Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Экспериментальные модели заболеваний сетчатки для разработки клеточных технологий (экспериментальные исследования)


1Центральная клиническая больница Российской академии наук
2Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца Росмедтехнологий
3Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук


Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН»,
Учреждение РАМН «НИИ глазных болезней РАМН»,
Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН, г. Москва
  
  Известно, что стратегия экспериментального изучения возможностей и эффективности современных способов лечения заболеваний сетчатки направлена на тщательный выбор экспериментальной модели заболевания и анализ ее адекватности поставленным задачам исследования. На это ориентированы программы поиска новых технологий, лекарств и способов их доклинического изучения. Поскольку наши экспериментальные исследования, по сути, посвящены доклиническим этапом изучения эффективности применения клеточной технологии трансплантации РПЭ при дегенеративнодистрофических заболеваниях глаз, то мы провели поиск уже известных моделей и разработали собственные модели, пригодные для этих целей. При выборе экспериментальных моделей дегенеративнодистрофических заболеваний сетчатки ориентировались на гистогенетическую приближенность к существующим в природе заболеваниям человека. В доступной литературе оказалось всего несколько моделей, используемых в аналогичных целях.
  Так, Korte с соавторами (1986) использовали системное внутривенное введение экспериментальным животным раствора NaIO3 из расчета дозы 35 мг/кг веса. В качестве экспериментальных животных служили мыши. После инъекции указанного раствора у животных к 14-му дню развилась ретинопатия с частичной атрофией РПЭ. Одним из недостатков этой модели является возможность самопроизвольной реставрации хориоретинального комплекса примерно к 21 дню без лечения. Это существенно затрудняет использование указанной модели для оценки эффективности трансплантации РПЭ в качестве терапевтической технологии.
  Wang с соавторами (1996) формировали модель жировой дистрофии хориоидеи и сетчатки с атрофией РПЭ у генно-модифицированных мышей, с дефицитом орнитин-дельта-аминотрансферазы. Этот фермент отвечает за переработку и усвояемость липидов разной плотности и молекулярного веса.
  Третьи авторы формировали модель атрофии хориокапилляров и РПЭ, нанося механическую травму, в ходе которой развивалась отслойка сетчатки и с депонированием в субретинальном пространстве обломков РПЭ. В качестве экспериментального животного предложены кролики.
  Kuwabara с соавт. (1981) использовали в этих же целях гидрохлорид L-орнитина, вводя его в полость стекловидного тела. В ответ на введение препарата развивался отек РПЭ, нарастающий в течение 4 часов после инъекции и нивелирующийся к 24-м часам. После этого развивалась атрофия РПЭ разной степени выраженности. К указанным изменениям позднее присоединялись дистрофия фоторецепторов. Модель развивалась одинаково хорошо у мышей, крыс, кроликов и обезьян.
  Как видно из приведенных публикаций, акцент воздействия при формировании модели дегенеративно-дистрофического заболевания сетчатки оказывался преимущественно на РПЭ. Используя этот принцип, мы поставили перед собой цель: разработать собственную модель атрофии РПЭ и хориокапиллярного слоя, а также модель атрофии диска зрительного нерва (ДЗН).
  
  Материал и методы. Экспериментальным животным формировали модели заболевания и лечили в полном соответствии с Резолюцией ARVO «По использованию животных в экспериментальных исследованиях», Принципами лечения лабораторных животных (публикация № 86-23 в NIH от 1985 г.) и ныне действующими правилами Good Clinical Practice (GCP).
  Модели атрофии РПЭ и ДЗН создавали на кроликах с помощью фотодинамического (ФДТ) повреждения сетчатки. Для этого животных предварительно сенсибилизировали фотосенсибилизатором (ФС) хлоринового ряда, в частности, радахлорином. Затем проводили ФДТ лазерным излучением соответствующей длиной волны, находящейся в максимуме поглощения ФС. Дозу излучения подбирали в ходе сеанса. Она была одинаковой на парных глазах. Предполагалось, что один глаз будет контролем — моделью заболевания, а на парном глазу будет выполняться имплантация донорского РПЭ на участок дефекта РПЭ реципиента.
  Выбор животных определялся размером глаза, что позволяло верифицировать ятрогенную зону на глазном дне с большей точностью и уверенностью.
  Предоперационная подготовка всех животных выполнена в едином алгоритме. Каждому кролику введено в ягодичную мышцу 0,5 мл/кг 5 % раствора кетамина и 0,5 мл/кг веса 2 % раствора рометара. В комбинации с местной инстилляционной анестезией 1 % раствором алкаина в конъюнктивальные своды устранялись любые болевые ощущения. Такая композиция препаратов позволяла достигать полной обездвиженности экспериментальных животных через 15–20 минут и поддерживать ее в течение 1,5–2 часов. В течение этого времени создавались все условия для проведения эксперимента.
  Суть эксперимента заключалась в дозированном воздействии на структуры глазного дна лазерным излучением длиной волны 669 нм различной мощности после предварительной фотосенсибилизации радахлорином в дозе 1,0 мг/кг веса. Размер светового пятна в фокальной плоскости также являлся постоянной величиной и составлял 2 мм в диаметре. Эффект контролировали визуально. Фокусировку лазерного воздействия осуществляли с помощью линзы Майнстера 130?. Мощность излучения была подобрана эмпирически. При этом ориентировались на скорость развития селективного фототромбоза в сосуде сетчатки или ожога сетчатки. Оптимальной оказалась мощность в 300 дж/см², в дальнейшем она стала величиной постоянной и не менялась в ходе эксперимента.
  
  Результаты и обсуждение. Известно, что хлорины обладают тропизмом к эндотелиальным клеткам сосудов, в которых накапливаются в первые 15–45 минут после системного введения. На основании этого факта было сделано предположение о том, что депонирование препарата в указанные сроки произойдет в сосудах хориоидеи или сетчатки, а избирательное дозированное облучение приведет к индукции фототромбозов, которые в ранние сроки приведут к экссудативной отслойке РПЭ или ишемии ЗН, а в более поздние сроки приведут к атрофии РПЭ и ДЗН.
  С помощью указанной выше методики было сформировано 24 модели у 12 кроликов. При этом в 12 случаях воздействие осуществляли в 1 мм над и под ДЗН. Получали на глазном дне экспериментального животного вначале очаг экссудативной отслойки РПЭ, переходящий в поздние сроки в атрофию РПЭ. Аналогичная картина глазного дна развивается при болезнях географической центральной ползучей атрофии РПЭ, а также при осложненной миопии высокой степени, врожденных абиотрофиях, возрастной форме макулярной дегенерации сетчатки и т. д.
  Воздействие на магистральные сосуды сетчатки в местах их выхода на ДЗН сопровождалось фототромбозами ЦВС с последующей атрофией ДЗН. Мы получили 12 моделей тромбоза ЦВС у 6 кроликов на парных глазах.
  
  Выводы. Разработанные модели заболеваний глазного дна легко воспроизводимы, пригодны для оценки эффективности клеточных технологий и могут быть рекомендованы в этих целях.


Страница источника: 249

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru