Online трансляция


18-й Всероссийский конгресс катарактальных и рефракционных хирургов с международным участием
Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии
Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии
Москва
20-21 октября 2017 г.

Партнеры


Valeant thea
Allergan Фокус
santen tradomed
sentiss



Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 26 2017
№ 25 2017
№ 24 2017
№ 23 2016
№ 22 2016
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 3 2017 г.
№ 2 2017 г.
№ 1 2017 г.
№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 2 2017 г.
№ 1 2017 г.
№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 2 2017
№ 1 2017
№ 4 2016
№ 3 2016
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 5 2017
№ 4 2017
№ 3 2017
№ 2 2017
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2017
Выпуск 3. 2017
Выпуск 2. 2017
Выпуск 1. 2017
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№3 (35) Август 2017
№2 (34) Май 2017
№1 (33) Март 2017
№ 6 (32) Декабрь 2016
№ 5 (31) Октябрь 2016
....


facebooklogo     youtubelogo



Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Активатор плазминогена урокиназного типа стимулирует миграцию и пролиферацию клеток пигментного эпителия сетчатки


1Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова
2НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта
3МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава РФ

    Актуальность

     Активатор плазминогена урокиназного типа (АПУ) широко распространен в тканях заднего сегмента глаза, в том числе в стекловидном теле, внутренних слоях и сосудах нейроэпителия, пигментном эпителии сетчатки (ПЭС) [1]. Активность АПУ и экспрессия его рецепторов (CD87) коррелирует с интенсивностью протеолиза внеклеточного матрикса (ВКМ), клеточной подвижностью, инвазией и адгезией [2]. В органе зрения рецепторы АПУ представлены главным образом в клетках ПЭС и патологических образованиях (субретинальных неоваскулярных мембранах, мембранах при пролиферативной витреоретинопатии) [3].

    Цель

    Изучить влияние АПУ на миграцию и пролиферацию клеток ПЭС в культуре.

    Материал и методы

    Культура клеток ПЭС была получена из донорских глазных яблок путем ферментирования раствором коллагеназы 1 мг/мл (Биолот, Санкт-Петербург, Россия). Культуру выращивали в среде DMEM:F12 c 10% сыворотки крови крупного рогатого скота (СКРС) и засевали в культуральные флаконы 25 см2. Клетки ПЭС пассажировали при достижении 70-80% конфлюентности монослоя. В экспериментах использовали клетки 4-5 пассажей. Чистота клеточной линии была тестирована окрашиванием на цитокератины 8, 18 (Thermo Scientific, Rockford, IL, США). Все эксперименты с АПУ («Гемаза», Техноген, Москва, Россия) проводили в среде с 1% содержанием СКРС. Контрольные образцы культивировались в идентичных условиях без АПУ.

    Оценку изменений морфологии клеток под влиянием 50 ЕД/мл АПУ производили на фазово-контрастном микроскопе при увеличении 200 после 24 часов инкубации.

    Изменение миграционной активности клеток было изучено с помощью модифицированного протокола камеры Бойдена с использованием планшетных вставок с диаметром пор 8 мкм (Thermo Scientific) и теста заживления раны культурального монослоя. Оценку изменения миграции под действием 50 ЕД/мл АПУ в модифицированном тесте с камерой Бойдена проводили на сроках 6 и 24 часа. Мигрировавшие клетки, фиксированные на нижней поверхности мембраны планшетных вставок, окрашивали гематоксилином. Количество мигрировавших клеток в поле зрения оценивали на фазово-контрастном микроскопе при увеличении 200. Рану монослоя шириной 1000 мкм формировали наконечником стерильной пипетки. Скорость закрытия раны определяли при фазово-контрастной микроскопии, оценивая культуру каждые 12 часов, в группах образцов после внесения АПУ до концентраций 5, 10, 25, 50 ЕД/мл и контрольных образцах без АПУ. Результат выражали в среднем расстоянии между краями раны.

    Для оценки резистентности к трипсину (отражает прочность взаимодействий клетка-клетка и клетка-субстрат) монослой культуры обрабатывали раствором трипсина (0,125%)-ЭДТА в течение 2 минут. После чего действие фермента нейтрализовали добавлением 20 мкл СКРС, а состояние монослоя оценивали при фазово-контрастной микроскопии. Отделившиеся клетки аккуратно удаляли, а оставшиеся прикрепленными фиксировали, окрашивали гематоксилином и подсчитывали.

    После инкубации в течение 24 часов в присутствии АПУ в концентрациях 5, 10, 25 и 50 ЕД/мл образцы культуры окрашивали иммунопероксидазным методом с использованием антител к маркеру клеточной пролиферации Ki67.

    Статистическую значимость различий оценивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA), различия находящиеся в пределах p<0,05 считали статистически значимыми.

    Результаты

     Под действием АПУ в концентрации 50 ЕД/мл в культуре увеличивалось количество клеток с выраженным фибробластоподобным фенотипом (веретеновидные клетки). В контрольных образцах клетки равномерно распределялись по культуральной поверхности, в то время как в неконтрольных образцах увеличивалась склонность клеток к формированию скоплений (рис. 1).

    Через 24 часа культивации культура в присутствии ПЭС показала статистически значимое (p=0,012) увеличение миграционной способности в 1,75 раза (рис. 2) в модифицированном тесте с камерой Бойдена. Статистически значимое увеличение скорости заживления раны монослоя было выявлено во всех неконтрольных образцах (концентрация АПУ от 2,5 до 50 ЕД/мл) (рис. 3).

    Тест резистентности к трипсину продемонстрировал уменьшение количества клеток прикрепленных к субстрату после действия трипсина (5,2±1,7 кл/поле в контроле и 0,46±0,32 кл/поле при действии АПУ в дозе 50 ЕД/мл, p<0,001). Количество Ki67-позитивных клеток статистически значимо (p<0,01) увеличивалось с 44,1±8,3 до 61,0±5,8% при увеличении концентрации АПУ с 2,5 до 25 ЕД/мл соответственно и до 68,5±7,3% при концентрации АПУ 50 ЕД/мл (рис. 4).

    Обсуждение

    В данной работе впервые было исследовано влияние АПУ на миграцию и пролиферацию клеток ПЭС в культуре. Эффекты АПУ в отношении ПЭС сводятся к увеличению эпителиально-мезенхимальной трансдифференцировки (ЭМТ), о чем говорит изменение морфологии клеток. По результатам оценки миграционной способности и заживления раны монослоя, АПУ увеличивает миграционную активность клеток ПЭС, что, наиболее вероятно, является следствием стимуляции ЭМТ. Кроме того, АПУ стимулирует клеточную пролиферацию, что проявляется увеличение количества Ki67-позитивных клеток в культуре под действием АПУ. Изменения миграционной активности и пролиферации под действием АПУ имеют дозозависимый характер. По результатам, как морфологического исследования, так и теста устойчивости к трипсину, под действием максимальной исследованной концентрации АПУ клетки ПЭС приобретают тенденцию к более плотному межклеточному взаимодействию.

    Модуляция фенотипа и пролиферативной активности ПЭС имеет существенное прикладное значение, так как эпителиально-мезенхимальная трансдифференцировка и пролиферация клеток ПЭС определяют вероятность развития и выраженность пролиферативной витреоретинопатии [4]. Поскольку АПУ стимулирует миграцию и пролиферацию клеток ПЭС в культуре, существует высокая вероятность, что ингибирование его сигнального пути позволит снизить выраженность опосредованных им пролиферативных изменений in vivo.

    Заключение

    В данном исследовании было показано, что АПУ-опосредованный сигнальный путь стимулирует эпителиально-мезенхимальную трансдифференцировку клеток ПЭС, что сопровождается усилением их миграции и пролиферации. Модулирование АПУ-опосредованного сигнального пути может представлять собой потенциальный способ лечения пролиферативной витреоретинопатии.


Страница источника: 147-149

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru