Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Клеточные механизмы внутриглазной пролиферации с позиций функциональной морфологии


1Сибирский государственный медицинский университет Минздрава РФ

В современной офтальмологии один из научно-познавательных акцентов связан с изучением патогенеза фиброваскулярной пролиферации, осложняющей течение различных патологических процессов в полости глазного яблока. Существенную помощь в исследовании клеточных механизмов развития пролиферативной ткани оказывает функциональная морфология, в культуре in vitro изучающая клетки в их реальном действии и взаимодействии с микроокружением. На современном этапе микроокружение рассматривается как полифункциональный комплекс, обладающий способностью модулировать клеточный потенциал к адгезии и пролиферации, морфологической и функциональной дифференцировке. Микроокружение – тот необходимый фон, на котором и при участии которого разворачиваются основные патогенетические события в патологическом очаге. В полости глазного яблока микроокружение складывается из взаимодействующего комплекса анатомо-физиологических особенностей и внестромальных компонентов регуляции. Анатомо-физиологические особенности определяются наличием направленного движения внутриглазной жидкости и фибриллярным строением стекловидного тела. Внестромальные компоненты представлены клеточными элементами, мигрирующими в витреальную полость (клетки ретинального пигментного эпителия, моноциты/макрофаги, фибробласты и т.д.), и гуморальными факторами (цитокины, факторы роста). Особый интерес, по нашему мнению, представляет направленное движение жидкости в полости глазного яблока, создаваемое градиентом давления.
Цель работы – в эксперименте изучить влияние направленного потока жидкости на морфофункциональное состояние фибробластов человека.

Материал и методы

Разработано устройство, позволяющее in vitro моделировать движение питательной среды, сходное с движением жидкости в полости глазного яблока. Устройство представляет собой замкнутую систему с камерой, содержащей полупроницаемый фильтр. Система предварительно заполняется питательной средой, содержащей 200,0 мл среды ДМЕМ в модификации Iscove и 4% раствор гентамицина (из расчета 0,02 мл на 10,0 мл среды). В качестве объекта исследования использовали культуру фибробластов легкого человека после 3-4 пассажей в концентрации 5·104 клеток/мл. Клеточный материал вводили в камеру и размещали на фильтре. Благодаря работе роликового насоса в системе создавалось равномерное направленное движение питательной среды со скоростью 2,1-2,4 мм³/мин. Первичную культуру инкубировали при постоянном движении среды с соблюдением условий культивирования в течение 24 и 48 ч. В качестве контроля фибробласты культивировали на полупроницаемом фильтре, помещенном в чашку Петри. Клеточный материал исследовали с помощью цитохимических методов. Методом компьютерной морфометрии цифровых изображений определяли оптическую плотность адгезированных к фильтру фибробластов. Статистическую обработку результатов проводили с использованием метода попарных сравнений связанных выборок. Достоверность различий между сравниваемыми группами оценивалась с помощью непараметрического критерия Уилкоксона (pZ).

Результаты

При проточном культивировании фибробластов получены следующие результаты. Через 24 ч от начала эксперимента цитохимически в культивируемых клетках отмечалась умеренная активность α-нафтилацетатэстеразы (20,97±0,90) и щелочной фосфатазы (10,23±1,05). Площадь клеточной поверхности составляла в среднем 238,94±5,36.
Спустя 48 ч в описываемых клетках отмечалось повышение активности обоих ферментов по сравнению с исходными показателями и клетками, культивируемыми в стандартных условиях (pZ<0,01). При этом уровень α-нафтилацетатэстеразы составлял 28,13±0,87, щелочной фосфатазы – 14,67±1,21. Площадь же клеточной поверхности фибробластов в среднем составляла 179,43±7,81 (pZ<0,001).
При культивировании фибробластов в стационарных условиях на протяжении всей серии экспериментов цитохимически в клетках отмечалась незначительная активность α-нафтилацетатэстеразы, которая постепенно повышалась в процессе культивирования (22,56±0,95 через 24 часа и 26,98±0,89 через 48 часов, pZ<0,05). Щелочная фосфатаза в культивируемых клетках не выявлялась. Площадь клеточной поверхности составляла через 24 часа – 307,19±6,02, через 48 часов – 211,66±5,29 (pZ<0,001).
Данные цитохимических исследований фибробластов, культивируемых в проточных условиях, по сравнению с показателями в статических условиях свидетельствуют о повышении активности как специфических (щелочная фосфатаза), так и неспецифических (α-нафтилацетатэстеразы) ферментных систем, что указывает на ускорение процесса дифференцировки клеток. Подтверждением этому служит и более существенное по сравнению с контролем уменьшение площади клеточной поверхности культивируемых в проточных условиях фибробластов как отражение степени их созревания.

Заключение

Таким образом, при культивировании фибробластов человека in vitro в условиях направленного движения питательной среды отмечается повышение их внутриклеточной ферментативной активности. При модулирующем влиянии факторов микроокружения (направленный поток жидкости, внеклеточный матрикс) ускоряется процесс дифференцировки клеток в зрелые формы. Полученные данные расширяют представление о влиянии микроокружения на морфофункциональный статус клеток фибробластической популяции и позволяют с новых позиций подойти к изучению клеточных механизмов развития фиброваскулярной пролиферации в полости глазного яблока.
Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

«Живая» хирургия в рамках XVI Всероссийской конференции с международным участием «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии»«Живая» хирургия в рамках XVI Всероссийской конференции с ме...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Секундо В. Трансплантация рефрактивной лентикулы  используя VisuMax как способ лечения осложнений операции Lasik. ВидеопрезентацияСекундо В. Трансплантация рефрактивной лентикулы  используя ...

Симпозиум компании «Алкон» с демонстрацией показательных операцийСимпозиум компании «Алкон» с демонстрацией показательных операций

Осложненная катаракта: особенности хирургии и фармакотерапииОсложненная катаракта: особенности хирургии и фармакотерапии

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии XVI Всероссийская конференция с  международным участием Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Бактериальные инфекции глаза: взгляд офтальмолога и офтальмохирургаБактериальные инфекции глаза: взгляд офтальмолога и офтальмо...

Офтальмология: диагностика проблем, пути решенияОфтальмология: диагностика проблем, пути решения

Глаукома:теория и практика. Новый взглядГлаукома:теория и практика. Новый взгляд

Актуальные вопросы в лечении и профилактике ВМДАктуальные вопросы в лечении и профилактике ВМД

Современные аспекты и новые возможности ОКТСовременные аспекты и новые возможности ОКТ

Патология глазной поверхности и глаукома. Новые возможности и новые перспективы в решении «старых» проблемПатология глазной поверхности и глаукома. Новые возможности ...

Новейшие достижения в офтальмологииНовейшие достижения в офтальмологии

X Съезд офтальмологов России X Съезд офтальмологов России

Иммуномодулирующая и противовирусная терапия при лечении воспалительных заболеваний глаз различной этиологииИммуномодулирующая и противовирусная терапия при лечении вос...

«Нова Медика»: новые горизонты офтальмологии«Нова Медика»: новые горизонты офтальмологии

Рейтинг@Mail.ru