Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Материалы и методы исследования


1----------

    Работа состоит из клинической и экспериментальной частей.

     1. В клиническую часть вошли 11 пациентов (11 образцов): 6 мужчин и 5 женщин в возрасте от 31-ого до 74-х лет (60,2±11,2 года) с РОС и наличием выраженной ПВР (на стадии от B до D3). У двух пациентов в анамнезе первичная отслойка сетчатки, у девяти – рецидив отслойки сетчатки. У всех пациентов локализация разрывов сетчатки периферическая. Длительность заболевания у пациентов варьировала от 4-х до 36-ти месяцев (13,2±8,8 месяцев). Пациенты с другой глазной патологией из исследования были исключены. Всем пациентам проводили стандартные офтальмологические обследования до и после операции. В полученных при хирургическом вмешательстве эпиретинальных мембранах ПЦР-анализом определяли мРНК циклооксигеназ (ЦОГ-1 и ЦОГ-2), эндотелиального фактора роста сосудов (VEGF), мозгового нейротрофического фактора (BDNF) и фактора роста нервов (NGF).

    2. Экспериментальная часть исследования выполнена на трехстах половозрелых самцах беспородных крыс (300 глаз), массой 354±110 гр. В ходе эксперимента оценивали общее состояние животных: массу, внешний вид, активность; проводили общий осмотр глаза и его придатков; выполняли непрямую офтальмоскопию с видеорегистрацией глазного дна и стекловидного тела. Разработка диспазной модели пролиферативной витреоретинопатии у крыс Для разработки модели ПВР использовали протеолитический фермент, расщепляющий белки внеклеточного матрикса, диспазу. Раствор фермента в трех дозах 0,015U/мкл, 0,035U/мкл, 0,075U/мкл вводили интравитриально в объеме 2 мкл, контрольным животным вводили 0,9% NaCl эквивалентно, дополнительно исследовали интактный контроль. Эксперимент выполнен на 70 крысах. Энуклеацию проводили на 1-ой, 6-ой и 8-ой неделях эксперимента. Полученные срезы глаз окрашивали гематоксилин-эозином и азаном по методу Гейденгайна (на соединительную ткань). Оценка состояния сетчатки и хориоидеи осуществляли по разработанным оригинальным критериям: толщина отдельных слоев сетчатки и общая толщина сетчатки, толщина хориоидеи, продолжительность волнообразных изменений ядерных слоев сетчатки и её отслойки, наличие кист и розеток в сетчатке, выраженность деструкции фоторецепторов, наличие суб- и/или эпиретинальных кровоизлияний и суб- и/или эпиретинальных мембран (рис. 1).

    Высокие дозы фермента на поздних сроках эксперимента вызывали сильные деструктивные изменения сетчатки, когда не представлялось возможным выделить в ней конкретные слои. Скорость их появлений зависела от дозы фермента: максимальная доза вызывала деструкцию на 6-ой неделе эксперимента, а средняя доза - на 8-ой неделе. Минимальная доза диспазы не вызывала столь выраженных изменений сетчатки. Интравитреальное введение 2 мкл диспазы в дозе 0,015 U/мкл приводило к формированию в 100% случаев выраженных фиброзных мембран на 42 сутки эксперимента. Именно эта доза была выбрана для моделирования заболевания.

    Исследование действий противовоспалительных препаратов на динамику развития ПВР у крыс

    Протокол экспериментов. Для исследования эффективности противовоспалительной терапии при моделировании ПВР крысам через 20 мин после интравитреальной инъекции 0,015U/мкл диспазы вводили лорноксикам в дозе 8 мг/мл или триамцинолона ацетонид (ТА) в дозе 40 мг/мл. На вторые и третьи сутки лорноксикам вводили внутрибрюшинно в дозе 230 мкг/кг, ТА – внутримышечно в дозе 571 мкг/кг, контрольные крысы получали 0,9% NaCl эквивалентно, дополнительный контроль - интактные крысы. Энуклеацию проводили на 1-ый, 3-ий, 7-ой и 42-ой день эксперимента. Всего выполнили 130 экспериментов. Экспериментальные группы животных: Физ р-р - животные, получавшие 0,9% NaCl; Лорн – животные, получавшие лорноксикам; Триам – животные, получавшие триамцинолона ацетонид; Дисп - животные, получавшие внутриглазную инъекцию 2 мкл диспазы; Дисп+Лорн – животные с диспазной витреоретинопатией, получавшие лорноксикам; Дисп+Триам -животные с диспазной витреоретинопатией, получавшие ТА; ИК – интактные животные в качестве контроля.

    Схема и дозы вводимых препаратов выбраны исходя из рекомендованных для людей. Гистологические методы оценки состояния сетчатки глаз. Полученные срезы глаз окрашивали гематоксилин-эозином. Фотографирование срезов и обсчет проводили с использованием программы «AxioVision». Исследование экспрессии циклооксигеназ в сетчатке и хориоидее в диспазной модели ПВР у крыс, и влияния противовоспалительных препаратов на этот процесс

    Во всех группах изучали динамику продукции циклооксигеназ 1 и 2 типов, эксперимент выполнен на 100 животных. Протокол эксперимента описан выше. На депарафинизированные срезы наносили первичные антитела к ЦОГ-1 или ЦОГ-2 (кролик против крысы) фирмы Abcam и вторичные (козел против кролика), меченные пероксидазой. Активность собственных пероксидаз подавляли H2O2. В качестве отрицательного контроля использовали окрашенные вторичными антителами срезы сетчатки интактных крыс. Подсчет концентрации циклооксигеназ в слоях сетчатки и в хориоидее осуществляли в программе «ImagePro».

    Статистическую обработку результатов проводили в программах Microsoft Excel 2011, Statistica 10.0, IBM SPSS Statistics 22. Использовали метод χ-квадрат или точный критерий Фишера; дисперсионный анализ смешанной линейной модели; непараметрический U-критерий Манна-Уитни; метод ранговой корреляции по Спирмену. Различия считали значимыми при p<0,05.


Страница источника: 8

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru