина Е., Гаврилова С. Характеристики сетчатки при развитии пролиферативной витреоретинопатии у крыс после внутриглазной инъекции конканавалина А и диспазы // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. – 2015. – Т. 101, № 5. – С. 572–585.

    3. Тихонович М., Лыскин П., Иойлева Е. и др. Экспрессия ростовых, трофических и провоспалительных факторов в эпиретинальных мембранах пациентов с тяжелой формой пролиферативной витреоретинопатии // Офтальмохирургия – 2015. – № 4. – С. 36–42.

    4. Тихонович М., Иойлева Е. Роль эндотелиального фактора роста сосудов в физиологии сетчатки // Вестник Оренбургского государственного университета. – 2015. – № 12(187). – С. 244–249.

    5. Тихонович. М.В., Ердяков А.К., Ржавина Е.М. «Влияние лорноксикама на общее состояние глаза и образование эпиретинальных мембран в модели воспаления у крыс» // VI Всероссийская научная конференция молодых ученых с участием иностранных специалистов «Актуальные проблемы офтальмологии» сборник научных работ 2011. – М., -С. 239-240

    6. Тихонович М., Ердяков А., Ржавина Е. Влияние лорноксикама на состояние глаза и образование эпиретинальных мембран в модели воспаления // Фундаментальная наука и клиническая медицина - человек и его здоровье: XIV Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей (с международным участием). – Издательство СПбГУ СПб., 2011. – С. 269–270.

    7. Тихонович М., Ердяков А., Ржавина Е. Влияние лорноксикама на общее состояние глаза и образование эпиретинальных мембран в модели воспаления у крыс//Материалы 6-й Всероссийской научной конференции молодых ученых "Актуальные проблемы офтальмологии". – М., 2011. – С.

    8. Тихонович М. Неселективный блокатор циклооксигеназ в лечении патологий центрального отдела сетчатки с отечно-транссудативным компонентом // Материалы Международного молодежного научного форума Ломоносов-2012. – МАКС Пресс, 2012.

    9. Тихонович М., Лыскин П. Неселективный блокатор циклооксигеназ в лечении патологий хориоретинального интерфейса центрального отдела сетчатки с отечно-транссудативным компонентом // V Всероссийский с международным участием семинар-круглый стол "Макула" 2012. – Ростов-на-Дону, 2012. – С. 523–524.

    10. Тихонович М., Ржавина Е., Ердяков А. Влияние неселективного блокатора циклооксигеназ на развитие эпиретинального фиброза в моделях необратимой ишемии глаза и диспазовызванной пролиферативной витреоретинопатии // Механизмы функционирования висцеральных систем. VIII Всероссийская конф. с междунар. участием. – СПб., 2012. – С.238.

    11. Тихонович М., Ржавина Е., Ердяков А. Влияние неселективного блокатора циклооксигеназ на общее состояние глаза и сетчатки в моделях воспаления//Современные технологии лечения витреоретинальной патологии. – М., 2013. – С. 191-192.

    12. Ердяков А., Ржавина Е., Тихонович М. Влияние лорноксикама на общее состояние глаза и сетчатки в различных моделях воспаления // Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины: Материалы V Междунар. науч.-практ. конф., г. Ростов-на-Дону, 3–5 октября 2013 г. – Издательство ЮФУ г. Ростов-на-Дону, 2013. – С. 344–345.

    13. Tikhonovich M., Rzhavina E., Erdyakov A., Gavrilova S. Influence of nonselective cyclooxygenase inhibitor on the overall state of the eye in inflammatory models. // ARVO/ISOCB Ocular Cell Biology Conference. – Oxford, United Kingdom, 2013. – P. 89–89.

    14. Tikhonovich M., Gavrilova S. A rat model of proliferative vitreoretinopathy induced by dispase // 14 th EURETINA – London, United Kingdom, 2014

    15. Тихонович М., Иойлева Е., Гаврилова С. Разработка диспазной модели пролиферативной витреоретинопатии крыс // "Современные технологии в офтальмологии": "Современные технологии лечения витреоретинальной патологии". – 2014. – № 1. – С. 104–105.

    16. Тихонович М., Гаврилова С. Лорноксикам предупреждает развитие пролиферативной витреоретинопатии // Физиология кровообращения: VI Всероссийская с международным участием школа-конференция. – МАКС Пресс Москва, 2016. – С. 157–158.
Патенты РФ
    1. Тихонович. М.В., Лыскин П.В. Способ лечения оперированного незакрывшегося макулярного отверстия. Патент РФ на изобретение №2458656 от 20.08.2012 г.

    2. Тихонович М.В., Гаврилова С.А. Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии у крыс. Патент РФ на изобретение №2558991 от 10.08.2015 г.
Биографические данные
    Тихонович Марина Валерьевна, 1986 года рождения, в 2009 году с отличием окончила факультет фундаментальной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова по специальности «Лечебное дело».

    С 2009 по 2011 год проходила обучение в клинической ординатуре по специальности «офтальмология» на базе ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. С 2011 по 2012 год обучалась в очной аспирантуре на базе ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. С 2013 по 2016 год обучалась в очной аспирантуре на базе кафедры физиологии и общей патологии факультета фундаментальной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова.

    Автором опубликовано 23 печатных работы, 16 из которых по теме диссертации, получено два патента РФ на изобретение.

    За время обучения в аспирантуре автор принял участие в исполнении работ по четырем грантам, в одном из которых являлся руководителем проекта.

    Также за время прохождения аспирантуры Тихонович М.В. получила четыре награды, одна из которых – стипендия Правительства РФ.

Список сокращений

    ВПС – внутренний плексиформный слой

    ВЯС – внутренний ядерный слой

    мРНК – матричная РНК

    НГС – нейроганглионарный слой

    НПВС – нестероидное противовоспалительное средство

    НПС – наружный плексиформный слой

    НЯС – наружный ядерный слой

    ПВР – пролиферативная витреоретинопатия

    ПЦР – полимеразная цепная реакция

    ПЭС – пигментный эпителий сетчатки

    ЦОГ – циклооксигеназа

    ТА – триамцинолона ацетонид

    ЭС – эпителий слой

    BDNF - нейротрофический фактор роста

    NGF - фактор роста нервов

    VEGF - эндотелиальный фактор роста сосудов


Город: Москва – 2016
Темы: 14.01.07 – глазные болезни
Дата добавления: 01.12.2018 12:29:27, Дата изменения: 01.12.2018 12:29:28

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая» хирургия в рамках конференции  «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2018»«Живая» хирургия в рамках конференции «Современные технолог...

Сателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках XI Российского общенациональ...

Федоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2018 XV Всероссийская научно-практическ...

Актуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XIII Всероссийская научная...

Восток – Запад 2018  Международная конференция по офтальмологииВосток – Запад 2018 Международная конференция по офтальмологии

«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»«Живая хирургия» в рамках конференции «Белые ночи - 2018»

Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Между...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизонты -  2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизон...

Сателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКОСателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКО

VIII Евро-Азиатская конференция по офтальмохирургии (ЕАКО)VIII Евро-Азиатская конференция по офтальмохирургии (ЕАКО)

XVII Всероссийская школа офтальмологаXVII Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018 ХVI Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научн...

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Рейтинг@Mail.ru


Open Archives