Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Способ количественной оценки эффективности клеточных технологий при репарации сетчатки


1Центральная клиническая больница Российской академии наук
2Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца Росмедтехнологий
3Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук


Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН»,
Учреждение РАМН «НИИ глазных болезней РАМН»,
Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН, г. Москва
  
   Основная цель клеточной терапии — замена, восстановление или увеличение сроков биологической функции поврежденной ткани или органа. Это достигается трансплантацией изолированных и специализированных клеток в целевой орган в достаточном «количестве и качестве», чтобы их выживание было достаточно долгим для восстановления функции. К настоящему моменту отсутствуют количественные методы оценки эффективности клеточных технологий. Между тем, они необходимы при подборе адекватной дозы клеточного трансплантата, изучении механизмов, сравнения эффективности разных подходов.
  
  Цель — разработка количественных методов оценки эффективности клеточной технологии трансплантации ретинального пигментного эпителия (РПЭ).
  
  Материал и методы. Формировали экспериментальную модель атрофии РПЭ на обоих глазах кроликов, используя метод фотодинамической терапии фотосенсиблизированных фотодитазином тканей глаза. Серия трансплантаций выполнена 3 кроликам (№ 1, 2, 4) (3 глаза) через 3,5 мес. после воспроизведения модели ретинального повреждения. Трансплантацию культивированных клеток 1 и 4 пассажей РПЭ взрослого человека проводили в субретинальное пространство инсулиновым шприцем в дозе 1 млн кл. в 0,02–0,03 мл физ. раствора. В качестве контроля служили парные глаза без введения РПЭ. Животных выводили из эксперимента на 14, 30 и 45 сутки после трансплантации РПЭ. Глаза энуклеировали и изучали морфологически.
  Энуклеированные глаза (n=6) префиксировали смесью параформальдегида и глютаральдегида по Карновскому, фиксировали в 1 % растворе тетраоксида осмия, заливали в аралдит. Готовили полутонкие (1 мкм) срезы. Окрашивали метиленовым синим — азуром II и основным фуксином.
  Трансплантат РПЭ человека в глазу кролика верифицировали иммунофлюоресцентным методом с первичными антителами Human nuclei (маркер ядер человека). Окрашивали каждый 10-й серийный срез (выполнено 10 срезов) глаза кролика. В качестве положительного контроля использовали криостатные срезы глаза взрослого человека.
  Количественная оценка терапевтического потенциала технологии трансплантации РПЭ проводили комплексно на основании сравнения в опыте и контроле следующих количественных показателей:
  — площади дефекта в наружном отделе фоторецепторов;
  — плотности фоторецепторов на единицу площади в зоне просмотра;
  — суммарной площади дефектов в наружном зернистом слое;
  — соотношения площади дефектов к плотности клеточных элементов в зоне воздействия;
  — плотности клеток в слое наружном зернистом на единицу площади.
  Таким образом, в целом использовали 5 количественных показателей, позволяющих дать оценку эффективности клеточной технологии.
  Площадь дефекта анализировали с помощью программы анализа эффективности ФДТ на фундус-камере. Индекс плотности фоторецепторов на единицу площади вычисляли колориметрически с помощью программы Photoshop следующим образом. Из микрофотографий одинакового увеличения контроля и опыта вырезались прямоугольные фрагменты одинакового размера с фоторецепторными отростками. Затем с помощью инструмента выделения «Волшебная палочка» с допуском 50 % выделяли пиксели составляющие изображение фоторецепторов и подсчитывали их количество, которое затем делили на количество пикселей всего изображения. Соответственно большему количеству пикселей, составляющих изображение фоторецепторов, соответствовал более высокий индекс плотности. Индекс дефектов в слое фоторецепторов вычислялся аналогичным образом, с той лишь разницей, что выделялись пиксели, составляющие изображение пустых пространств между фоторецепторами.
  Индекс суммарной площади дефектов в наружном зернистом слое оценивали аналогичным образом. Плотность клеток подсчитывали по количеству ядер на определенном отрезке сетчатки.
  
  Результаты и обсуждение. Результаты применения разработанного нами способа количественной оценки эффективности клеточной технологии трансплантации ретинального пигментного эпителия человека в глаз кролика с моделью атрофии РПЭ представлены в таблице.
  
  Выводы. Разработанный нами способ количественной оценки позволяет дать комплексную оценку эффективности клеточной технологии трансплантации РПЭ, сформировать доказательную базу на основе статистически достоверной разницы между опытом и контролем для подтверждения выводов, сопоставить результаты одной клеточной технологии с другой, осуществить подбор адекватной дозы вводимых клеток, проследить результаты в динамике. Она может быть рекомендована для практического применения.
  


Страница источника: 247
Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

«Живая» хирургия в рамках XVI Всероссийской конференции с международным участием «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии»«Живая» хирургия в рамках XVI Всероссийской конференции с ме...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Секундо В. Трансплантация рефрактивной лентикулы  используя VisuMax как способ лечения осложнений операции Lasik. ВидеопрезентацияСекундо В. Трансплантация рефрактивной лентикулы  используя ...

Симпозиум компании «Алкон» с демонстрацией показательных операцийСимпозиум компании «Алкон» с демонстрацией показательных операций

Осложненная катаракта: особенности хирургии и фармакотерапииОсложненная катаракта: особенности хирургии и фармакотерапии

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии XVI Всероссийская конференция с  международным участием Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Бактериальные инфекции глаза: взгляд офтальмолога и офтальмохирургаБактериальные инфекции глаза: взгляд офтальмолога и офтальмо...

Офтальмология: диагностика проблем, пути решенияОфтальмология: диагностика проблем, пути решения

Глаукома:теория и практика. Новый взглядГлаукома:теория и практика. Новый взгляд

Актуальные вопросы в лечении и профилактике ВМДАктуальные вопросы в лечении и профилактике ВМД

Современные аспекты и новые возможности ОКТСовременные аспекты и новые возможности ОКТ

Патология глазной поверхности и глаукома. Новые возможности и новые перспективы в решении «старых» проблемПатология глазной поверхности и глаукома. Новые возможности ...

Новейшие достижения в офтальмологииНовейшие достижения в офтальмологии

X Съезд офтальмологов России X Съезд офтальмологов России

Иммуномодулирующая и противовирусная терапия при лечении воспалительных заболеваний глаз различной этиологииИммуномодулирующая и противовирусная терапия при лечении вос...

«Нова Медика»: новые горизонты офтальмологии«Нова Медика»: новые горизонты офтальмологии

Рейтинг@Mail.ru