Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

2.4.Четвертый этап. Изучение процесса реконструкции клеточного слоя при помощи сфероидов ретинального пигментного эпителия in vitro


1----------

    In vitro испытания трансплантатов широко практикуются при разработке новых вариантов пересадки клеток сетчатки и РПЭ с целью изучения химических и физиологических аспектов приживления в стандартных и высоковоспроизводимых условиях [143, 32]. Процесс приживления клеточного трансплантата включает в себя два этапа – адгезию (прикрепление) и спрединг (клеточное распространение) [248, 142].

    Адгезивные свойства сконструированных сфероидов РПЭ были изучены на третьем этапе настоящего исследования (разд. 3.3.2). Поскольку сфероиды соматических клеток обладают способностью к образованию клеточных слоев путем спрединга, находясь на поверхности субстрата [149, 288, 17], а в то же время среди литературных источников не было найдено упоминаний об исследовании данного явления применительно к сфероидам РПЭ, на четвертом этапе работы было важно изучить процесс реконструкции фрагмента слоя ретинального пигментного эпителия при помощи клеточных микроагрегатов ретинального пигментного эпителия в условиях in vitro.

    Для получения сфероидов РПЭ на четвертом этапе работы дефростировали те же 11 клеточных культур, которые использовались для получения сфероидов на третьем этапе и были криоконсервированы после формирования висячих капель (разд. 2.3. и 2.6.2). По методике, разработанной на втором этапе, было получено 33 «гладких» сфероида РПЭ (по 3 сфероида от каждого донора) с посевным количеством 1000 клеток на висячую каплю, изъятых из висячих капель на 7 сутки 3D культивирования и перенесенных в 2D условия – на дно лунок 24-луночного культурального планшета по 1 (Группа «1») и по 2 (Группа «2») сфероида от каждого донора в лунку (всего 22 лунки). Площадь дна одной лунки планшета 2 см² (2*108 мкм² ). В каждую лунку добавляли 500 мкл питательной среды, инкубировали в стандартных условиях, замену питательной среды производили каждые 3-4 дня.

    В последующие дни отслеживали динамику образования клеточного слоя вокруг сфероидов по фотоснимкам, проводимым на 2, 7, 14, 21 и 28-ой день 2D культивирования сфероидов. По достижении конфлюэнтности клеточного слоя или в случае ее отсутствия, на 28 день 2D культивирования замену питательной среды прекращали, вызывая постепенную деградацию клеточного слоя.

    В качестве контроля образцы тех же 11 клеточных культур, что использовались для получения сфероидов, переносили в лунки культуральных планшетов в виде суспензии в количестве 5*106 клеток РПЭ в одну лунку (11 лунок), инкубировали в стандартных условиях с питательной средой, которую заменяли каждые 3-4 дня. По достижении конфлюэнтности клеточного слоя или, в случае ее отсутствия, на 28 день 2D культивирования замену питательной среды прекращали, вызывая постепенную деградацию клеточного слоя.

    Остатки клеточных культур криоконсервировали (см. разд. 2.6.2.) до востребования на пятом этапе исследования.


Страница источника: 45

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru