Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Изучение патогенеза избыточной регенерации в условиях проточного культивирования


1Сибирский государственный медицинский университет Минздрава РФ

Актуальность.
Процессы гиперрегенерации тканей глаза являются причиной неудовлетворительных исходов антиглаукомных операций. Профилактика избыточного рубцевания, несмотря на внедрение большого количества новых методов, недостаточно эффективна. Очевидно, что решение этой проблемы возможно только на основе углубленного изучения патогенетических механизмов пролиферативного синдрома. Поэтому выявление роли патогенетических факторов избыточной регенерации после антиглаукомных операций представляется актуальным.
Для оценки морфофункционального состояния клеток, принимающих участие в процессах регенерации, широко используется их культивирование в посуде, выполненной из стекла или пластика, и заполненной питательной средой. Инкубирование клеточной культуры выполняют при строгом соблюдении температурного режима (37oC), содержания CO2 (5–7%) и уровня влажности (100%). Однако возможности такого способа культивирования ограничены, поскольку изучаемые клетки помещают в среду, содержащую необходимые для жизнеобеспечения компоненты, но все же лишь в незначительной степени воспроизводящей естественные условия организма (в данном случае – полость глазного яблока).
Цель – изучение влияния однонаправленного тока жидкости на морфофункциональное состояние фибробластов человека.
Материал и методы. Исследование проводили с помощью оригинального устройства, позволяющего in vitro моделировать движение питательной среды, сходное с движением жидкости в полости глазного яблока. Устройство представляет собой замкнутую систему с камерой, содержащей полупроницаемый фильтр. Систему предварительно заполняли питательной средой IMDM (ДМЕМ в модификации Iscove), объемом 200 мл, к которой добавляли 4%-ный раствор гентамицина (0,02 мл на каждые 10 мл питательной среды). В качестве объекта исследования была выбрана культура фибробластоидных клеток легкого человека после 3–4 пассажей в концентрации 5?104 клеток/мл. Клеточный материал вводили в камеру и помещали на фильтр. Камеру соединяли с емкостью через роликовый насос, благодаря его работе создавалось равномерное направленное движение питательной среды со скоростью 2,1-2,4 мм³/мин. Первичную клеточную культуру инкубировали при постоянном движении жидкой питательной среды. В качестве контроля изучаемые клетки культивировали на полупроницаемом фильтре, помещенном в чашку Петри с необходимой питательной средой, при строгом соблюдении температурного режима (37oC), содержания CO2 (5–7%) и уровня влажности (100%).
Длительность проточного культивирования составила 48 часов. Клетки, культивируемые в стандартных условиях, исследовали через 24 и 48 часов. По окончании экспериментов клеточный материал, находящийся на полупроницаемом фильтре, исследовали с помощью цитохимических методов. Обнаруживали активность щелочной фосфатазы – специфического маркера фибробластических клеток и неспецифической эстеразы.
Результаты. В процессе культивирования in vitro фибробластов в условиях направленного движения питательной среды получены следующие результаты. Через 48 ч культивирования клеток цитохимически отмечали высокую активность щелочной фосфатазы и неспецифической эстеразы. Реакция на щелочную фосфатазу в клетках, выращенных в стационарных условиях, через 24 и 48 часов была отрицательной. Однако в этих клетках была отмечена высокая активность неспецифической эстеразы в такие же сроки наблюдения.
Цитохимические методы дают представление о распределении естественных ферментных систем в клетках. В период интенсивной дифференцировки клеток происходит увеличение активности ферментативных реакций. Культивирование фибробластов в динамических условиях позволило выявить увеличение активности как специфических, так и неспецифических ферментных систем, что указывает на ускорение дифференцировки клеток, по сравнению с результатами культивирования в статических условиях.
Выводы. Таким образом, при культивировании фибробластов в условиях однонаправленного тока жидкости мы отмечали повышение их внутриклеточной ферментативной активности. Было показано, что воздействие факторов микроокружения (направленный поток жидкости, внеклеточный матрикс) ускоряет процесс дифференцировки фибробластов в зрелые коллагенсинтезирующие формы. Полученные данные позволяют получить новые знания о влиянии микроокружения на морфофункциональное состояние фибробластов и участии их в процессах регенерации.
Abstract
We used the device allowing to create in vitro one-way fluid flow similar to the fluid flow taking place in the eyeball. The culture of human pulmo fibroblasts cells was incubated on fibrous membranes under a constant directional flow of the nutrient medium. The incubation period was lasting 48 h. Intracellular enzyme activity of fibroblasts cells increased under dynamic conditions, differentiation of fibroblasts cells being accelerated.

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru