Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Морфологическая характеристика ретинального пигментного эпителия, культивируемого in vitro, как источника клеточной репарации


1Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук
2Центральная клиническая больница Российской академии наук


Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН,
Учреждение РАН «Центральная клиническая больница РАН», г. Москва
  
  Трансплантология сегодня — одно из лидирующих направлений медицины. В офтальмологии клеточные технологии на основе спектра стволовых и малодифференцированных клеток мало изучены и практически не реализованы. Между тем, в перспективе они могут быть использованы для решения проблемы репарации сетчатой оболочки глаза. Многие заболевания глаза, приводящие к потере зрения, такие как пигментный ретинит, возрастная макулодистрофия, диабетическая ретинопатия и глаукома, сопровождаются гибелью нейронов сетчатки. В связи с чем, поиск источника клеточной регенерации является чрезвычайно актуальной задачей современности.
  Совсем недавно считали, что нейрональные клетки центральной нервной системы (ЦНС) млекопитающих в период эмбрионального и раннего постнатального развития за счет экспрессии большого количества морфогенетически важных факторов имеют высокий регенеративный потенциал. В ходе дифференцировки нервной ткани эти факторы исчезают, а способность к регенерации утрачивается. Сегодня взгляды на регенерацию нервных клеток кардинально изменились. В мозге и сетчатке взрослых млекопитающих, к которым относится и человек, были выявлены клетки, обладающие свойствами стволовых клеток. В сетчатке свойствами стволовости наделяют ретинальный пигментный эпителий (РПЭ). Терапевтический потенциал РПЭ представляет особый интерес. Биологическая эволюция приспособила его для защиты сетчатки. Нейропротекторные свойства РПЭ осуществляет, экспрессируя ряд специфических факторов.
  
  Цель — изучить характеристику РПЭ, культивируемого in vitro, как источника клеточной репарации сетчатки.
  
  Материал и методы. Источником РПЭ служил аутопсийный материал. Глазные яблоки обрабатывались через 12–48 часов после смерти доноров. После процедуры извлечения РПЭ переносили в стерильную пробирку, пипетировали и центрифугировали 5 минут при 600 об/мин до осаждения клеток. Клетки ресуспендировали в ростовой среде, состоящей из DMEM/F12, 100 U/ml пенициллина и 100 μg/ml стрептомицина (Sigma, USA). Далее РПЭ равномерно распределяли в 1–2 стерильных пластиковых флаконах площадью 25 см². Первичную культуру РПЭ выращивали на двух средах DMEM/F12 и DMEM/ F12 с добавлением антибиотиков (см выше). Культуры культивировали при 37 °С, влажности воздуха 95 %, 5 %СО2. Через 3–4 дня среду аспирировали и удаляли. Клеточное прикрепление и образование колоний контролировали методом фазовоконтрастной микроскопии. Прикрепление клеток продолжалось в течение 2 недель.
  
  Результаты и обсуждение. Свежевыделенные эксплантаты РПЭ состояли из небольших групп и единичных клеток полигональной формы, а также крупных густо пигментированных эпителиоидных клеток.
  Жизнеспособные клетки РПЭ начинали делиться и создавать пигментированные первичные колонии сразу после прикрепления. Процесс адгезии клеток начинался в конце первых суток (24 часа) и продолжался до двух недель. Распластываясь на дне пластикового флакона, крупные клетки РПЭ принимали плоскую и полигональную форму. Гранулы пигмента собирались глыбками вокруг ядра, содержащего 1 или 2 ядрышка. Цитоплазма на периферии была тонкой и относительно прозрачной. Межклеточные границы были резко очерчены. Деление РПЭ сопровождалось измельчением размеров клеток и депигментацией. По мере созревания колоний в клетках полностью пропадал пигмент.
  На рост колоний играл факт плотности посадки: при высокой плотности — конфлюэнтный монослой образовывался быстро, при низкой — рост замедлялся. В первом случае клетки приобретали гексагональную форму; а во втором — веретенообразную с отростками или без них. Клетки РПЭ удлинялись при большем пространстве для роста. Достижение конфлюэнтности монослоем РПЭ ассоциировалось с гексагональной формой, характерной для эпителиоподобного типа клеток. Деление и миграцию РПЭ фиксировали исключительно по периферии колонии. В центре колонии клетки оставались статичными и не пролиферировали, т. е. РПЭ дедифференцировался. На скорость роста и плотность РПЭ в пласте влияли добавления в питательную среду различных ростовых факторов. В среде с N2 и bFGF колонии были более плотными и многочисленными по сравнению с культурами без них. При плотной посадке клеток РПЭ наблюдали некую многослойность: один пласт клеток начинал нарастать на другой.
  
  Выводы. Нативные клетки РПЭ при культивировании способны формировать неподвижный монослой, сохраняя способность к делению. В условиях in vitro РПЭ дедифференцируется и трансформируется, обретая округлую/веретенообразную клеточную форму, способность к активному делению и миграции, процесс сопровождается утратой способности синтеза пигмента. Таким образом, в зависимости от условий культивирования in vitro РПЭ может менять свою дифференцировку, переходя из состояния эпителиальной дифференцировки в дедифференцированное состояние и обратно. В сравнении с дифференцированными клетками дедифференцированный РПЭ обладает большими потенциями: он более активно пролиферирует, мигрирует, чрезвычайно пластичен. т. е. он может служить источником клеточной репарации сетчатки при повреждении ее различными патологическими процессами.


Страница источника: 241

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru