Партнеры


Монолит Optec R-optics Valeant thea Allergan Фокус santen tradomed sentiss sentiss



Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 29 2018
№ 28 2017
№ 27 2017
№ 26 2017
№ 25 2017
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 1 2018 г.
№ 4 2017 г.
№ 3 2017 г.
№ 2 2017 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 1 2018 г.
№ 4 2017 г.
№ 3 2017 г.
№ 2 2017 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 1 2018
№ 4 2017
№ 3 2017
№ 2 2017
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 1 2018
№ 7 2017
№ 6 2017
№ 5 2017
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2018
Выпуск 3. 2018
Выпуск 2. 2018
Выпуск 1. 2018
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (45) 2018
№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№1 (38) Март 2018
№5 (37) Декабрь 2017
№4 (36) Октябрь 2017
№3 (35) Август 2017
№2 (34) Май 2017
№1 (33) Март 2017
....


facebooklogo     youtubelogo



Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Количественная оценка секреции VEGF и PEDF клетками ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека в культуре


1Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук
2Центральная клиническая больница Российской академии наук


¹ Учреждение РАН «Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН»,
² Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН», г. Москва
  
  Дисбаланс про- и антиангиогенных факторов играет важную роль в развитии и прогрессировании ряда дегенеративно-дистрофических заболеваний глаз, включая возрастную макулярную дегенерацию (ВMД). Ключевым проангиогенным фактором, запускающим патологический неоангиогенез признан фактор роста эндотелия сосудов (VEGF). Контроль проангиогенной активности VEGF осуществляет другой пептид: фактор роста пигментного эпителия (PEDF). По влиянию на эндотелиальные клетки сосудов сетчатки эти факторы роста выступают как антагонисты. VEGF, стимулирует пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток, предотвращает их апоптоз, оказывая проангиогенный эффект. PEDF ингибирует VEGF-индуцированную активность эндотелиальных клеток, подавляя передачу сигналов в PI3 K/Akt пути. Показано, что увеличение уровня VEGF и/или уменьшение уровня PEDF в стекловидном теле и во влаге передней камеры коррелирует с прогрессированием ВМД и ПДР. При этом диапазон вариабельности показателей их продукции в норме точно не установлен. Между тем, именно эти параметры показывают отклонения в ту или иную сторону и определяют вид антиангиогенной терапии: блокирование/подавление VEGF-зависимого сигнального пути ангиогенеза или замещение дефицита антиангиогенных факторов роста.
  Установлено, что основными клеткамипродуцентами VEGF и PEDF является ретинальный пигментный эпителий (РПЭ). Признание этого факта a priore является одним из аргументов в пользу предположения, что трансплантация РПЭ может решить проблему анатомической, морфологической и функциональной сохранности сетчатки при AMD. Известно, что секреция VEGF и PEDF в здоровом глазе осуществляется на противоположных сторонах клеток РПЭ: VEGF секретируется на базальной стороне, а PEDF — на апикальной стороне. Количественная оценка секреции VEGF и PEDF при культивировании клеток РПЭ представляет научно-практический интерес в аспекте изучения их баланса, или вариабельности этих показателей в условиях нормального поддержания жизнедеятельности РПЭ.
  
  Цель — количественная оценка секреции VEGF и PEDF клетками РПЭ взрослого человека в условиях культивирования.
  
  Материал и методы. Секрецию VEGF и PEDF изучали в кондиционированных средах первичных культур и культур 1-го и 2-го пассажей клеток РПЭ. Для получения адгезивных культур клетки РПЭ из аутопсийного материала от 5 доноров в возрасте от 32 до 58 лет с неизвестным офтальмологическим анамнезом культивировали в пластиковых флаконах площадью 25 см². В среду для культивирования (DMEM/F12) добавляли 10 % эмбриональную телячью сыворотку, N2, оФРФ и пенициллинстрептомицин до достижения клеточными культурами конфлюэнтного монослоя. Перед пассированием РПЭ клеточные культуры переводили на 48 ч на бессывороточную среду (DMEM/F12 с добавкой N2, оФРФ и пенициллина-стрептомицина). Супернатанты собирали дважды: перед переводом клеточной культуры РПЭ на бессывороточную среду (синоним: кондиционированная сывороточная среда) в течение 72 ч (КСС), и перед непосредственным пассированием клеточной культуры РПЭ (синоним: кондиционированная бессывороточная среда) в течение 48 ч (КБС). Супернатанты забирали, центрифугировали, аликвотировали и хранили при температуре — 80 °C до количественной оценки факторов роста.
  Для количественного определения PEDF в КСС и КБС использовали твердофазный иммуноферментный анализ. Сэндвич-анализ проводили при помощи набора «Human PEDF ELISA» (BioVendor, Чехия), чувствительного до уровня 0,045 нг/мл, в соответствии с инструкцией производителя без этапа разведения образцов. Образцы оценивали в дубликатах. Измерение оптической плотности образцов проводили при длине волны 450 нм с использованием референс-светофильтра с длиной волны 630 нм на микропланшетном фотометре StatFax2100 (Awareness Technology INC, США).
  VEGF в КБС анализировали методом восьмицветной проточной цитометрии на приборе «FACS Canto-II» (Becton Dickinson, США).
  
  Результаты и обсуждение. Уровень PEDF в КСС первичных культур и культур 1-го и 2-го пассажей клеток РПЭ составил: 6,0±1,3; 5,5±2,1 и 5,2±2,0 нг/мл, соответственно. Уменьшение концентрация PEDF в супернатантах культур клеток РПЭ ассоциировалось со снижением их пролиферативной активности и завершением экспоненциальной фазы роста культуры, а также с отсутствием сыворотки в ростовой среде. Увеличение секреции PEDF, напротив, отмечалось при переводе клеточных культур с сывороточной среды на бессывороточную. Так, уровень PEDF в КБС первичных культур и культур 1-го и 2-го пассажей клеток РПЭ составил: 7,20±0,60; 5,50±2,30 и 6,75±0,95 нг/мл, соответственно.
  Уровень VEGF в КБС первичных культур и культур 1-го и 2-го пассажей сильно варьировал и составил: 578,99±514,54; 330,17±268,74 и 402,55±263,08 пг/мл, соответственно.
  
  Выводы. В условиях культивирования клетки РПЭ взрослого человека сохраняют способность к синтезу и секреции PEDF и V EGF.
  Увеличение уровня секреции PEDF ассоциируется со снижением пролиферативной активности клеток РПЭ и наблюдается в конце экспоненциальной фазы роста культуры. Снижение секреции PEDF отмечается в клеточных культурах РПЭ по мере пассирования, т. е. со старением культуры.
  Концентрация VEGF в супернатантах первичных культур и культур 1-го и 2-го пассажей клеток РПЭ была умеренной, ее значения были сопоставимы с литературными данными по уровню VEGF в стекловидном теле больных с непролиферативной стадией ДР. По мере пассирования клеточных культур РПЭ прослеживалась тенденция к снижению уровня секреции VEGF.
  Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (ГК № 11-04-00510) и Министерства образования и науки Российской Федерации (ГК № 16.512.11.2158).


Страница источника: 243

Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2018 Сателлитные симпозиумы в рамках XXIV Между...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизонты -  2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Невские горизон...

Сателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКОСателлитные симпозиумы в рамках VIII ЕАКО

VIII Евро-Азиатская конференция по офтальмохирургии (ЕАКО)VIII Евро-Азиатская конференция по офтальмохирургии (ЕАКО)

XVII Всероссийская школа офтальмологаXVII Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018 ХVI Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научн...

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Рейтинг@Mail.ru


Open Archives