Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Изучение эффективности репарации сетчатки с помощью технологии трансплантации культивированного ретинального пигментного эпителия (экспериментальные исследования)


1Центральная клиническая больница Российской академии наук
2Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца Росмедтехнологий
3Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук


Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН»,
Учреждение РАМН «НИИ глазных болезней РАМН»,
Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН, г. Москва
  
  Причиной многих заболеваний сетчатки, приводящих к слепоте, является дисфункция ретинального пигментного эпителия (РПЭ). Она приводит к гибели фоторецепторов, нейронов сетчатки и, в результате, к потере зрения. Принимая a priore ключевую роль РПЭ в обеспечении сохранности и жизнеспособности всей сетчатки, некоторые исследователи считают, что пересадка РПЭ может решить проблему. В эксперименте на мутантных крысах RCS (отличаются ранней дисфункцией РПЭ, приводящей к гибели фоторецепторов) показано, что трансплантация РПЭ позволяет сохранить зрение. Трансплантат РПЭ взрослого человека встраивается в монослой РПЭ глаза крысы-реципиента и начинает функционировать, образуя функциональные контакты. Трансплантат обеспечивает сетчатку трофическими факторами и факторами роста без провокации иммунной реакции и образования злокачественных опухолей.
  При выборе источника РПЭ предпочтение отдано взрослому РПЭ. Трансплантация культур из эмбрионального и взрослого РПЭ человека пациентам с диагнозом ВМД показала, что трансплантаты взрослого РПЭ сохраняют жизнеспособность, активно пролиферируют, замещая погибшие клетки РПЭ. Трансплантаты эмбрионального РПЭ отличаются слабой выживаемостью и не встраиваются в слой РПЭ реципиента. Авторы объяснили это тем, что клетки эмбрионального РПЭ не имеют необходимого набора адгезионных рецепторов. Многие ученые утверждают, что трансплантация РПЭ в ближайшем будущем станет основным методом клеточной терапии различных заболеваний глаз.
  
  Цель — изучить механизмы репарации сетчатки при трансплантации культивированного взрослого РПЭ в глаз кролика.
  
  Материал и методы. Формировали экспериментальную модель атрофии РПЭ на обоих глазах кроликов, используя метод фотодинамической терапии фотосенсиблизированных фотодитазином тканей глаза. Серия трансплантаций выполнена 3 кроликам (№ 1, 2, 4) (3 глаза) через 3,5 мес. после воспроизведения модели ретинального повреждения. Трансплантацию культивированных клеток 1-го и 4-го пассажей РПЭ взрослого человека проводили в субретинальное пространство инсулиновым шприцем в дозе 1 млн. кл. в 0,02–0,03 мл физ. раствора. В качестве контроля служили парные глаза без введения РПЭ. Животных выводили из эксперимента на 14, 30 и 45 сутки после трансплантации РПЭ. Глаза энуклеировали и изучали морфологически.
  Энуклеированные глаза (n=6) префиксировали смесью параформальдегида и глютаральдегида по Карновскому, фиксировали в 1 % растворе тетраоксида осмия, заливали в аралдит. Готовили полутонкие (1 мкм) срезы. Окрашивали метиленовым синим-азуром II и основным фуксином.
  Трансплантат РПЭ человека в глазу кролика верифицировали иммунофлюоресцентным методом с первичными антителами Human nuclei (маркер ядер человека). Окрашивали каждый 10-й серийный срез (выполнено 10 срезов) глаза кролика. В качестве положительного контроля использовали криостатные срезы глаза взрослого человека.
  Эффективность трансплантации РПЭ как лечебной клеточной технологии оценивали морфологически. Сравнивали качественные морфологические изменения, развившиеся в контроле и опыте на одном сроке наблюдения. Качественные морфологические изменения анализировали по:
  — структурным изменениям в слое фоторецепторов; — наличию дефектов в слое фоторецепторов;
  — изменению структурности наружного зернистого слоя;
  — состоянию мембраны Бруха в зоне вмешательства;
  — состоянию хориоидеи.
  
  Результаты и обсуждение. В контроле к 30му дню после сеанса ФДТ завершалось формирование модели. На световом уровне в местах лазерного воздействия идентифицировались большие участки дефектов РПЭ. Клеточные элементы, примыкающие к зоне воздействия, претерпевали дегенеративные изменения в виде кист и зон некроза. В субретинальном пространстве выявлялась россыпь обломков клеток РПЭ вместе с пигментными шлаками. Мембрана Бруха (МБ) на большем протяжении зоны ФДТ дифференцировалась слабо, но оставалась сохранной вне зоны воздействия. Хориокапилляры в центре дефекта находились в спавшемся состоянии. Местами выявляли тромбоз хориокапилляров и крупных венул. Эндотелиальные клетки в сосудах отсутствовали. Фоторецепторный слой претерпевал дегенеративно-дистрофические изменения в областях, примыкающих к зоне ФДТ. Они проявлялись участками разрежения (снижения плотности фоторецепторов на единицу площади) и зонами дефектов. В слое ганглиозных клеток развивался кариопикноз. Мюллеровские клетки при этом вытягивались в виде «колонн».
  В контроле к 60 суткам после ФДТ (или 30-е сутки после трансплантации РПЭ в опытные глаза) наблюдали картину полной атрофии РПЭ в зоне ФДТ без увеличения площади дефекта. Патоморфологические изменения в слое фоторецепторов и слое ганглиозных клеток при этом нарастали. Процессов регенерации не наблюдали.
  В опытных глазах кролика, энуклеированных на 30-е и 45-е сутки после трансплантации, наблюдали РПЭ человека в виде беспигментных клеток, лежащих в субретинальном пространстве и формирующих монослой равномерной толщины поверх собственного РПЭ реципиента. Морфологически РПЭ человека отличался от кроличьего размерами ядер и клеток, ядерно-цитоплазматическим соотношением, более слабой окраской при окрашивании толуидиновым-синим, отсутствием пигментации и признаков меланосом.
  Сравнительный аспект морфологического анализа хориоретинального комплекса в зоне воздействия показал, что, благодаря наличию псевдомембранозной структуры, формирующейся в основании имплантированного РПЭ, удается сохранить структурность сетчатки в целом, и ее фоторецепторный слой, в частности. Причем, фоторецепторы дифференцируются более отчетливо и представляются сохранными в большей степени, нежели в контроле. В слое фоторецепторов выявляются единичные клетки РПЭ донора, встроенные в щелевидные промежутки между наружными члениками. Внутренние членики фоторецепторов, при этом, остаются не измененными, интимно примыкают к наружному зернистому слою. К 45 суткам ядра клеток РПЭ донора практически уже не дифференцируются, хотя клетки еще лежат на имитации мембраны Бруха.
  
  Выводы. Морфологическая оценка эффективности технологии трансплантации культивированного РПЭ в репарации сетчатки позволяет считать, что имеет место положительный лечебный эффект, направленный на поддержание архитектоники комплекса РПЭ-сетчатка, замедление процессов гибели фоторецепторов. В целом это должно способствовать замедлению естественного течения дегенеративно-дистрофических заболеваний сетчатки.
  Цель любой клеточной терапии заключается в замене, восстановлении, продлении или увеличении биологической функции поврежденной ткани. Это достигается трансплантацией изолированных и специализированных клеток в целевой орган в достаточном «количестве и качестве», чтобы их выживание было достаточно долгим для восстановления функции. В целом представленные результаты свидетельствуют о том, что используемая нами технология пригодна для этих целей.


Страница источника: 245
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru