Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Серия экспериментальных исследований in vivo


1----------

     Экспериментальные исследования были проведены на базе Калужского филиала ФГАУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. Эксперимент in vivo выполнен на лабораторных животных – 55 кроликов (85 глаз) породы Шиншилла весом от 2,0 до 3,0 кг в возрасте 3 – 6 месяцев. Исследование включало 3 серии экспериментов: первая серия - исследования действия ненасыщенного биодеградируемого имплантата на структуры переднего и заднего сегмента глазного яблока; вторая серия опытов - исследования действия насыщенного дексаметазоном биодеградируемого имплантата на структуры переднего и заднего сегментов глазного яблока; третья серия - изучение профиля высвобождения дексаметазона из имплантата в витреальной полости глаза кролика.

    Исследование безопасности интраокулярного введения биодеградируемого имплантата для доставки лекарственных веществ к структурам заднего сегмента глазного яблока in vivo

    В первой серии экспериментов все животные были разделены на 2 равные группы (первую и вторую). Кроликам первой группы (10 кроликов 10 глаз) производили введение ненасыщенного имплантата в переднюю камеру глаза. Контролем служили парные глаза кроликов, которые оставались интактными. Кроликам второй группы (10 кроликов 10 глаз) - введение ненасыщенного имплантата в витреальную полость; контролем служили парные глаза кроликов, которым в витреальную полость вводили 0,1 мл физиологического сбалансированного раствора

    Во второй серии экспериментов животные также были разделены на 2 равные группы (третью и четвертую). Кроликам третьей группы (10 кроликов 10 глаз) производили введение насыщенного дексаметазоном имплантата в переднюю камеру глаза; кроликам четвертой группы (10 кроликов 10 глаз) -введение насыщенного дексаметазоном имплантата в витреальную полость. Контролем в третьей группе служили интактные глаза кроликов. В качестве контроля в четвертой группе были использованы глаза кроликов из 2-ой группы первой серии эксперимента, которым в витреальную полость вводили ненасыщенный имплантат (табл. 1).

    Сроки выведения животных из эксперимента основаны на оценке времени деградации имплантата в эксперименте in vitro согласно национальному стандарту Российской Федерации по оценке биологического действия медицинских изделий [11] и составили 1, 7, 14, 28 и 35 сутки.

    Техника интраокулярного введения имплантата

    Подготовка кроликов к инъекции имплантата заключалась во взвешивании, маркировке и исследовании состояния глаз. Животным до операции проводили биомикроскопию глаза с помощью щелевой лампы фирмы «Opton» (ФРГ), офтальмоскопию глазного дна производили с помощью непрямой бинокулярной офтальмоскопии с помощью асферических линз «Ocular MaxField» (США) силой 78 и 90 диоптрий, фотографирование глаз, ультразвуковое офтальмосканирование (В-сканирование) с помощью аппарата «Humphrey» (США).

    Все данные обследования заносили в дневники наблюдений за экспериментальными животными. Всем кроликам в оба глаза за 30 мин до операции для поддержания максимального медикаментозного мидриаза производили инстилляцию в конъюнктивальную полость 1-2 капель 1% раствора тропикамида. В качестве местной анестезии всем кроликам инстиллировали в конъюнктивальную полость 1% раствор алкаина и ретробульбарно вводили 1,0 мл 2% новокаина. Операцию проводили под внутривенным наркозом (10% гексенал из расчета 10-15 мг/кг веса животного). Перед операцией проводили промывание конъюнктивальной полости антисептическим раствором. Иммобилизировали животных путем тугого пеленания.

    Стерилизацию хирургического инструментария достигали кипячением в течение 40 минут в дистиллированной воде. Режущие инструменты заливали 70° этиловым спиртом на 40 минут, после чего их переносили в стерильный физиологический раствор.

    Веки фиксировали блефаростатом, глазное яблоко – фиксационным пинцетом, захватывающим лимбальную конъюнктиву. Инъекцию в переднюю камеру выполняли на 3 часах. Производили парацентез роговицы копьевидным ножом 2,0 мм и с помощью канюли 27 gauge вводили имплантат.

    При введении имплантата в полость стекловидного тела производили прокол оболочек глазного яблока портом 27 gauge на расстоянии 2 мм от лимба в направлении к экватору в верхне-наружном квадранте. Прямую канюлю 27 gauge проводили вглубь стекловидного тела параллельно хрусталику, вводили имплантат в верхней трети полости стекловидного тела. Извлекали порт 27 gauge. После проведения хирургического вмешательства склеротомическое отверстие герметизировали без наложения шва.

    Инструментальные методы исследования

    Для оценки состояния внутриглазных структур перед имплантацией и в динамике на 1, 7, 14, 28, 35 сутки наблюдения проводили офтальмологическое обследование включающее биомикроскопию переднего отрезка глаза на щелевой лампе фирмы «Opton» (Германия), офтальмоскопию с помощью бинокулярного офтальмоскопа фирмы «Heine» (Германия), фоторегистрацию изображений глазного дна с использованием диагностической ретинальной системы «RetCam-120» (США) и электроретинографию (ЭРГ) на электродиагностической системе «Tomey» (Япония). ЭРГ проводились животным, которым было произведено интравитреальное введение ненасыщенных и насыщенных лекарственным веществом имплантатов.

    Продолжительность темновой адаптации в ходе ЭРГ исследования составляла 10 мин для создания стабильных физиологических условий и получения максимального скотопического ответа. Максимальный ответ в глазу в условиях темновой адаптации получали при использовании стандартного стимула Ganzfeld для генерации вспышки белого цвета с интенсивностью 1,8 cd/m², с частотой 0,1 Гц. В качестве активного электрода использовался серебряный электрод-петля и кожные иглы (референтный и заземляющий электроды), располагающиеся соответственно на правом и левом ушах кроликов.

    После проведения вышеуказанных исследований в те же сроки животных выводили из эксперимента путем воздушной эмболии, глаза энуклеировали и выполняли морфологические исследования.

    Морфологические методы исследования

    Животных выводили из эксперимента путем воздушной эмболии. Глазные яблоки энуклеировали, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, промывали проточной водой, подвергали стандартной обработке с обезвоживанием и обезжириванием в спиртах восходящей концентрации (70°, 80°, 90°,96°, 100°) и заливали в парафин. Далее выполняли серии гистологических срезов с применением окраски гематоксилин-эозином. Препараты изучали под микроскопом фирмы Leica DMLВ2 (Германия) при х50, х100, х200, х400 - кратном увеличении с последующим фотографированием.

    По гистологическим препаратам срезов глазных яблок оценивали морфологическое состояние внутриглазных структур.

    Изучение профиля высвобождения дексаметазона из насыщенного имплантата в витреальной полости глаза кролика

    Исследование профиля высвобождения дексаметазона из насыщенного имплантата в витреальной полости глаза кролика проводили с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии на базе испытательной лаборатории доклинических исследований «БИОМИР» АНО «Институт медико-биологических исследований и технологий».

    Данное исследование было проведено на 5 кроликах (5 глаз) породы Шиншилла с массой тела 2,0-2,5 кг. Всем кроликам было произведено введение насыщенного дексаметазоном имплантата в витреальную полость по методике, описанной в разделе 2.4.1.1. Забор образцов стекловидного тела проводили на 1, 3, 7, 14, 21, 28, 35 сутки с помощью инсулинового шприца с инъекционной иглой 30 gauge. Введение иглы осуществляли в 2 мм от лимба в верхне-наружном квадранте, производили забор аликвоты в объеме 0,1 мл, которую помещали в стеклянные капилляры с заглушками объемом 0,4 мл. Образцы анализировали на жидкостном хроматографе Agilent 1100 (Agilent Technologies, США) с диодно-матричным детектором на хроматографической колонке Nucleodur С18 Gravity размером 150×3,0 мм, заполненной обращенно-фазным сорбентом (Macherey-Nagel, Германия) толщиной 5 мкм при температуре термостата колонки 30° С. Объем вводимой пробы составил 20 мкл, скорость потока подачи подвижной фазы – 1,0 мл/мин. Время хроматографирования составило 10 минут при аналитической длине волны 239 нм. Регистрация и обработка хроматограмм выполнены с помощью программного обеспечения Chem Station (Agilent, США).


Страница источника: 46

XVII Всероссийская школа офтальмологаXVII Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018 ХVI Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научн...

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Рейтинг@Mail.ru