Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Методика получения культуры клеток ретинального пигментного эпителия


1Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук
2Центральная клиническая больница Российской академии наук


¹ Учреждение РАН «Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН»,
² Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН», г. Москва
  
  Клеточно-регенеративная терапия возрастной макулярной дегенерации рассматривается как возможное решение проблемы сохранности и жизнеспособности сетчатки. Одно из перспективных направлений клеточно-регенеративной терапии — трансплантация ретинального пигментного эпителия (РПЭ). В связи с чем, поиск технологий выделения и культивирования РПЭ является актуальной задачей современности.
  
  Цель — разработка методики выделения и получения первичных культур клеток РПЭ из донорских аутопсийных глаз взрослого человека.
  
  Материал и методы. Глазные яблоки 27 доноров энуклеировали через 20–24 ч после их exitus. Возраст доноров варьировался от 24 до 73 лет. Клетки РПЭ культивировали в пластиковых флаконах площадью 25 см².
  Глазные яблоки освобождали от остатков конъюнктивы и теноновой оболочки, промывали однократно в 70 % спирте и трижды в холодном растворе Хэнкса с добавлением антибиотиков. Передний сегмент глаза удаляли, выполняя круговой разрез позади зубчатой линии, определяемой как граница между темным и светлым участками глаза. Стекловидное тело и нейральный отдел сетчатки отделяли от РПЭ и удаляли, подрезая нейральную сетчатку в области зрительного нерва. Выделенную глазную чашу наполняли холодным раствором Хэнкса с ЭДТА. Спустя 10–15 минут начинали процесс сборки клеток. На время изоляционной процедуры глазную чашу помещали в раствор Хэнкса и держали на льду. Визуальный контроль процесса осуществляли с помощью бинокулярной лупы.
  Клетки РПЭ осторожно отделяли от мембраны Бруха, проводя по слою и засасывая наконечником дозированной пипетки в 200 мкл. Собранные клетки центрифугировали 5 мин при 600 об/мин и ресуспендировали в полных культуральных средах двух составов. Клеточную суспензию одного глазного яблока из каждой донорской пары глаз ресуспендировали в среде №1, состоящей из питательной среды DMEM/F12, дополненной 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), добавки N2 и оФРФ. Клеточную суспензию, полученную из второго глазного яблока того же донора ресуспендировали в среде №2, состоящей из питательной среды DMEM/F12, дополненной 10 % ЭТС.
  
  Результаты и обсуждение. Использование ростовой среды №1 позволило получить стабильный конфлюэнтный монослой клеток РПЭ. Морфологические исследования культивированного РПЭ свидетельствовали о его жизнеспособности и пригодности к трансплантации. Количественный выход РПЭ при использовании выше указанной методики культивирования от культуры к культуре был стабилен, а объем РПЭ был достаточен для проведения экспериментальных или клинических исследований.
  
  Выводы. Разработанная методика выделения РПЭ взрослого человека позволяет получать клетки РПЭ в стабильном объеме, достаточном для проведения экспериментальных исследований. Описанная методика может быть рекомендована для получения РПЭ при подготовке к последующей трансплантации.


Страница источника: 244

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru