Online трансляция


Научно-практическая конференция с международным участием
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий
Москва. Гостиница Holiday Inn Sokolniki
4 февраля 2017 г.



15-я Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием
Современные технологии лечения витреоретинальной патологии
Современные технологии лечения витреоретинальной патологии
Сочи, 16-17 марта 2017
Официальный сайт

Партнеры


Valeant thea
Allergan Фокус
santen tradomed
sentiss



Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 22 2016
№ 21 2016
№ 20 2015
№ 19 2015
№ 18 2015
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
№ 1 2016 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
№ 1 2016 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 4 2016
№ 3 2016
№ 2 2016
№ 1 2016
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 5 2016
№ 4 2016
№ 3 2016
№ 2 2016
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2016
Выпуск 3. 2016
Выпуск 2. 2016
Выпуск 1. 2016
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№ 6 (32) Декабрь 2016
№ 5 (31) Октябрь 2016
№ 3 (29) Июнь 2016
№ 2 (28) Апрель 2016
№ 1 (27) Март 2016
....


Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:617.7:617.72:611.423.

Структурные элементы лимфатических путей оттока внутриглазной жидкости в хориоидее глаза человека в норме и при глаукоме


1Новосибирский филиал «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Росмедтехнологии»
2Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук
3Научно-исследовательский институт экспериментальной и клинической медицины
4МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Росмедтехнологии» Минздрава РФ

    
Рис. 1. Сосудистое русло хориоидеи: а) структура хориокапиллярной пластинки. КК – просвет кровеносного капилляра, ЛК – просвет лимфатического канала. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 10х90; б) CD34+-кровеносные сосуды. ИГХ выявление маркера кровеносных сосудов CD34. Ув. 10х90; в) Prox-1+-лимфатический сосуд. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов Prox-1. Ув. 10х90; г) LYVE-1+-лимфатический сосуд. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов LYVE-1. Ув. 10х90; д) Podoplanin+-лимфатический сосуд. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов Podoplanin. Ув. 10х90; е) FGFR+-фибробласты. ИГХ выявление маркера рецептора к фактору роста фибробластов FGFR. Ув. 10х90; ж) CD34+-кровеносные сосуды на границе склеры и хориоидеи. ИГХ выявление маркера кровеносных сосудов CD34. Ув. 10х90; з) Podoplanin+-лимфатические сосуды на границе склеры и хориоидеи. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов Podoplanin. Ув. 10х90
Рис. 1. Сосудистое русло хориоидеи: а) структура хориокапиллярной пластинки. КК – просвет кровеносного капилляра, ЛК – просвет лимфатического канала. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 10х90; б) CD34+-кровеносные сосуды. ИГХ выявление маркера кровеносных сосудов CD34. Ув. 10х90; в) Prox-1+-лимфатический сосуд. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов Prox-1. Ув. 10х90; г) LYVE-1+-лимфатический сосуд. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов LYVE-1. Ув. 10х90; д) Podoplanin+-лимфатический сосуд. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов Podoplanin. Ув. 10х90; е) FGFR+-фибробласты. ИГХ выявление маркера рецептора к фактору роста фибробластов FGFR. Ув. 10х90; ж) CD34+-кровеносные сосуды на границе склеры и хориоидеи. ИГХ выявление маркера кровеносных сосудов CD34. Ув. 10х90; з) Podoplanin+-лимфатические сосуды на границе склеры и хориоидеи. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов Podoplanin. Ув. 10х90

Рис. 2. Структура стромального каркаса хориоидеи. КВ – пучки якорных коллагеновых волокон, МФБ – миофибробласт, ПГ – пигментная клетка: а) разнонаправленное расположение пучков коллагеновых волокон. Ув. х8000; б) якорные коллагеновые волокна вокруг пигментной клетки. Ув. х8000
Рис. 2. Структура стромального каркаса хориоидеи. КВ – пучки якорных коллагеновых волокон, МФБ – миофибробласт, ПГ – пигментная клетка: а) разнонаправленное расположение пучков коллагеновых волокон. Ув. х8000; б) якорные коллагеновые волокна вокруг пигментной клетки. Ув. х8000
В последние годы пристальное внимание ученых, изучающих морфологию органа зрения, направлено на выявление структурных элементов лимфатической системы, оценку её роли в оттоке внутриглазной жидкости, утилизации токсических продуктов метаболизма и клеточной деструкции.

    При исследовании процессов лимфангиогенеза в эмбриогенезе человека было показано, что формирование сосудистой оболочки у плодов 8-40 недель гестации проходит три стадии: дифференциации гемопоэтических стволовых клеток, васкулогенеза и ангиогенеза, при этом васкулогенез происходит независимо от VEGF (165) [5].

    При выявлении экспрессии маркера лимфатических сосудов D2-40 (podoplanin) в органе зрения плода 10-38 недель гестации были определены лимфатические сосуды в конъюнктиве, роговице, трабекулярной сети, оболочке зрительного нерва. Также podoplanin-положительные структуры выявляли в сосудистой оболочке и в переднем сегменте глаза. Тем не менее, наличие лимфатических сосудов в интраокулярных структурах остается предметом дискуссии [6].

    В то же время при определении экспрессии LYVE-1 в сосудистой оболочке глаза было показано, что в хориоидее человека содержится большое количество LYVE-1 положительных макрофагов, которые, по предположению авторов, вовлечены в метаболизм гиалуроновой кислоты или участвуют в формировании временных лимфатических сосудов при воспалении [10].

    Представляет интерес морфологическое исследование сосудистой оболочки глаз плодов человека (8-25 недель гестации) и взрослых (17-74 лет) с помощью использования специфических лимфатических маркеров – LYVE-1, podoplanin, VEGF-C, VEGFR-3. Анализ полученных данных позволил сделать заключение, что в хориоидее находится система слепо начинающихся начальных лимфатических сегментов, которые идеально подходят для рециркуляции внеклеточной жидкости и иммунного надзора [8]. Кроме того, показано наличие лимфатических структур в цилиарном теле глаза человека [2, 3, 9, 11, 13].

    Тем не менее, в настоящее время вклад лимфатических структур органа зрения в отток ВГЖ остается до конца не изученным. В то же время имеются данные, что после введения люминесцентных наносфер в переднюю камеру глаза овец через 4 часа они обнаруживаются в шейном, заглоточном и подчелюстном лимфатических узлах. Эти результаты свидетельствуют о наличии лимфатических каналов в органе зрения и, в определенной степени, служат доказательством того, что жидкость и растворенные в ней вещества оттекают из структур глаза, по меньшей мере, частично, через лимфатическую систему [7].

    По мнению ряда исследователей, открытие увеолимфатического пути оттока ВГЖ является важным для понимания механизмов развития глаукоматозного процесса и ряда других заболеваний глаза [4, 12]. Отток внутриглазной жидкости через лимфатические структуры позволяет рассматривать данный путь как процесс, направленный на утилизацию продуктов метаболизма и клеточной деструкции [1, 3]. Однако дискуссия относительно существования лимфатических путей оттока и классификации «лимфатических сосудов» в структурах глаза человека продолжается [11].

    Вышеизложенное позволило сформулировать цель настоящего исследования.

    Цель

    Выявить и изучить структурную организацию лимфатических путей оттока внутриглазной жидкости в хориоидеи глаза человека в норме и при ПОУГ.

    Материал и методы

    В качестве объекта исследования были взяты фрагменты хориоидеи энуклеированных по плановым медицинским показаниям глаз. Энуклеация проводилась по поводу заболеваний, не влияющих на структурную организацию хориоидеи (n=5) и при терминальной стадии глаукомы (n=2).

    У всех пациентов было получено информированное согласие на проведение операции и забор тканей глаза, а также использование данных исследования в научных целях.

    Для морфологического изучения образцы сосудистой оболочки фиксировали в 4% растворе параформальдегида, обрабатывали по стандартной гистологической методике и заливали в парафин. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином и с использованием антител.

     Все этапы иммуногистохимической реакции (депарафинизация, демаскировка, инкубация с первичными антителами и т.д.) проводили по стандартной методике. Использовали моноклональные антитела к маркерам эндотелиоцитов кровеносных сосудов CD34 (Novocastra, Германия), лимфатических сосудов LYVE-1 (Abcam, Англия), Podoplanin (Monosan, Нидерланды) и Prox-1 (Covance, Германия), к маркеру рецептора к фактору роста фибробластов FGFR (Abcam, Англия). Полученные препараты глаза изучали в световом микроскопе «LEICA DME» (Германия).

    Для исследования в электронном микроскопе образцы хориоидеи размером до 1 мм3 фиксировали в 4% растворе параформальдегида, приготовленном на среде Хенкса, дофиксировали в течение 1 часа в 1% растворе ОsO4 на фосфатном буфере (pH=7,4), дегидратировали в этиловом спирте возрастающей концентрации и заключали в эпон (Serva, Германия). Из полученных блоков готовили полутонкие срезы толщиной 1 мкм на ультратоме Leica UC7/FC7 (Германия/Швейцария), окрашивали толуидиновым синим, изучали под световым микроскопом «LEICA DME» и выбирали необходимые участки тканей для исследования в электронном микроскопе. Из отобранного материала получали ультратонкие срезы толщиной 70-100 нм, контрастировали насыщенным водным раствором уранилацетата и цитратом свинца и изучали в электронном микроскопе JEM 1400 (Япония).

    Морфометрический анализ проводили с помощью компьютерной программы Image J (Wayne Rasband, США). Определяли объемные плотности эпителиального слоя, капилляров, сосудов, лакун и интерстиция хориоидеи в условиях нормы и при глаукоме.

    Статистическую обработку полученных результатов производили с использованием пакета программ STATISTICA 10 (StatSoft Inc., США). Значимость различий оценивали, используя U-критерий Манна-Уитни, при уровне достоверности 95% (p<0,05). Данные представляли в виде средних значений (M) и стандартных отклонений (SD).

    Результаты

    
Рис. 5. Структура хориоидеи в норме и при терминальной стадии глаукомы. ЛК – лимфатический канал, КК – кровеносный капилляр: а) хориоидея в норме. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 10х40; б) набухание стромы хориоидеи при терминальной стадии глаукомы. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 10х40; в) хориоидея в норме. ИГХ выявление маркера кровеносных сосудов CD34. Ув. 10х40; г) терминальная стадия глаукомы. Расширение просветов кровеносных сосудов. ИГХ выявление маркера кровеносных сосудов CD34. Ув. 10х40; д) хориоидея в норме. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов Podoplanin. Ув. 10х40; е) терминальная стадия глаукомы. Расширение просвета лимфатического канала. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов Podoplanin. Ув. 10х40
Рис. 5. Структура хориоидеи в норме и при терминальной стадии глаукомы. ЛК – лимфатический канал, КК – кровеносный капилляр: а) хориоидея в норме. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 10х40; б) набухание стромы хориоидеи при терминальной стадии глаукомы. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 10х40; в) хориоидея в норме. ИГХ выявление маркера кровеносных сосудов CD34. Ув. 10х40; г) терминальная стадия глаукомы. Расширение просветов кровеносных сосудов. ИГХ выявление маркера кровеносных сосудов CD34. Ув. 10х40; д) хориоидея в норме. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов Podoplanin. Ув. 10х40; е) терминальная стадия глаукомы. Расширение просвета лимфатического канала. ИГХ выявление маркера лимфатических сосудов Podoplanin. Ув. 10х40

Рис. 6. Набухание перикапиллярных пространств (а) и нарушение связи якорных коллагеновых волокон с пигментными клетками (б). Ув. х8000
Рис. 6. Набухание перикапиллярных пространств (а) и нарушение связи якорных коллагеновых волокон с пигментными клетками (б). Ув. х8000
При окрашивании хориоидеи гематоксилином и эозином в структуре хориокапилярной пластинки выявляли пигментные клетки, кровеносные капилляры, коллагеновые волокна, фибробласты и каналы, похожие на лимфатические (рис. 1а).

    Иммуногистохимическое окрашивание на маркер эндотелия кровеносных сосудов CD34 подтвердило, что лежащие рядом со слоем пигментных клеток сосуды являются кровеносными капиллярами (рис. 1б).

    При иммуногистохимическом окрашивании на маркеры эндотелия лимфатических сосудов Prox-1, LYVE-1 и Podoplanin окрашивались клетки и их отростки, лежащие вдоль пигментных клеток и образующие каналы рядом с кровеносными капиллярами и сосудами. Следовательно, данные каналы можно отнести к лимфатическим (рис. 1в, г, д).

    При иммуногистохимическом окрашивании на маркер фибробластов и миофибробластов маркировались клетки, расположенных вдоль лимфатических каналов и которые часто определялись в структуре выстилки лимфатических каналов. Было выявлено, что лимфатические каналы могут быть ограничены как клетками, окрашивающимися на маркер эндотелия лимфатических сосудов Prox-1 и LYVE-1, так и фибробластами, миофибробластами и пигментными клетками (рис. 1е).

    Иммуногистохимическое окрашивание на маркер эндотелия кровеносных сосудов CD34 показало образование кровеносной капиллярной сети на границе склеры и хориоидеи (рис. 1ж). При окрашивании на маркер эндотелия лимфатических сосудов Podoplanin на границе склеры и хориоидеи были выявлены и лимфатические структуры (рис. 1з).

    При исследовании в электронном микроскопе было определено, что строма хориокапиллярной пластинки пронизана пучками коллагеновых волокон, которые связаны с миофибробластами и пигментными клетками и, вероятно, играют роль каркаса, препятствующего значительному изменению размера данной части оболочки (рис. 2а, б).

    Электронно-микроскопическое исследование подтвердило, что лимфатические каналы располагаются между кровеносными капиллярами и кровеносными сосудами и образованы как эндотелиоподобными клетками, так и фибробластами, их отростками, миофибробластами и сопровождаются пигментными клетками (рис. 3а).

    В переходной зоне между сосудистой оболочкой и склерой отмечали большие пространства, ограниченные удлиненными клетками – так называемые «лакуны», которые предположительно рассматривают как лимфатические структуры. Лимфатические лакуны выстланы эндотелиоподобными клетками и фибробластами, которые неплотно контактируют между собой и не связаны пучками якорных филаментов, которые бы ограничивали значительные изменения их просветов (рис. 3б).

    При морфометрическом анализе структуры хориоидеи при терминальной стадии глаукомы отмечали увеличение толщины хориоидеи на 61% по сравнению с нормой, что было следствием отека и набухания компонентов стромы хориоидеи. При этом пропорционально возрастали объемные плотности структур сосудистой оболочки, таких как эпителиальный слой, капилляры, сосуды и интерстициальные пространства (рис. 4). Увеличивались размеры просветов кровеносных сосудов и лимфатических каналов (рис. 5).

    Отмечали набухание и увеличение размеров перикапиллярных пространств (рис. 6а), набухание стромы хориокапиллярной пластинки и нарушение связи якорных коллагеновых волокон с миофибробластами и пигментными клетками (рис. 6б). Наблюдали набухание клеток, выстилающих лимфатические каналы, и увеличение интерстициальных пространств (рис. 7а, б).

     Наблюдаемый отек, набухание структурных компонентов и утолщение сосудистой оболочки глаза при терминальной стадии глаукомы можно рассматривать как нарушение лимфатического дренажа органа зрения.

    Заключение

    В настоящем исследовании показано наличие лимфатических каналов и лимфатических лакун в хориоидее глаза человека. Лимфатические каналы располагаются в сосудисто-капиллярной пластинке и сосудистой пластинке и ограничены Podoplanin+, Prox-1+-, LYVE-1+-эндотелиоподобными клетками, фибробластами и пигментными клетками. Лимфатические лакуны расположены в надсосудистой пластинке и выстланы эндотелиоподобными клетками и фибробластами.

    Выявленные при терминальной стадии первичной открытоугольной глаукомы отек и набухание стромы хориоидеи, возрастание объемных плотностей эпителия, интерстициальных пространств и сосудов хориоидеи свидетельствуют о нарушении лимфатического дренажа глаза, развивающегося с начальных стадий глаукоматозного процесса и приводящего к нарушению оттока ВГЖ через протективную лимфатическую систему. Нарушение лимфатического дренажа способствует накоплению в органе зрения избыточного количества биологически активных молекул, токсичных продуктов метаболизма и клеточной деструкции. Это приводит к постоянной активации деструктивно-воспалительного процесса, фиброзу и склерозированию трабекулярной зоны шлеммова канала, что обусловливает нарушение оттока ВГЖ и формирование порочного круга развития патологического процесса.

    Поступила 15.06.2016


Страница источника: 11-16
Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru