Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

2.5.Пятый этап. Изучение адгезивных свойств сфероидов ретинального пигментного эпителия в условиях органной культуры хороидально-пигментного комплекса in vitro


1----------

     Процесс адгезии клеток РПЭ к той или иной поверхности определяется взаимодействием белков интегринов на их поверхности с лигандами внеклеточного матрикса – ламинином, коллагеном IV и V типа и гепарин-сульфатом. Эти лиганды являются нормальными компонентами базальной мембраны РПЭ, входящей в состав мембраны Бруха. Известно много примеров использования ex vivo органных культур тканевого комплекса «собственно сосудистая оболочка – мембрана Бруха» глаза донора-трупа для исследования адгезивных свойств РПЭ [293, 258, 294], однако не было обнаружено подобных исследований, проводимых в отношении РПЭ в форме многоклеточных сфероидов, что определило пятую задачу настоящего исследования.

    На данном этапе работы была использована техника культивирования эксплантов ХПК, описанная в ряде работ по изучению адгезии различных клеток на поверхности мембраны Бруха возрастных доноров (старше 50 лет) ex vivo при разработке способов лечения ВМД [132] в нашей собственной модификации (см. разд. 3.5.1). Данная методика позволяет сохранять жизнеспособность ХПК доноров старше 50 лет до 7 дней в режиме нормотермического культивирования [107, 108]. В идеальных условиях при наличии перфузионной системы такую культуру можно вести до 10 дней [148]. В настоящей работе исследовали наличие адгезии/неприживления сфероидов в наиболее простом варианте краткосрочного нормотермического органного культивирования [294].

    Для подтверждения избирательного характера адгезии сфероидов в контрольной группе трансплантацию осуществляли на внутреннюю поверхность склеральной оболочки, поскольку последняя указанных выше лигандов лишена [224].

    2.5.1. Органная культура хороидально-пигментного комплекса

    В качестве источника донорского ХПК использовались донорские глаза после выкраивания корнео-склерального диска для трансплантации роговицы.

    Отбирали глазные яблоки:

    1. доноры которых успешно прошли этап проверки на инфекционную безопасность;

    2. доноров старше 50 лет;

    3. имеющие показатели адреналиновой пробы по С.А. Борзенку А;

    4. энуклеированные и помещенные в условия гипотермии не позднее 12 часов post mortem и пребывавшие в гипотермии не более 48 часов;

    5. при внешнем осмотре которых после выкраивания роговично-склеральных дисков не обнаруживали признаков ятрогенного повреждения передней гиалоидной мембраны, пролапса стекловидного тела, отслоения сетчатки и/или сосудистой оболочки - глазное яблоко сохраняет округлую форму, будучи размещенным на плоской твердой поверхности, не уплощается, не имеет склеральных вмятин, стекловидное тело полностью находится в витреальной полости. Допускались посттрепанационные разрезы цилиарного тела и разрывы корня радужной оболочки без признаков пролапса стекловидного тела сквозь них.

    Всего было использовано 9 донорских глаз. В таб. 5 представлены основные характеристики донорского материала, использованного для получения органных культур ХПК.

    Техника выделения ХПК и формирования органной культуры ХПК описана в разделе 3.5.1.

    2.5.2. Формирование сфероидов ретинального пигментного эпителия

    Для получения сфероидов РПЭ дефростировали 11 клеточных культур, криоконсервированных на третьем этапе работы сразу после формирования висячих капель (разд. 2.3. и 2.6.2). Из каждой культуры формировали по 9 сфероидов РПЭ посевного количества 1000 клеток на висячую каплю и культивированные в течение 7 суток в 3D условиях (всего 99 сфероид). Все сфероиды имели «гладкую» морфологию и средний диаметр 197,0±27,2 мкм.

    2.5.3. Морфологическое исследование

    Образцы исследуемого материала фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, промывали проточной водой, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Выполняли серии гистологических срезов с применением окраски гематоксилин-эозином. Препараты изучали под микроскопом фирмы Leica DM LВ2 с камерой DFC 320 при х50, х100, х200, х400 кратном увеличении с последующим фотографированием.


Страница источника: 47

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru