Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Индуцирующее влияние микроокружения на морфофункциональный статус мононуклеаров и фибробластов


1Сибирский государственный медицинский университет Минздрава РФ

Цель — в эксперименте in vitro изучить влияние направленного движения жидкости на морфофункциональный статус клеток, обеспечивающих развитие макрофагальной и фибробластической фаз воспалительно-репаративной реакции.
Материал и методы. Разработано устройство — биореактор in vitro, позволяющее моделировать движение питательной среды, сходное с движением жидкости в полости глазного яблока. Устройство представляет собой замкнутую систему с камерой, содержащей полупроницаемый фильтр. Система предварительно заполнялась питательной средой, содержащей 200,0 мл питательной среды ДМЕМ в модификации Iscove или RPMI 1640 и 4% раствор гентамицина (из расчета 0,02 мл на 10,0 мл среды). Благодаря работе роликового насоса в биореакторе создавалось равномерное направленное движение питательной среды со скоростью 2,1-2,4 мм³/мин.
Выполнена серия экспериментов по культивированию клеток мононуклеарной и фибробластической популяций в различных условиях. В 1-й серии эксперимента объектом исследования служили аутологичные мононуклеары крови здоровых доноров-добровольцев, выделенные методом фракционирования на градиенте плотности. Полученные клетки доводили питательной средой до конечной концентрации 3?106 нуклеаров/мл и размещали на фильтре.
Во 2-й серии объектом исследования была культура фибробластов легкого человека (ООО «Банк стволовых клеток», Томск). Клетки свободны от посторонних вирусных (ВИЧ, гепатит, герпес и др.) и бактериальных агентов (сифилис, микоплазмы, хламидии и др.). Жизнеспособность клеток, определяемая согласно ISO 10993-5 по исключению окрашивания в тесте с 0,4% трипановым синим, составляла 91- 93%. Культуру фибробластов человека после 3-4 пассажей в концентрации 5?104 клеток/мл вводили в камеру и помещали на фильтр. Первичную клеточную культуру инкубировали при постоянном движении питательной среды в течение 24 и 48 час.
В качестве контроля клетки культивировали на полупроницаемом фильтре, помещенном в чашку Петри с питательной средой при строгом соблюдении температурного режима (37° С), содержания СО2 (5-7%) и уровня влажности (100%).
Результаты. При проточном культивировании (биореактор in vitro) мононуклеаров крови получены следующие результаты. Через 24 час от начала эксперимента в клетках отмечалась высокая активность α-нафтилацетатэстеразы (63,81±1,034), которая блокировалась фторидом натрия. Щелочная фосфатаза в культивируемых клетках не выявлялась.
Спустя 48 час в мононуклеарах отмечалось повышение активности α-нафтилацетатэстеразы (69,17±1,26) по сравнению с исходными показателями и клетками, культивируемыми в стандартных условиях (pU<0,01). При проведении реакции с фторидом натрия на фильтре обнаруживались единичные элементы, в которых активность неспецифической эстеразы (64,93±1,21) не подавлялась, а также выявлялась активность щелочной фосфатазы.
При культивировании мононуклеаров крови в стационарных условиях в клетках отмечалась умеренная активность α-нафтилацетатэстеразы, которая постепенно повышалась в процессе культивирования (pU<0,05). Активность неспецифической эстеразы ингибировалась фторидом натрия. Щелочная фосфатаза в культивируемых клетках не выявлялась.
При проточном культивировании фибробластов были получены следующие результаты. Через 24 час от начала эксперимента цитохимически в фибробластах, культивируемых в проточных условиях, отмечалась умеренная активность α-нафтилацетатэстеразы (22,56±0,90) и щелочной фосфатазы (10,23±1,05).
Спустя 48 час в описываемых клетках отмечалось повышение активности обоих ферментов по сравнению с исходными показателями и клетками, культивируемыми в стандартных условиях (pZ<0,01). При этом уровень α-нафтилацетатэстеразы составлял 26,98±0,87, щелочной фосфатазы — 14,67±1,21.
При культивировании фибробластов в стационарных условиях на протяжении всей серии экспериментов цитохимически в клетках отмечалась незначительная активность α-нафтилацетатэстеразы, которая постепенно повышалась в процессе культивирования (pZ<0,05). Щелочная фосфатаза в культивируемых клетках не выявлялась.
Выводы. При культивировании мононуклеаров и фибробластов in vitro в условиях направленного движения питательной среды, сходного с движением внутриглазной жидкости, отмечается повышение их внутриклеточной ферментативной активности. При модулирующем влиянии факторов микроокружения (направленный поток жидкости, внеклеточный матрикс) ускоряется процесс созревания и дифференцировки клеток в зрелые формы. Полученные в ходе экспериментальных исследований данные расширяют представления о влиянии микроокружения на морфофункциональный статус мононуклеаров и фибробластов и позволяют с новых позиций подойти к изучению клеточных механизмов развития фиброваскулярной пролиферации в полости глазного яблока.

XVII Всероссийская школа офтальмологаXVII Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018 ХVI Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научн...

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Рейтинг@Mail.ru