Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

2.7.Получение и обработка количественных данных


1----------

    С целью исключения субъективного влияния автора данной диссертационной работы на результаты исследования вся количественная информация была получена независимым лицом – лаборантом ЦФПМБП МНТК МГ Островским Д.С., а проанализирована автором. Таким образом, исследование в целом было построено по дизайну однократно слепого.

    Для подсчета клеток использовали камеру Горяева с соблюдением всех заводских инструкций. Точность измерения при использовании метода составляла ±2,5%.

    Для дозировки жидкостей использовали пипеточные дозаторы с варьируемым объемом 2-20, 20-200 и 100-1000 мкл, поверенных и обладающих точностью, соответственно, ±0,9%, ±0,6% и ±1,0%.

    Цифровые изображения обрабатывались при помощи программного обеспечения CellSens Dimension (Olympus, Япония) - расстояния измерялись при помощи встроенного электронного калипера, площади клеточных слоев очерчивали вручную виртульным маркером и измеряли при помощи программного счетчика Olympus Cell Sens Dimension. При невозможности уместить видимый клеточный слой в одном поле зрения прибегали к технике создания панорамных изображений.

    Поскольку наименьшим логическим элементом цифрового изображения является один пиксель, точность измерений при использовании электронного калипера CellSens Dimension меняется в зависимости от увеличения используемого объектива. Так, при максимально возможном разрешении микрофотографии 1376х1038 пикселей (полученной с помощью фотокамеры XC-10, Olympus) точность линейных измерений составляет ±1,6, ±0,64, ±0,32, ±0,16мкм при увеличениях x50, x100, х200 и x400, соответственно.

    При определении статистически достоверной разницы в жизнеспособности клеточного материала на первом этапе исследования использовали метод дисперсионного анализа с расчетом F-критерия.

    



При решении второй, третьей и четвертой задач (при анализе динамики изменений диаметра сфероидов, сравнении различных параметров культивирования и при описании изменений площади образуемого слоя клеток, соответственно) статистический анализ проводили в два этапа. Сначала выявляли наличие статистически достоверной разницы в нескольких группах одного качества при помощи F-критерия, а затем для оценки более тонких различий внутри каждой качественной группы (сфероиды одного посевного количества, единой морфологии, одного срока 3D культивирования) применяли метод попарного сравнения либо с вычислением t-критерия (в случае анализа диаметра сфероидов и площади клеточных слоев), либо с анализом биномиальных распределений (в случае анализа жизнеспособности и адгезии) [5]. В последнем случае каждая отдельная группа объектов состояла из элементов, любой из которых принимал одно из двух значений (мертвая клетка/живая клетка; прикрепившийся/неприкрепившийся сфероид). Таким образом сравниваемые группы объектов представляли собой выборочные доли, при описании которых среднее значение μ и стандартное отклонение sp высчитывали по формулам (1) и (2):

    где n – объем выборки, p – значение выборочной доли,

    При сравнении выборочных долей использовали статистический z-критерий (аналог t-критерия Стьюдента для выборочных долей) для оценки статистической разности между двумя долями. В качестве нулевой гипотезы принимали утверждение, что обе сравниваемые выборочные доли (p1 и p2) принадлежат к одной совокупности (p). Значение z-критерия вычисляли по формуле (3):

    

Где p1 и p2 – сравниваемые выборочные доли, n1 и n2 – объемы сравниваемых выборок (общее количество подсчитанных клеток/сфероидов), sp – стандартное отклонение принимаемой в нулевой гипотезе единой совокупности p, из которой гипотетически изъяты выборки p1 и p2. С учетом множественного попарного сравнения параметров при рассчетах на втором, третьем и четвертом этапах работы вводили поправку Бонферрони, после чего вероятность справедливости нулевой гипотезы p принимали >0,05 при z<2,58, и p<0,05при z>2,58 [5].


Страница источника: 57

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Рейтинг@Mail.ru