Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Материалы и методы исследования


1----------

     Объектом исследования является имплантат, разработанный на базе ООО Научно-экспериментальное производство «Микрохирургия глаза». Имплантат представляет собой устройство цилиндрической формы, длина 4,0 мм и диаметром 0,3 мм, для имплантации в витреальную полость с помощью инструментов 27 gauge, с толщиной каждого слоя около 10 мкм, количеством слоев в имплантате - 15. Слои соединены между собой с помощью поперечных сшивок.

    В работе исследованы образцы имплантатов в двух формах: ненасыщенный и насыщенный лекарственным веществом (дексаметазон) в дозе 300 мкг. Конструкция насыщенного имплантата предусматривает чередование 8-ми насыщенных препаратом и 7-ми ненасыщенных слоев таким образом, что первый и последний слои имплантата содержат лекарственное вещество. Дексаметазон распределен в насыщенных слоях в равных количествах. Устройство имеет следующий профиль растворения слоев: насыщенный слой – 3 суток, ненасыщенный – 1 сутки.

    Проведено 3 серии экспериментов исследования биодеградируемого интравитреального имплантата.

    Исследование структуры и свойств имплантата в эксперименте in vitro

    В первой серии выполняли изучение структуры имплантата при помощи сканирующей электронной микроскопии; изучение растворимости и времени резорбции ненасыщенного имплантата, изучение профиля высвобождения дексаметазона из насыщенного имплантата in vitro.

    Для оценки морфологических особенностей имплантата, и подтверждения его слоистой структуры проведена сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) 5 образцов. Исследование выполнено на базе ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», химического факультета. Подготовку препарата выполняли методом «замораживания-скалывания», препарат изучали на электронном микроскопе JEOL JSM-6610 (JEOL Ltd., Япония) при увеличении х300, х500, х1200.

    Исследование резорбции предложенного имплантата проводилось на базе ООО Научно-экспериментальное производство «Микрохирургия глаза» в фиксированном объеме 0,9% раствора NaСl равном 5,0 мл. Исследование выполнено на 5-ти ненасыщенных имплантатах, которые помещали в герметичные пробирки, содержащие 5 мл 0,9% раствора NaСl с фосфатным буфером pH=7,4. Затем пробирки устанавливали в горизонтальный шейкер инкубатор Unimax 1010 (Heidolph, Германия) с заданной температурой 37С° и частотой встряхивания 60 об/мин. Один раз в сутки производили замену 3,0 мл жидкости из пробирки на 3,0 мл физиологического раствора с сохранением заданной температуры и ее объема в пробирке. В ходе эксперимента проводили ежедневную визуальную (макроскопическую) оценку состояния полимерного матрикса и раствора: изменение цвета, наличие осадка или взвеси, состояние тестируемого образца (форма, размеры). Массу имплантата в сухом состоянии определяли на чашке аналитических весов Ohaus Analytical plus AP210 (Ohaus, Швейцария) с ценой деления 0,0001г. Контроль резорбции имплантата производили методом взвешивания образца на 1, 7, 14, 28 сутки. Определяли массу имплантата в сухом (m0 ) и гидратированном состоянии (m1 ) в вышеуказанные сроки, вычисляли средние арифметические значения массы (г) 5-ти имплантатов, после чего строили график зависимости потери массы образцов от времени. Замер времени резорбции имплантата проводился от начала эксперимента до его полного визуального исчезновения в пробирке.

    Исследование профиля высвобождения лекарственного вещества из насыщенного имплантата проводили на 5-ти образцах. Каждый имплантат помещали в герметичную пробирку с физиологическим раствором с фосфатным буфером pH=7,4 в объеме 5,0 мл при температуре 37С°. Пробирки устанавливали в горизонтальный шейкер инкубатор Unimax 1010 (Heidolph, Германия) с заданной температурой 37С° и частотой встряхивания 60 об/мин. Один раз в сутки производили замену 3,0 мл жидкости в пробирке на аналогичный объем физиологического раствора с сохранением заданной температуры и объема жидкости в пробирке. Забор исследуемой жидкости – аликвоты, осуществляли каждый день до момента полной резорбции имплантата.

    Для определения концентрации дексаметазона аликвоту исследовали с помощью спектрофотометрии (спектрофотометр Lambda EZ 201, Perkin Elmer Corporation, США) в ультрафиолетовой области спектра электромагнитного излучения с длиной волны, соответствующей максимуму поглощения для дексаметазона λmax = 242 нм. Количественное определение дексаметазона проводили методом градуировочного графика. Полученные значения концентрации дексаметазона (нг/мл) использовали для построения графика профиля высвобождения лекарственного вещества из имплантата в зависимости от времени (каждые сутки).

    Исследование биосовместимости, безопасности, биодеградации имплантата и профиля высвобождения дексаметазона in vivo

    Экспериментальные исследования были проведены на базе Калужского филиала ФГАУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. Эксперимент in vivo выполнен на лабораторных животных – 55 кроликов (85 глаз) породы Шиншилла весом от 2,0 до 3,0 кг.

    Исследование включало 3 серии экспериментов: первая серия - исследования действия ненасыщенного биодеградируемого имплантата на структуры переднего и заднего сегмента глазного яблока; вторая серия опытов -исследования действия насыщенного дексаметазоном биодеградируемого имплантата на структуры переднего и заднего сегментов глазного яблока; третья серия - изучение профиля высвобождения дексаметазона из имплантата в витреальной полости глаза кролика.

    В исследования безопасности интраокулярного введения имплантатов все животные были разделены на равные группы: в первой серии эксперимента - на первую и вторую, во второй серии экспериментов - на третью и четвертую. Распределение кроликов по группам представлено в таблице 1. Сроки выведения животных из эксперимента основаны на оценке времени деградации имплантата в эксперименте in vitro и составили 1, 7, 14, 28 и 35 сутки.

    Всем кроликам в оба глаза за 30 мин до операции для поддержания максимального медикаментозного мидриаза производили инстилляцию в конъюнктивальную полость 1-2 капель 1% раствора тропикамида. В качестве местной анестезии всем кроликам инстиллировали 1% раствор алкаина и ретробульбарно вводили 1,0 мл 2% новокаина. Веки фиксировали блефаростатом, глазное яблоко – фиксационным пинцетом, захватывающим лимбальную конъюнктиву. Инъекцию в переднюю камеру выполняли на 3 часах. Производили парацентез роговицы копьевидным ножом 2,0 мм и с помощью канюли 27 gauge вводили имплантат.

    При введении имплантата в полость СТ производили прокол оболочек глазного яблока портом 27 gauge на расстоянии 2 мм от лимба в направлении к экватору в верхне-наружном квадранте. Прямую канюлю 27 gauge проводили вглубь СТ параллельно хрусталику, вводили имплантат в верхней трети полости СТ. Извлекали порт 27 gauge. После проведения хирургического вмешательства склеротомическое отверстие герметизировали без наложения шва.

    Для оценки состояния внутриглазных структур перед имплантацией и в динамике на 1, 7, 14, 28, 35 сутки наблюдения проводили офтальмологическое обследование, включающее биомикроскопию переднего отрезка глаза на щелевой лампе фирмы «Opton» (Германия), офтальмоскопию с помощью бинокулярного офтальмоскопа фирмы «Heine» (Германия), фоторегистрацию изображений глазного дна с использованием диагностической ретинальной системы «RetCam-120» (США) и электроретинографию (ЭРГ) на электродиагностической системе «Tomey» (Япония). ЭРГ проводились животным, которым было произведено интравитреальное введение насыщенных и ненасыщенных ЛВ имплантатов. После проведения вышеуказанных исследований в те же сроки животных выводили из эксперимента путем воздушной эмболии, глаза энуклеировали и выполняли морфологические исследования.

    Исследование профиля высвобождения дексаметазона из насыщенного имплантата в витреальной полости глаза кролика проводили с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на базе испытательной лаборатории доклинических исследований «БИОМИР» АНО «Институт медико-биологических исследований и технологий».

    Данное исследование проведено на 5 кроликах (5 глаз) породы Шиншилла с массой тела 2,0-2,5 кг. Всем кроликам вводили насыщенный дексаметазоном имплантат в витреальную полость по вышеописанной методике. Забор образцов СТ проводили на 1, 3, 7, 14, 21, 28, 35 сутки с помощью инсулинового шприца с инъекционной иглой 30 gauge. Введение иглы осуществляли в 2 мм от лимба в верхне-наружном квадранте, производили забор аликвоты в объеме 0,1 мл, которую помещали в стеклянные капилляры с заглушками объемом 0,4 мл. Образцы анализировали на жидкостном хроматографе Agilent 1100 (Agilent Technologies, США) в течение 10 минут при аналитической длине волны 239 нм. Регистрация и обработка хроматограмм выполнены с помощью программного обеспечения Chem Station (Agilent, США).

    Исследование эффективности функционирования насыщенного дексаметазоном имплантата на модели фотоиндуцированного тромбоза ветви центральной вены сетчатки глаза кролика

    Экспериментальное исследование выполнено на отработанной модели фотоиндуцированного тромбоза ветви центральной вены сетчатки (ЦВС) на 10 половозрелых кроликах-самцах (10 глаз) породы Шиншилла с исходной массой тела 2,0-2,5 кг. Для фотодинамического моделирования тромбоза использовали фотосенсибилизатор хлоринового ряда – Фотодитазин в дозе 2,5 мг/кг веса. Фотодинамическое воздействие проводили на лазерном офтальмо-микрохирургическом комплексе «Алод-Алком» («Алком-Медика», Санкт – Петербург) с длиной волны 662 нм.

    С целью поддержания максимального медикаментозного мидриаза производили инстилляцию 1-2 капель 1% раствора тропикамида в конъюнктивальную полость. Операцию осуществляли под общей анестезией, включающей внутривенные инъекции 10% гексенала из расчета 10-15 мг/кг веса животного. Иммобилизировали животных путем тугого пеленания, внутривенно вводили Фотодитазин в выше указанной дозировке. Далее транспупиллярно проводили лазерное облучение вены в месте ее выхода из диска зрительного нерва (ДЗН) через 15 минут после введения фотосенсибилизатора. Плотность энергии составила 200 Дж/см², диаметр пятна лазерного излучения – 3,0 мм.

    Кролики были разделены на 2 группы: в 1-ой группе 5 кроликов (5 глаз) осуществляли введение насыщенного дексаметазоном имплантата в дозе 300 мкг в витреальную полость; во 2-й группе 5 кроликов (5 глаз) – интравитреальную инъекцию 0,1 мл 0,4% раствора дексаметазона, что соответствует дозе 400 мкг.

    Клиническую оценку состояния глаз кроликов проводили в течение 14 дней. Методы обследования включали офтальмоскопию с помощью бинокулярного офтальмоскопа фирмы «Heine» (Германия), фоторегистрацию изображений глазного дна с использованием диагностической ретинальной системы «Ret Cam-120» (США), оптическую когерентную томографию (ОСТ) на приборе «Stratus OCT3000» (Carl Zeiss, Германия) и электроретинографию (ЭРГ) на электродиагностической системе «Tomey» (Япония).


Страница источника: 10

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru