Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Методика получения культуры клеток ретинального пигментного эпителия


1Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук
2Центральная клиническая больница Российской академии наук


¹ Учреждение РАН «Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН»,
² Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН», г. Москва
  
  Клеточно-регенеративная терапия возрастной макулярной дегенерации рассматривается как возможное решение проблемы сохранности и жизнеспособности сетчатки. Одно из перспективных направлений клеточно-регенеративной терапии — трансплантация ретинального пигментного эпителия (РПЭ). В связи с чем, поиск технологий выделения и культивирования РПЭ является актуальной задачей современности.
  
  Цель — разработка методики выделения и получения первичных культур клеток РПЭ из донорских аутопсийных глаз взрослого человека.
  
  Материал и методы. Глазные яблоки 27 доноров энуклеировали через 20–24 ч после их exitus. Возраст доноров варьировался от 24 до 73 лет. Клетки РПЭ культивировали в пластиковых флаконах площадью 25 см².
  Глазные яблоки освобождали от остатков конъюнктивы и теноновой оболочки, промывали однократно в 70 % спирте и трижды в холодном растворе Хэнкса с добавлением антибиотиков. Передний сегмент глаза удаляли, выполняя круговой разрез позади зубчатой линии, определяемой как граница между темным и светлым участками глаза. Стекловидное тело и нейральный отдел сетчатки отделяли от РПЭ и удаляли, подрезая нейральную сетчатку в области зрительного нерва. Выделенную глазную чашу наполняли холодным раствором Хэнкса с ЭДТА. Спустя 10–15 минут начинали процесс сборки клеток. На время изоляционной процедуры глазную чашу помещали в раствор Хэнкса и держали на льду. Визуальный контроль процесса осуществляли с помощью бинокулярной лупы.
  Клетки РПЭ осторожно отделяли от мембраны Бруха, проводя по слою и засасывая наконечником дозированной пипетки в 200 мкл. Собранные клетки центрифугировали 5 мин при 600 об/мин и ресуспендировали в полных культуральных средах двух составов. Клеточную суспензию одного глазного яблока из каждой донорской пары глаз ресуспендировали в среде №1, состоящей из питательной среды DMEM/F12, дополненной 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), добавки N2 и оФРФ. Клеточную суспензию, полученную из второго глазного яблока того же донора ресуспендировали в среде №2, состоящей из питательной среды DMEM/F12, дополненной 10 % ЭТС.
  
  Результаты и обсуждение. Использование ростовой среды №1 позволило получить стабильный конфлюэнтный монослой клеток РПЭ. Морфологические исследования культивированного РПЭ свидетельствовали о его жизнеспособности и пригодности к трансплантации. Количественный выход РПЭ при использовании выше указанной методики культивирования от культуры к культуре был стабилен, а объем РПЭ был достаточен для проведения экспериментальных или клинических исследований.
  
  Выводы. Разработанная методика выделения РПЭ взрослого человека позволяет получать клетки РПЭ в стабильном объеме, достаточном для проведения экспериментальных исследований. Описанная методика может быть рекомендована для получения РПЭ при подготовке к последующей трансплантации.


Страница источника: 244

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru