Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Экспериментальные исследования


1----------

     Необходимым условием индукции ЗОСТ на глазах с отслоенной сетчаткой является ослабление связи стекловидного тела с сетчаткой. В наибольшей степени этому условию отвечают протеолитические ферменты, индуцирующие отслоение СТ от сетчатки путем лизиса основных белков витреоретинального соединения. Преимуществом данных ферментов является то, что они ослабляют адгезию ЗГМ к ВПМ сетчатки, не вызывая при этом сморщивания СТ (витреосинерезиса), что исключает риск дополнительных тракций на сетчатку и увеличения площади ее отслойки.

    В экспериментальных исследованиях для индукции ЗОСТ использовался рекомбинантный фибринолитический фермент «Гемаза», созданный в Научно-производственном предприятии «Техноген» совместно с Российским кардиологическим Научно-производственным комплексом Минздрава РФ.

    Гемаза представляет собой лиофилизированный ферментный препарат, содержащий рекомбинантную проурокиназу, помещенную на инертном носителе, в состав которого входят декстран и хлорид натрия. Химическое название: проурокиназа рекомбинантная. Выпускается в виде лиофилизата для приготовления инъекций. Расфасован по 5000 МЕ (0,0588 мг РПУ) в стеклянных ампулах; 5 ампул, упакованных в блистр. Рекомбинантная проурокиназа под действием малых доз плазмина опосредованно катализирует превращение плазминогена в плазмин, способный вызывать гидролиз основных адгезивных гликопротеинов витреоретинальной поверхности ламинина и фибронектина, тем самым ослабляет прочность витреоретинального контакта и индуцирует отслойку стекловидного тела. Специфическая ферментативная активность Гемазы не ниже 85000 МЕ/мг белка.

    Экспериментальные исследования проводились на 26 глазах 13 кроликов породы шиншилла, из них 20 глаз составили опытную группу (табл. 1), шесть – контрольную. Вес животных колебался от 2,5 до трех килограммов. В предоперационную подготовку животных входила их маркировка, взвешивание и клиническая оценка состояния глаз.

    Следует отметить, что особенностью витреоретинального интерфейса глаз кроликов является более прочный контакт СТ с сетчаткой. В результате для индукции ЗОСТ могли потребоваться заведомо большие дозировки препарата, чем в клинике. Поэтому для экспериментальных исследований были взяты как в два раза меньшая от максимально разрешенной для интравитреального введения в клинике дозировка 250 МЕ (максимально разрешенная – 500 МЕ), так и большие дозировки – 1000 и 1500 МЕ (по 5 глаз на каждую дозировку).

    Инструментальные методы исследования

    До и после операции всем экспериментальным животным проводили следующие клинические методы исследования: биомикроскопию, непрямую бинокулярную офтальмоскопию, тонометрию, ультразвуковое эхоофтальмосканирование (B-скан), а также фотографирование переднего и заднего отрезка глаза. Данные исследования экспериментальных животных заносили в дневник наблюдения.

    Биомикроскопию переднего отрезка глаза осуществляли на щелевой лампе фирмы «Zeiss» (Германия) до операции, непосредственно после и через сутки после операции. Офтальмоскопию в обратном виде проводили по аналогичной схеме с помощью непрямого бинокулярного офтальмоскопа фирмы «Keeler» (Англия) с использованием асферических линз «Nicon» (Япония) силой 20 и 28 диоптрий. Тонометрию выполняли ап планационным тонометром Маклакова А.Н. грузом 10,0 г по общепринятой методике. Передний и задний отрезок глаз экспериментальных животных фотографировали с помощью фундус-камеры «Topcon» (Япония).

    Ультразвуковое эхоофтальмосканирование осуществляли с помощью прибора B-скан 3000 фирмы «Sonomed» (США) по вышеописанной схеме: перед операцией, непосредственно после и через сутки после операции.

    Методика эксперимента

    Раствор для интравитреального введения готовили непосредственно перед операцией. Для получения 0,1 мл раствора, содержащего 250, 500, 1000 и 1500 МЕ рекомбинантной проурокиназы, содержимое ампулы разбавляли соответственно в 2,0; 1,0; 0,5 и 0,33 мл физиологического раствора, после чего брали 0,1 мл полученного раствора.

    Для достижения медикаментозного мидриаза всем животным за 30 минут до операции инстиллировали 1-2 капли 1% раствора атропина и 10% раствора мезатона.

    Анестезию осуществляли внутримышечным введением раствора гексенала (150 мг/кг) и 3-х кратной инстилляцией в конъюнктивальную полость 1% раствора дикаина.

    После наложения векорасширителя под контролем операционного микроскопа в проекции цилиарного тела в 3-х мм от лимба тонкой инсулиновой иглой на шприце, не вскрывая конъюнктиву, выполняли сквозной прокол оболочек глаза. После этого в витреальную полость 20-ти опытных глаз вводили 0,1 мл раствора, содержащего рекомбинантную проурокиназу в различных дозировках: 250, 500, 1000 и 1500 МЕ. Введение препарата осуществляли под визуальным контролем кончика иглы, который располагали в центральных отделах витреальной полости. Прокол не зашивали. В витреальную полость шести контрольных глаз вводили 0,1 мл изотонического раствора NaCl.

    Следующий этап вмешательства выполняли с учетом того, что экспериментальные исследования проводились на глазах с прилежащей сетчаткой, на которых не было отслоечной болезни, а, следовательно, в стекловидном теле отсутствовал плазминоген, имеющийся в СТ и субретинальной жидкости при регматогенных отслойках сетчатки, а также плазмин, присутствующий в СТ при частичном гемофтальме. Поэтому после введения растворов и в опыте, и в контроле выполняли периферическую криопексию сетчатки, так как по данным Hesse L. и Kroll P., описанным в обзоре литературы, криопексия повышает проницаемость сосудов сетчатки, способствуя выходу компонентов плазмы крови, в том числе плазминогена и плазмина, в периваскулярное пространство витреоретинальной поверхности. Таким образом, создавался субстрат для действия рекомбинантной проурокиназы.

    Операцию заканчивали инстилляцией в конъюнктивальную полость 30% раствора сульфацила натрия.

    Через 24 часа после вмешательства, после проведения клинических методов исследования и фиксирования результатов, глаза кроликов энуклеировали и направляли на морфологические исследования.

    Морфологические исследования

    Гистологическому исследованию подвергалась опытная серия глаз с дозировками РПУ 500, 1000 и 1500 МЕ, а также все контрольные глаза с введенным в витреальную полость физиологическим раствором.

    Исследование проводили для определения характера деструктивных изменений глаза и их динамики в зависимости от дозировки фермента.

    Глаза изучали методом световой микроскопии. Препараты готовили по следующей методике.

    Материал фиксировали в жидкости Сент-Джиордьи (100 мл 4% водного раствора сулемы, 125 мл ацетона, 5 мл ледяной уксусной кислоты, 40 мл 10% формалина) – семь суток. Дофиксацию осуществляли в смеси: 100 мл фиксатора и 50 мл ацетона – три дня. Дальше материал проводили через ацетон, 100% спирт, спирт-эфир, заливали в целлоидин, после чего выполняли серийную резку материала. Целлоидиновые срезы толщиной 10 мк окрашивали, используя гематоксилин Гельда. При этом целлоидин не окрашивался, а волокна стекловидного тела окрашивались в сине-серый цвет. Также использовали традиционный метод окраски по Ван-Гизону.


Страница источника: 39

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru