Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:617.7

Импрессионная цитология: диагностические возможности в офтальмологии


1Белорусская медицинская академия последипломного образования
2Витебский государственный медицинский университет
3Институт физиологии НАН Беларуси

     Развитие как воспалительных, так и дистрофических заболеваний роговицы представляет собой сложный процесс взаимодействия собственных клеток роговицы и пришлых клеток из перилимбальной сосудистой сети. Понимание механизма клеточного ответа, его специфики является ключом к разработке новых подходов их лечения.

    Известны инвазивные и малоинвазивные методы получения клеточного материала роговицы [1, 2, 18, 25]. Однако они не имеют широкого применения в офтальмологии по ряду причин. Анатомически выпуклая форма роговицы обуславливает определенные трудности при выполнении мазков-отпечатков предметным стеклом, в результате чего получить клеточный материал представляется возможным лишь из поврежденной зоны. При этом его количество зачастую недостаточно для объективной оценки патологического процесса. Метод соскобов тупым шпателем является травматичным, вследствие этого он имеет ограниченное применение.

    Известен малоинвазивный, безопасный, легко выполнимый метод получения клеточного материала – импрессионная цитология (ИЦ) [7, 10, 14-16, 21, 23]. Egbert и соавт. [13] в 1977 г. впервые использовали данный метод с целью получения клеточных образцов конъюнктивы. Для его выполнения применяют целлюлозно-ацетатные диски. Их преимуществом являются мягкость и мелкопористая структура, что способствует адгезии к ним эпителиальных клеток поверхностных слоев конъюнктивы и роговицы [23].

    Основным направлением применения ИЦ является диагностика заболеваний конъюнктивы [3, 6-13, 15, 19, 20, 22]. Так же данный метод показал свою информативность и диагностическую эффективность в определении лимбальной недостаточности, в оценке состояния фильтрационных подушек при глаукоме [4, 17, 21, 23, 24], в выявлении новообразований глазной поверхности [5]. Представляется актуальным изучение возможностей импрессионной цитологии в диагностике воспалительных, дистрофических заболеваний роговицы, определении динамики воспалительного процесса, репаративной способности эпителия роговицы, выявлении новообразований и определении этиологии их развития.

    Цель.

    Определить возможности импрессионной цитологии в оценке морфофункциональных изменений поверхности роговицы при различных заболеваниях.

    Материал и методы

    Метод импрессионной цитологии применен для диагностики тяжести течения воспалительного процесса и оценки эффективности проводимого лечения (n=78 – первичная форма бактериального кератита; n=93 – вторичная форма бактериального кератита), для оценки процесса регенерации при воспалительных, дистрофических заболеваниях роговицы (n=78 – первичная форма бактериального кератита; n=93 – вторичная форма бактериального кератита; n=36 – эпителиально-эндотелиальная дистрофия роговицы), а также при заболеваниях, сопровождающихся патологической пролиферацией эпителия глазной поверхности (n=12 – сквамозная неоплазия глазной поверхности).

    Импрессионную цитологию (ИЦ) роговицы выполняли в соответствии с утвержденной Министерством здравоохранения Республики Беларусь инструкцией по применению «Оценка морфофункционального состояния роговицы при бактериальном кератите» (№ 013-0210, 26.03.10 г.). Так, мы применяли целлюлозно-ацетатные диски диаметром 13 мм и размером пор 0,44 μм (Sigma, США), при этом для исследования использовали ¼часть диска (сектор), располагая его основанием на лимбальную зону, а верхушкой – центр роговицы(рис. 1).

    Окрашивание клеточного материала проводили гематоксилином и эозином, заключение – полистеролом или кедровым бальзамом.

    Световую микроскопию и фоторегистрацию клеточных образцов выполняли на микроскопе Leica DM 2500 (Германия) при увеличениях ×100, ×200, ×400, ×630 и ×1000. Морфометрию проводили при помощи программного обеспечения Leica Application Suite (Германия). Показателями, учитываемыми при морфометрии, являлись нейтрофилы, макрофаги, фибробласты, эпителиальные клетки базального типа (БЭК), эпителиальные клетки с пикнозом ядра (ЭКПЯ), эпителиальные клетки в состоянии митоза (МЭК), эпителиальные клетки с плеоморфизмом и полиморфными изменениями ядер.

    Результаты и обсуждение

     Импрессионная цитология в диагностике воспалительного процесса. Световая микроскопия клеточного материала, полученного методом ИЦ, показала, что в диагностике воспалительного процесса последняя позволяет оценить состояние роговицы не только в зоне воспалительного очага, но и вокруг него (рис. 2).

    Оценка клеточного состава и его морфофункциональных изменений за пределами язвенно-воспалительного дефекта дает возможность в большей степени оценить тяжесть патологического процесса, его влияние на пролиферативную активность эпителия роговицы, тем самым позволяет определить верную тактику лечения. Так, нами было установлено, что клеточный состав и его морфофункциональные изменения значимо отличались от язвенно-воспалительного дефекта к лимбу, формируя три зоны:

    • язвенно-воспалительная – зона язвенно-воспалительного дефекта;

    • перифокальная (пери – с греч. peri – вокруг, около, focus – очаг) – зона вокруг язвенно-воспалительного дефекта шириной 2-3 мм;

    • паралимбальная (пара – с греч. para – возле, нахождение рядом) – зона внутрь от лимба.

    При этом центр язвенно-воспалительной зоны образовывал детрит. Вокруг него наблюдалась нейтрофильная инфильтрация в большей степени за счет сегментоядерных нейтрофилов, встречались единичные макрофаги. Кроме того, определялись эпителиальные клетки базального типа с признаками кариорексиса, карио- и цитолизиса, при тяжелом воспалительном процессе они полностью отсутствовали.

    В эпителиальных клетках перифокальной и паралимбальной зон были выявлены различной степени выраженности некротические и некробиотические изменения.

    Малоинвазивность метода импрессионной цитологии позволила применять его в динамике воспалительного процесса, а следовательно, оценивать эффективность проводимой терапии: динамика нейтрофильной инфильтрации (рис. 3а), наличие и количество макрофагов (рис. 3б), фибробластов, наличие и характер морфофункциональных изменений эпителиальных клеток.

    Оценка процесса регенерации при воспалительных, дистрофических заболеваниях роговицы.

     Световая микроскопия и морфометрия клеточных образцов роговицы, полученных методом ИЦ, позволила полагать, что длительность эпителизации роговицы непосредственно связана с морфофункциональным состоянием эпителия и зависит от количественного соотношения БЭК и ЭКПЯ в перифокальной и паралимбальной зонах (рис. 4а-б). Так, у пациентов, в клеточном составе которых преобладали эпителиальные клетки с нарушенным внутриклеточным обменом – пикнозом ядра и увеличенным объемом цитоплазмы (ЭКПЯ), наблюдались более продолжительные сроки эпителизации, так как такие клетки не в состоянии образовывать прочные межклеточные связи, и, соответственно, быстро десквамируются с глазной поверхности (рис. 4а).

    На основании анализа морфометрических данных нами разработан коэффициент эпителизации роговицы (КЭР), рассчитываемый по формуле:

    где: БЭК – базальные эпителиальные клетки;

    ЭКПЯ – эпителиальные клетки с пикнозом ядра;

    КЭР – коэффициент эпителизации роговицы.

    Корреляционный анализ (по Spearman и Kendall Tau) показал, что продолжительность эпителизации роговицы коррелирует с коэффициентом эпителизации роговицы (p<0,001) – чем выше коэффициент эпителизации роговицы, тем короче сроки эпителизации.

    Таким образом, нами предложены следующие критерии репаративной способности эпителия роговицы:

    • 2,0 и менее – очень низкая репаративная способность эпителия роговицы;

    • 2,1-5,0 – низкая репаративная способность эпителия роговицы;

    • 5,1-10,0 – умеренная репаративная способность эпителия роговицы;

    • 10,1 и более – высокая репаративная способность эпителия роговицы.

     Кроме того, метод ИЦ эффективен в диагностике патологического рубцевания при формировании бельма различной этиологии, симблефарона, при рубцовом пемфигусе (рис. 5).

    Множественные фибробласты (особенно в стадии эпителизации) обуславливают формирование грубого помутнения.

    Импрессионная цитология в диагностике заболеваний, сопровождающихся патологической пролиферацией эпителия глазной поверхности. «Сквамозная неоплазия глазной поверхности» (ocular surface squamous neoplasia – OSSN) – термин, объединяющий заболевания, сопровождающиеся патологической пролиферацией эпителия роговицы и/или конъюнктивы глазного яблока (от простой гиперплазии до инвазивной сквамозноклеточной карциномы) [13]. Выбор метода лечения и прогноз его эффективности напрямую связан с локализацией образования, его размеров, характера роста.

    Проведенное нами исследование показало, что морфофункциональные изменения эпителия глазной поверхности наблюдались не только в области образования, но и вокруг него, тогда как клинически данная зона выглядела здоровой. Так, изменения в эпителиальных клетках в проекции новообразования варьировали от признаков гипертрофии (гетерохромия ядер, многоядрышковость, конденсация хроматина, уменьшение ядерно-цитоплазматического соотношения) до дисплазии различной степени (плеоморфизм, гиперхромия ядер, полиморфность контура ядер, атипичные митозы). Например, при лимбальной локализации образования патологическая пролиферация определялась по всей поверхности роговицы (рис. 6). Данный факт необходимо учитывать при определении объема оперативного лечения.

    Кроме того, выполнение ИЦ в данной группе пациентов позволило определить этиологию заболевания. Так, у 8 пациентов из 12 были обнаружены эпителиальные клетки типа «глаз совы» – это клетки, содержащие герпес- или цитомегаловирус (рис. 7).

    Включение противовирусной терапии в схему лечения позволило снизить пролиферативную активность эпителия и повысить остроту зрения.

    Заключение.

    Таким образом, импрессионная цитология является малоинвазивным, легко выполнимым, высокоинформативным и объективным методом диагностики заболеваний глазной поверхности, который позволяет качественно и количественно оценивать клеточный состав и его морфофункциональные изменения, характер патологического процесса и его течение в динамике, репаративную способность эпителия роговицы и эффективность проводимого лечения.

    

    Сведения об авторах

    Волкович Татьяна Казимировна– канд. мед. наук, доцент кафедры офтальмологии Государственного учреждения образования «Белорусская медицинская академия последипломного образования».

    Самсонова Инна Васильевна– канд. мед. наук, доцент, зав. кафедрой патологической анатомии ГУО «Витебский государственный медицинский университет».

    Имшенецкая Татьяна Александровна– канд. мед. наук, профессор, заведующая кафедрой офтальмологии Государственного учреждения образования «Белорусская медицинская академия последипломного образования».

    Залуцкий Иосиф Викторович– член-корреспондент НАН Беларуси, канд. мед. наук, профессор, директор Института физиологии НАН Беларуси.


Страница источника: 46-52

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru