Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Экспериментальные исследования


1----------

    Задачами экспериментальной части работы последовательно явились оценка количества и распределения типов коллагена стромы роговицы, изучение ультраструктуры роговичной ткани, а также исследование биомеханических свойств роговицы после проведения циркулярного тоннельного фемтокросслинкинга и стандартного УФ-кросслинкинга роговичного коллагена.

    С целью оценки количества и распределения коллагена типа I, II, III, IV и VI стромы роговицы после УФ-кросслинкинга были проведены иммуногистохимические исследования типов коллагена с помощью непрямого иммуноферментного метода (ELISA) на 2-х роговичных дисках диаметром 9,0 мм, полученных при кератопластике у пациентов с кератоконусом IV стадии, и 2-х роговичных дисках роговиц донорских глаз, полученных из патологоанатомического бюро. Данное исследование проводили после получения одобрения этического комитета АУ Чувашии «Институт усовершенствования врачей» Министерства здравоохранения и социального развития Чувашской Республики и подписания информированного согласия пациентами с IV стадией КК, которым планировали проведение операции СКП. Проведенные иммуногистохимические исследования роговиц пациентов с кератоконусом показали значительные количественные изменения всех типов коллагена в результате деструкции, происходящей в результате повышения уровня лизосомальных ферментов и ингибиторов протеиназы в строме роговицы.

    Так, в роговице с КК количество коллагена типа I, по данным гистоморфометрии, падает до 35-45% по сравнению с нормой (55%). В результате развития патологического процесса строма роговицы теряет свою ориентацию в волокнах коллагена, которые скручиваются по своей оси.

    Другие типы коллагенов стромы также изменяются при КК в количественном и качественном отношении. Так, количество коллагена типа III, IV и VI уменьшается в среднем на 25–30% по сравнению с нормой, но изменений в их локализации не обнаруживается. Под действием УФ кросслинкинга образуются устойчивые сшивки, в основном между фибриллами I типа коллагена. При проведении кросслинкинга с фемтолазерным формированием тоннеля количество и плотность сшивок увеличивается, что вероятно связано с таргетированной доставкой рибофлавина в строму роговицы и прямой реакцией со стромальным коллагеном и, следовательно, с более эффективным процессом кросслинкинга. Распределение и локализация в роговице различных типов коллагена под действием УФ кросслинкинга не изменяется, а возникающие сшивки концентрируются в основном на коллагене I типа.

    С целью сравнения структуры ткани роговицы после стандартного КРК и фемтокросслинкинга было проведено электронно-микроскопическое исследование состояния ультраструктуры коллагена стромы роговицы кроликов на трансмиссионном электронном микроскопе JЕOL 1200 EX (Япония). Исследования выполнены на 18 глазах 9 кроликов. Животные были разделены на 3 группы: 1 (опытная) группа - кролики, которым проводили процедуру кросслинкинга с применением фемтолазера, 2 группа (сравнения) – кролики, которым проводили процедуру стандартного кросслинкинга по цюрихскому протоколу, 3 группа (контроля) - кролики которым проводили только фемтолазерное формирование интрастромального кармана без процедуры кросслинкинга. На сроках 1 неделя, 1 и 3 месяца кроликов выводили из эксперимента воздушной эмболией, глаза энуклеировали, роговицы вырезали трепаном 9,0 мм.

    В результате исследования ультраструктуры коллагена стромы роговицы экспериментальных животных выявлены сопоставимые изменения в группах стандартного КРК и фемтокросслинкинга, проявившиеся в одинаковом количестве появившихся «сшивок» волокон коллагена, сохраняющихся на всех сроках наблюдения, что можно расценить, как равноценный эффект обоих методов. Были выявлены изменения в базальной мембране в виде отечных базальных клеток эпителия с признаками полиморфизма и увеличенными межклеточными пространствами после стандартного КРК, свидетельствующие о травматичности этапа удаления эпителия в отличие от методики КРК с введением рибофлавина в стромальный карман, сформированный фемтолазером, при которой базальная мембрана остается интактной.

    Для исследования биомеханических свойств роговицы, с целью проверки гипотезы увеличения прочности роговицы после УФ-кросслинкинга, с помощью универсальной испытательной разрывной машины ZWICK/ROELL Z005 изучали способность к растяжению образцов роговицы экспериментальных животных, подвергшихся процедурам ЦТФКРК, СКРК и фемтолазерного формирования интрастромального тоннеля. Для экспериментальной работы использовали самцов кроликов породы Шиншилла массой 2-3 кг. Исследования выполняли на 20 глазах 10 кроликов. Глаза животных были разделены на 4 группы по 5 глаз в каждой.

    Группа 1-я – контроль, 2-я - глаза после стандартного УФ-кросслинкинга, 3-я - после циркулярного тоннельного кросслинкинга с фемтолазерным формированием интрастромального кармана, 4-я - после фемтолазерного формирования интрастромального тоннеля без УФ-кросслинкинга.

    Через 1 месяц кроликов выводили из эксперимента воздушной эмболией, глаза энуклеировали. Выкраиваемые полоски ткани размером 12 на 20 мм захватывали весь диаметр роговицы и часть склеры для закрепления между лапками универсальной испытательной машины ZWICK/ROELL Z005 на расстоянии 10 мм. Натяжение повышали линейно со скоростью 50 мм/мин до напряжения в 7 MПa. Полученные результаты фиксировали программным управлением испытательной машины численно и графически. Уменьшение растяжимости роговичной ткани расценивали как увеличение ее прочности, произошедшее в результате достижения эффекта УФ-кросслинкинга с формированием новых ковалентных связей, «сшивок» между фибриллами коллагена.

    При сравнении напряжения при растяжении образцов на 8% установлено различие в деформационных кривых, показывающих зависимость напряжения, приложенного к испытываемому образцу, от удлинения этого образца. Так, напряжение при растяжении образцов на 8% в 1 группе составило 3,6±0,27 МПа (p=0,0213), во 2 группе 6,4±0,4 МПа (p=0,413), в 3 группе 6,1±0,25 МПа (p=0,0338), в 4 группе 3,5±0,18 МПа (p=0,0547).

    Таким образом, исследование показало почти 2-х кратное увеличение силы, необходимой для растяжения образцов, подвергшихся процедуре ЦТФКРК и СКРК, что свидетельствует о достижении эффекта УФ-кросслинкинга с формированием новых ковалентных связей («сшивок») между фибриллами коллагена. В то же время, само по себе фемтолазерное формирование интрастромального кармана не вызвало статистически значимого снижения биомеханической прочности роговицы, что может быть связано с отсутствием этапа инструментального расслаивания и подъема роговичного клапана и сохранением тонких тканевых мостиков.


Страница источника: 10-14
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru