Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Способ количественной оценки эффективности клеточных технологий при репарации сетчатки


1Центральная клиническая больница Российской академии наук
2Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца Росмедтехнологий
3Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук


Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН»,
Учреждение РАМН «НИИ глазных болезней РАМН»,
Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН, г. Москва
  
   Основная цель клеточной терапии — замена, восстановление или увеличение сроков биологической функции поврежденной ткани или органа. Это достигается трансплантацией изолированных и специализированных клеток в целевой орган в достаточном «количестве и качестве», чтобы их выживание было достаточно долгим для восстановления функции. К настоящему моменту отсутствуют количественные методы оценки эффективности клеточных технологий. Между тем, они необходимы при подборе адекватной дозы клеточного трансплантата, изучении механизмов, сравнения эффективности разных подходов.
  
  Цель — разработка количественных методов оценки эффективности клеточной технологии трансплантации ретинального пигментного эпителия (РПЭ).
  
  Материал и методы. Формировали экспериментальную модель атрофии РПЭ на обоих глазах кроликов, используя метод фотодинамической терапии фотосенсиблизированных фотодитазином тканей глаза. Серия трансплантаций выполнена 3 кроликам (№ 1, 2, 4) (3 глаза) через 3,5 мес. после воспроизведения модели ретинального повреждения. Трансплантацию культивированных клеток 1 и 4 пассажей РПЭ взрослого человека проводили в субретинальное пространство инсулиновым шприцем в дозе 1 млн кл. в 0,02–0,03 мл физ. раствора. В качестве контроля служили парные глаза без введения РПЭ. Животных выводили из эксперимента на 14, 30 и 45 сутки после трансплантации РПЭ. Глаза энуклеировали и изучали морфологически.
  Энуклеированные глаза (n=6) префиксировали смесью параформальдегида и глютаральдегида по Карновскому, фиксировали в 1 % растворе тетраоксида осмия, заливали в аралдит. Готовили полутонкие (1 мкм) срезы. Окрашивали метиленовым синим — азуром II и основным фуксином.
  Трансплантат РПЭ человека в глазу кролика верифицировали иммунофлюоресцентным методом с первичными антителами Human nuclei (маркер ядер человека). Окрашивали каждый 10-й серийный срез (выполнено 10 срезов) глаза кролика. В качестве положительного контроля использовали криостатные срезы глаза взрослого человека.
  Количественная оценка терапевтического потенциала технологии трансплантации РПЭ проводили комплексно на основании сравнения в опыте и контроле следующих количественных показателей:
  — площади дефекта в наружном отделе фоторецепторов;
  — плотности фоторецепторов на единицу площади в зоне просмотра;
  — суммарной площади дефектов в наружном зернистом слое;
  — соотношения площади дефектов к плотности клеточных элементов в зоне воздействия;
  — плотности клеток в слое наружном зернистом на единицу площади.
  Таким образом, в целом использовали 5 количественных показателей, позволяющих дать оценку эффективности клеточной технологии.
  Площадь дефекта анализировали с помощью программы анализа эффективности ФДТ на фундус-камере. Индекс плотности фоторецепторов на единицу площади вычисляли колориметрически с помощью программы Photoshop следующим образом. Из микрофотографий одинакового увеличения контроля и опыта вырезались прямоугольные фрагменты одинакового размера с фоторецепторными отростками. Затем с помощью инструмента выделения «Волшебная палочка» с допуском 50 % выделяли пиксели составляющие изображение фоторецепторов и подсчитывали их количество, которое затем делили на количество пикселей всего изображения. Соответственно большему количеству пикселей, составляющих изображение фоторецепторов, соответствовал более высокий индекс плотности. Индекс дефектов в слое фоторецепторов вычислялся аналогичным образом, с той лишь разницей, что выделялись пиксели, составляющие изображение пустых пространств между фоторецепторами.
  Индекс суммарной площади дефектов в наружном зернистом слое оценивали аналогичным образом. Плотность клеток подсчитывали по количеству ядер на определенном отрезке сетчатки.
  
  Результаты и обсуждение. Результаты применения разработанного нами способа количественной оценки эффективности клеточной технологии трансплантации ретинального пигментного эпителия человека в глаз кролика с моделью атрофии РПЭ представлены в таблице.
  
  Выводы. Разработанный нами способ количественной оценки позволяет дать комплексную оценку эффективности клеточной технологии трансплантации РПЭ, сформировать доказательную базу на основе статистически достоверной разницы между опытом и контролем для подтверждения выводов, сопоставить результаты одной клеточной технологии с другой, осуществить подбор адекватной дозы вводимых клеток, проследить результаты в динамике. Она может быть рекомендована для практического применения.
  


Страница источника: 247

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru