Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:617.713-004.1-07 : 617.723-07

Флюоросцентная диагностика при проведении фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда в эксперименте


1Калужский филиал «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава РФ


    Одной из основных нерешенных проблем применения фотодинамической терапии (ФДТ) в офтальмологии остается сложность оценки динамики и характера накопления фотосенсибилизатора (ФС) в новообразованных сосудах (хориоидеи, роговицы, радужной оболочки глаза), а также внутриглазных новообразованиях, что является необходимым условием для определения оптимальных режимов ФДТ [1, 2, 7].
    Следует отметить, что в онкологической практике флюоресцентная диагностика (ФД) с ФС считается неотъемлемой составляющей ФДТ. Визуализация уровня флюоресценции препарата в ходе сеанса ФДТ позволяет четко определить истинные границы области поражения (например, опухоли), оптимальные временные параметры для облучения, а также является критерием «достаточности» лазерного воздействия [6, 9, 10, 12].
    Вышесказанное определяет необходимость разработки офтальмологических систем для ФДТ и ФД, адаптированных к использованию ФС нового поколения, и изучения на их основе динамики и особенностей накопления ФС при различной офтальмопатологии.
    Цель исследования — оценка возможностей флюоресцентной диагностики при проведении фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда в эксперименте.

Материал и методы
    Экспериментальные исследования проводились на 26 кроликах породы шиншилла с индуцированными моделями неоваскуляризации хориоидеи (18 глаз 18 кроликов) и неоваскуляризации роговицы (8 глаз 8 кроликов).
    Для создания модели неоваскуляризации роговицы у кроликов использовалась комбинированная методика, включающая интрастромальное наложение роговичных швов (шелк 5.00) с тушированием роговицы 10% раствором едкого натра (экспозиция — 20 с).
    Экспериментальное моделирование хориоидальной неоваскуляризации (ХНВ) проводилось путем высокоинтенсивной лазеркоагуляции (ЛК) сетчатки в центральной области на установке «ZEISS-532s» (Carl Zeiss Meditec, Германия) (λ= 532 нм) по модифицированной нами методике. Параметры ЛК: мощность излучения — 150-300 мВт, экспозиция 0,1-0,2 с, диаметр пятна – 50-100 мкм, количество коагулятов – 40-60.
    В работе использовался отечественный хлориновый фотосенсибилизатор — препарат «Фотодитазин» (бис-N-метилглюкаминовая соль хлорина e6) (ООО «ВЕТА-ГРАНД», Россия) (регистрационное удостоверение № ЛС — 001246 от 10.02.2006).
    ФДТ проводилась под контролем ФД в режиме реального времени на офтальмологическом лазерном комплексе «АЛОД-01» (ООО «Алком-Медика», Санкт-Петербург) (λ=660± 2 нм, что соответствует длинно-волновому максимуму полосы поглощения хлориновых ФС), оснащенном приставкой для транспупиллярного лазерного облучения (ПФК-«АЛОД-02»), а также дополнительным видеоканалом для ФД (регистрационное удостоверение МЗ РФ № 29/10020299/0707-00 от 20.07.2000) (рис. 1). Система ФД включала призменный оптический делитель, высокочувствительную черно-белую видеокамеру с системой интерференционных светофильтров, а также персональный компьютер с программным обеспечением для регистрации и обработки флюоресцентных изображений глазного дна.
    Методика ФД. Лазерное облучение в диагностическом режиме осуществляли расфокусированным пучком (диаметром от 4 до 16 мм) в различные временные интервалы после введения ФС. Расчетная плотность мощности лазерного излучения (20-40 мВт⁄см²) и минимальная экспозиция регистрации флюоресценции (3-4 с) практически исключали риск необратимых фотодинамических повреждений интактных структур глаза в ходе ФД.
    «Фотодитазин» экспериментальным животным вводили болюсно в дозе 2,4 мг/кг веса. Количество вводимого ФС соответствовало минимальной клинической дозе (0,8 мг/кг) с учетом коэффициента перерасчета дозы для кроликов (Kп=3,1).
    Программное обеспечение.
    Для количественной оценки интенсивности флюоресценции ФС при его накоплении в патологических структурах глаза до и после лечения нами была разработана специальная компьютерная программа. Анализ выделенных областей ангиограмм (например, области неоваскуляризации и интактного участка окружающего фона) заключается в их попиксельной детализации с помощью метода, использующего следующее цифровое соотношение: 0 — черный цвет, 1 — белый цвет, серые тона при этом представляют собой градацию от белого цвета к черному и имеют дробное численное значение. Программа определяет яркость каждого пикселя, суммирует яркость всех пикселей, находящихся в пределах выделенной области, рассчитывая, таким образом, ее общую яркость (уровень флюоресценции). Уровень флюоресценции в программе выражается безразмерным числовым значением.
    Результаты анализа участков изображений представляются в виде диаграммы, по оси абсцисс которой располагаются псевдонаименования ангиограмм, соотвествующие временному интервалу после введения ФС, по оси ординат — соответствующие числовые значение яркости (интенсивности) флюоресценции.

Результаты
     Флюоресцентная диагностика экспериментально-индуцированной неоваскуляризации роговицы с препаратом «Фотодитазин». В сроки наблюдения 2-3 недели после наложения роговичных швов на всех глазах кроликов биомикроскопически отмечался интенсивный рост новообразованных сосудов роговицы. Через 3 недели по ходу роговичных швов определялась разветвленная неоваскулярная сеть, включавшая в основном поверхностные, а также отдельные глубоко расположенные новообразованные сосуды роговицы. На 2-е сутки после снятия швов, по завершению эпителизации, проводили ФД с препаратом «Фотодитазин» по вышеописанной методике.
    В эксперименте контрастирование новообразованных сосудов роговицы кроликов регистрировали, начиная с 1-й мин после болюсного введения «Фотодитазинa». В интервале 5-15 мин флюоресценция ФС значительно усиливалась по интенсивности, достигая максимального пика контрастности к 15 мин. Спустя 20 мин от введения препарата наблюдалась выраженная экстравазальная флюоресценция, свидетельствующая о накоплении препарата в строме роговицы (рис. 2 а-д). Через 30 мин новообразованные сосуды практически не контрастировались, отмечалось относительно равномерное прокрашивание роговичной стромы.
    ФД экспериментально-индуцированной хориоидальной неоваскуляризации. Через 3 недели после высокоинтенсивной лазеркоагуляции сетчатки флюоресцентно-ангиографические признаки формирования хориоидальной неоваскуляризации были выявлены на 6 глазах (из 18), которые послужили материалом для дальнейших исследований динамики накопления ФС.
    При проведении ангиографии глазного дна с фотосенсибилизатором «Фотодитазин», начиная с 1-й мин от введения ФС, достаточно четко контрастировались магистральные ретинальные сосуды в области ДЗН и «medulla ray», а также крупные и средние хориоидальные сосуды. К 15 мин от введения препарата регистрировалось постепенное уменьшение интенсивности флюоресценции интактных ретинальных сосудов. Напротив, флюоресценция патологического очага (области хориоидальной неоваскуляризации) имела устойчивую тенденцию к нарастанию уровня свечения с прокрашиванием окружающих тканей к 20-й мин (рис. 3 а-д). В дальнейшем наблюдалась длительная персистенция препарата в очаге с постепенным уменьшением интенсивности через 60 мин от введения ФС, сосуды сетчатки к этому времени не контрастировались. Остаточная флюоресценция очага регистрировалась в течение 24 ч наблюдения.

Обсуждение
    Методы флюоресцентной визуализации в офтальмологии в течение последних 15-20 лет получили широкое распространение в клинической практике. На сегодняшний день флюоресцентная ангиография (ФАГ) с препаратами флюоресцеин и индоцианин-зеленый общепризнанна высокоинформативным методом диагностики ретинальной патологии [4, 6, 8]. Кроме того, ФАГ является одним из объективных критериев оценки эффективности различных методов лечения, например, при хориоидальной неоваскуляризации [4, 6, 7, 11].
    Вместе с тем, внедрение инновационных лечебных технологий, таких как ФДТ, ставит ряд принципиально новых задач, связанных с необходимостью совмещения ФД с ФС и ФДТ в рамках одной процедуры.
    По современным представлениям, оптимизация режимов ФДТ различной офтальмопатологии невозможна без проведения флюоресцентного мониторинга как перед сеансом ФДТ для пространственной и временной локализации ФС в очаге поражения, так и в ходе лазерного облучения [2, 3, 5, 12].
    В настоящее время для ФДТ в офтальмологии используются лазерные системы «Coherent Opal Photoactivator» (США) (λ=690 нм) и «Zeiss Visulas 690s» (Германия) для транспупиллярной ФДТ с ФС «Визудин», существенными недостатками которых является отсутствие видеосистем для ФД, а также невозможность изменения стандартных параметров лазерного облучения. Исключение составляет разработанная В.Б. Лощеновым с соавт. (2002) лазерно-спектроскопическая установка для ФД и ФДТ с использованием ФС «Фотосенс» класса фталоцианинов [2, 5].
    Основные технические сложности при создании комплекса аппаратуры для ФДТ и ФД, адаптированного к использованию препаратов хлоринового ряда, были связаны с необходимостью регистрации флюоресценции в диапазоне (675-680 нм), близком к длинноволновому пику поглощения (662±2 нм), а также низким квантовым выходом флюоресценции хлориновых ФС (не более 10%).
    Вышеуказанные технические задачи были успешно реализованы в офтальмологическом лазерном комплексе «АЛОД-01» (ООО «Алком-Медика», Санкт-Петербург), позволяющем проводить дозированное лазерное облучение в ходе ФДТ при патологии как переднего (роговицы, радужной оболочки), так и заднего (сетчатки, сосудистой оболочки) отрезков глаза с мониторингом флюоресценции ФС в режиме реального времени.
    Кроме того, ФД с ФС является критерием «достаточности» лазерного облучения, определяемого по мере «выгорания» (выцветания) препарата в ходе фотодинамической реакции.
    При проведении ФДТ хориоидальной неоваскуляризации, равно как и неоваскуляризации роговицы и радужной оболочки глаза, оптимальным временем для лазерного облучения следует считать интервал, соответствующий максимуму контрастирования неоваскулярной сети, до начала выраженного экстравазального выхода препарата при одновременном уменьшении интенсивности флюоресценции ретинальных сосудов во избежание нежелательного фотодинамического повреждения прилежащих интактных глазных структур.

Заключение
    Исследования динамики накопления фотосенсибилизатора «Фотодитазин» методом флюоресцентной диагностики in vivo позволили определить оптимальное время для лазерного облучения в ходе ФДТ неоваскуляризации роговицы и сосудистой оболочки глаза, соответствующие временным интервалам 10-15 мин от введения препарата.
    Полученные экспериментальные данные являются основой для оптимизации и повышения эффективности ФДТ с препаратом «Фотодитазин» в лечении неоваскулярной офтальмопатологии (васкуляризированных бельм роговицы, неоваскуляризации радужки, хоириодальной неоваскуляризации). Поступила 16.05.08

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru