Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

2.3.Третий этап. Разработка критериев трансплантабельности сфероидов ретинального пигментного эпителия


1----------

    Для формирования сфероидов на третьем этапе работы были использованы культуры клеток, полученные на первом этапе (см. разд. 3.1.1) и криоконсервированные на втором (см. разд. 3.2.1).

    Используемые культуры клеток РПЭ были разделены на две группы, согласно результатам адреналиновой пробы донорских глаз, из которых были получены клеточные 2D культуры – на группу А и группу В (6 культур в группе А, 5 культур в группе В). Из каждой клеточной культуры (11 культур) по протоколу, описанному в разделе 3.2.1., формировали сфероиды в избыточном количестве (учитывая различную вероятность образования «гладких» и «бахромчатых» сфероидов), из которых затем отбирали по 16 сфероидов различных посевных количеств клеток (500, 1000, 5000, 25000, 125000 клеток на висячую каплю) и обоих типов морфологии. Всего было отобрано 1760 сфероидов РПЭ (160 сфероидов от каждого из 11 доноров). Культуры клеток, оставшиеся после получения сфероидов, подвергались криоконсервированию до востребования на четвертом этапе (разд. 2.6.2).

    По 12 сфероидов из Группы А и по 10 из Группы В (по 2 сфероида одного посевного количества от каждого донора) извлекали из 3D культуры в различные сроки (7, 14, 21 и 28 дней), переносили в пробирки (1,5 мл) с фосфатно-солевым буфером (pH 7,4) для отмывания остатков питательной среды (сфероиды одной группы смешивали в одной пробирке), затем в пробирку со смесью 0,25% трипсина-ЭДТА и Версена (1:1 по об.), инкубировали в стандартных условиях в течение 5 минут, дезагрегировали клетки пипетированием и проводили тест на жизнеспособность с трипановым синим, как описано в разд. 2.6.3.

    По 12 других сфероидов из Группы А и по 10 из Группы B различных посевных количеств клеток и раличной морфологии извлекали из 3D культуры в различные сроки (7,14,21 и 28 дней) и переносили на дно лунок 24 -луночных планшетов по одному сфероиду в лунку. Начальные этапы адгезии сфероидов определяли микроскопически по прекращению их свободной флуктуации в растворе при действии низкочастотных механических колебаний (проводили тест с легкой перкуссией столешницы, на которой установлен инвертированный микроскоп), а также по появлению первых признаков распластывания (спрединга) клеточного слоя вокруг сфероида.


Страница источника: 44

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru