Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Возможности применения иммуноферментного анализа для определения содержания катехоламинов в слезной жидкости человека


1Новосибирский государственный медицинский университет Минздрава России
2Городская поликлиника № 22

    Актуальность

    Катехоламиновые гормоны – дофамин, норадреналин и адреналин – представляют собой 3,4-дигидроксипроизводные фенилэтиламина. Скопления хроматофинных клеток, продуцирующих катехоламины, обнаружены в сердце, печени, почках, половых железах, адренергических нейронах постганглионарной симпатической системы и в центральной нервной системе. Адреналин образуется только в мозговом слое надпочечников, откуда он поступает в кровоток и действует на клетки отдалённых органов. Его содержание в крови зависит от тонуса симпатической нервной системы и характеризует её гуморальную часть. В отличие от адреналина норадреналин, обнаруживаемый в органах, иннервируемых симпатическими нервами, образуется преимущественно in situ (80% общего количества); остальная часть норадреналина также образуется главным образом в окончаниях нервов и достигает своих мишеней с кровью (большая его часть вновь поглощается нейронами, а 10-20% попадает в кровь). Только очень небольшая часть норадреналина крови образуется в мозговом слое надпочечников. Концентрация норадреналина в крови характеризует активность нейронов симпатической нервной системы. Обратный захват катехоламинов нейронами – важный механизм, обеспечивающий, с одной стороны, сохранение гормонов, а с другой – быстрое прекращение гормональной или нейромедиаторной активности. Действие норадреналина связано с преимущественным влиянием на α-адренорецепторы, в то время как адреналин действует на α- и β-адренорецепторы [2, 3].

    Учитывая важную роль медиаторных систем в регуляции метаболизма тканей, проводилось изучение терминального отдела ВНС при различных видах офтальмологической патологии. Гистохимическое исследование выявило терминальные элементы ВНС обоих типов: адренергического и холинергического. Адренергические терминали выявлялись в цилиарном теле, радужной оболочке, цилиарных отростках. В строении адренергических нервных терминалей (АНТ) отмечалась значительная вариабельность. По ходу некоторых АНТ определялись участки диффузии медиатора в близлежащие мышечные структуры, в основном такие волокна определялись в толще цилиарного тела. Характерна достоверно большая плотность распределения АНТ в склере, чем в цилиарном теле. Имеется прямая связь между плотностью распределения АНТ в склере и в цилиарном теле. Исследования также показывают, что при патологии (терминальная стадия глаукомы) происходит изменение медиаторной активности нервных терминалей [1].

    Исследования последних 35 лет позволили описать механизм эмметропизации на животных моделях, изучить нормальный рефрактогенез и развитие миопии, индуцированной депривацией или отрицательными линзами. Роль ретинальной дофаминергической системы в управлении ростом глаза была изучена в многочисленных исследованиях [7-11]. Результаты исследования на животных, полученные с помощью методов иммуногистохимии, показывают, что уровень дофамина в сетчатке значительно варьирует между особями, но соотносится в парных глазах одной особи; подобная вариативность наблюдается и при депривационной миопии [10]. Однако невозможность проведения подобных экспериментов на человеке заставляет ученых искать новые методы исследования.

    Слезная жидкость – постоянная микросреда переднего отдела глаза, участвующая в метаболических процессах глазного яблока и орбиты, а также наиболее доступный для исследования витальный биологический материал в офтальмологии [4-6]. Возможность определения содержания катехоламинов в слезной жидкости может расширить понимание их влияния на аккомодационную способность и рост глаза.

    Цель

    Исследовать возможности применения иммунохимического анализа для определения содержания катехоламинов в слезной жидкости человека.

    Материал и методы

    Исследование одобрено Комитетом по этике ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России. Всеми участниками исследования и их родителями подписано информированное добровольное согласие на участие в исследовании. В клиническом исследовании приняли участие 80 детей в возрасте 10-14 лет (средний возраст 11,6 года). Забор слезной жидкости производился с помощью стерильного микрокапилляра одноразового использования в объеме 300 мкл в микропробирки типа Эппиндорф без добавления консерванта. Предварительной эпибульбарной анестезии конъюнктивы и глазного яблока не проводилось. Пациентов просили смотреть вверх во время всей процедуры. Слезную жидкость собирали в течение 10-15 мин из нижнего конъюнктивального мешка. В качестве меры профилактики возможных инфекционных осложнений после процедуры забора слезной жидкости производилась однократная инстилляция препарата с противомикробным действием: Picloxydine 0,05% глазные капли. Биоматериал подвергался замораживанию непосредственно после забора. Доставка в лабораторию осуществлялась с соблюдением холодовой цепи. Образцы до проведения исследования хранились при температуре -20° C до 6 мес. Иммуноферментный анализ слезной жидкости для определения содержания катехоламинов проводился согласно инструкции к диагностическому набору для определения катехоламинов в плазме. При статистическом исследовании данных использовались коэффициенты корреляции Спирмена и Кендэла.

    Результаты

    По результатам иммуноферментного анализа из 80 образцов слезной жидкости в 2-х исследуемые вещества не были выделены. В 78 образцах слезной жидкости детей в возрасте от 10-14 лет было определено содержание дофамина (М±m) 0,106±0,03 нг/мл, 95% доверительный интервал (ДИ) 0,0506 – 0,16 нг/мл; норадреналина 0,424±0,12 нг/мл, ДИ 0,19 – 0,66 нг/мл; адреналина 0,073±0,02 нг/мл, ДИ 0,0373 – 0,11 нг/мл. При проведении иммуноферментного анализа дофамин обнаружен в 44 исследуемых образцах (56%), норадреналин – в 61 (78%), адреналин – в 67 (86%).

    При проведении корреляционного анализа с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена выявлена статистически значимая (р<0,01) слабая прямая связь (ρ=0,354) между содержанием норадреналина и адреналина в слезной жидкости. При вычислении коэффициента Кендэла τ=0,25 при р<0,01.

    С помощью коэффициента Кендэла выявлена слабая прямая корреляционная связь между содержанием адреналина и дофамина τ=0,28 при уровне значимости р<0,01. Однако значение коэффициента корреляции Спирмена ρ=0,163 статистически не значимо (р>0,05).

    Выявлена слабая обратная корреляционная связь между содержанием норадреналина и дофамина ρ=-0,109, τ=-0,11, однако данные не являются статистически значимыми (р>0,05).

    Обсуждение

    Иммуноферментный анализ позволяет определить содержание катехоламинов в слезной жидкости человека, однако при оценке данных необходимо учитывать факторы, оказывающие влияние на результаты исследований. Отсутствие в литературе данных референтной величины, проблема пороговых величин лабораторных показателей, отсутствие данных о чувствительности метода применительно к слезной жидкости не позволяют на данном этапе исследования оценить диагностическую значимость полученных результатов. Полученные средние величины сопоставимы с референтными значениями содержания катехоламинов для плазмы крови согласно примененному диагностическому набору (дофамин <0,1 нг/мл, норадреналин <0,6 нг/мл, адреналин <0,1 нг/мл).

    Учитывая биокинетику исследуемых веществ можно предположить, что содержащийся в слезной жидкости норадреналин имеет происхождение из адренергических нервных терминалей склеры. Происхождение дофамина слезной жидкости сложно отнести к дофаминэргической системе сетчатки, так как он не проникает через гистогематологический барьер. Адреналин, очевидно, попадает в слезную жидкость через обильную кровеносную систему переднего отрезка глаза. В целом содержание катехоламинов в слезной жидкости может отражать активность симпатоадреналовой системы в орбитальной области и иридоцилиарном комплексе в частности, что подтверждают положительные корреляционные связи между содержанием различных катехоламинов в слезной жидкости, выявленные в ходе исследования.

    Заключение

    Возможности современных методов иммунохимии и иммуноферментного анализа в частности позволяют определить содержание катехоламинов в слезной жидкости человека. В результате проведенного исследования определено количественное содержание дофамина, норадреналина и адреналина в слезной жидкости человека методом ИФА. Полученные данные сопоставимы с референтными значениями, рекомендуемыми для плазмы крови. Выявлена слабая прямая корреляционная связь между содержанием катехоламинов слезной жидкости: норадреналин/адреналин (ρ=0,354, τ=0,25 при р<0,01) и адреналин/дофамин (τ=0,28 при р<0,01).


Страница источника: 195-198

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru