Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Проведение нового токсикологического анализа состояния эпителиальных клеток с использованием свиной роговицы


1----------

    
Рис. 1. Подготовка образцов роговицы свиней. А (а, б) – Выкраивание трепаном роговичного лоскута диаметром 2,0 мм, содержащего эпителий, на ¼ толщины роговицы. (в, г) Оставшуюся часть стромы отрезали микрохирургическими ножницами, после чего выдерживали в среде для культивирования при температуре 37 °С при наличии СО<sub>2</sub> (5%). Б – Пять образцов (указаны стрелками) (а) были введены посредством инъекции (б) Микроскопическое исследование образцов диаметром 2,0 мм (х4)
Рис. 1. Подготовка образцов роговицы свиней. А (а, б) – Выкраивание трепаном роговичного лоскута диаметром 2,0 мм, содержащего эпителий, на ¼ толщины роговицы. (в, г) Оставшуюся часть стромы отрезали микрохирургическими ножницами, после чего выдерживали в среде для культивирования при температуре 37 °С при наличии СО2 (5%). Б – Пять образцов (указаны стрелками) (а) были введены посредством инъекции (б) Микроскопическое исследование образцов диаметром 2,0 мм (х4)

Рис. 2. Контрастные изображения клеток эпителия роговицы. А – Миграция эпителиальных клеток и формирование круга с течением времени (12, 24, 36 час.) (х4). Увеличенное изображение зон а и b показаны внизу. (а, б) Измененные клетки эпителия имеют правильную организацию в виде крупной гальки и продолжают мигрировать (х20). Б – Зоны разрастания эпителия через 12, 24 и 36 ч., они увеличиваются с течением времени
Рис. 2. Контрастные изображения клеток эпителия роговицы. А – Миграция эпителиальных клеток и формирование круга с течением времени (12, 24, 36 час.) (х4). Увеличенное изображение зон а и b показаны внизу. (а, б) Измененные клетки эпителия имеют правильную организацию в виде крупной гальки и продолжают мигрировать (х20). Б – Зоны разрастания эпителия через 12, 24 и 36 ч., они увеличиваются с течением времени
Целью исследования доктора Takahashi была разработка нового первичного токсикологического анализа состояния эпителиальных клеток свиной роговицы с использованием бензалкония хлорида (БАХ).


    Энуклеированные глаза свиньи были доставлены в лабораторию в течение 24 ч. после забоя животных. Трепаном диаметром 2,0 мм выкраивали лоскут на ¼ толщины роговицы (рис. 1 А-а). Остаточные ткани были рассечены скальпелем, строму отрезали микрохирургическими ножницами до получения плоской поверхности (рис. 1 А-б-г).


    Образцы стерилизовали в 10% растворе повидон-йодина в течение 4 мин., после чего промывали в фосфатном буферном растворе (ФБР) в течение 10 мин. Пять образцов поместили в чашки для культивирования, покрыли коллагеном (тип I) и выдерживали в питательной в среде, содержащей фетальную телячью сыворотку, эпидермальный фактор роста и 1% раствор пенициллина-стрептомицина, при температуре 37°С в присутствии СО2 (5%) (рис. 1 Б-а, б).


    В исследовании применяли БАХ, растворенный в ФБР в 4 концентрациях: 0,00001%, 0,0001% , 0,001% и 0,01%. После инкубации образцов в питательной среде в течение 12 ч. ее убирали и наливали БАХ, растворенный в 50 мл ФБР, в 4 концентрациях на 2 мин. После трехкратного промывания роговиц в ФБР, образцы снова помещали в питательную среду на 24 ч. Затем их фотографировали для измерения зоны разрастания.


    Влияние ФБР на роговичные лоскуты оценивали по объему разрастания (%), рассчитанного следующим образом: размер зоны разрастания эпителия под влиянием БАХ, полученной в результате воздействия препарата в различных концентрациях/размер зоны разрастания в ФБР в контроле.


    Жизнеспособность клеток эпителия оценивали с помощью колориметрического метода, а также проводили иммуногистологическое исследование образцов.


     После культивирования образцов в течение 12 ч. клетки эпителия мигрировали наружу, формируя круг, увеличивающийся с течением времени (рис. 2 А). Проведение контрастной микроскопии показало, что они имеют правильную организацию в виде крупной гальки, и этот монослой клеток продолжал мигрировать к краю (рис. 2 А-б, в). Через 12, 24 и 36 ч. после начала инкубации количественно оценивали величину зоны разрастания (в мм²), через 36 ч. ее площадь составляла 50 мм² (рис. 2 Б).


    Для оценки токсического действия на клетки эпителия измеряли токсичность БАХ путем определения площади зоны разрастания измененных клеток эпителия. Эта зона через 36 ч. после начала культивирования постепенно уменьшается с увеличением концентрации БАХ (Р<0,01) (рис. 3).


    Исследование показало, что предложенный метод является технически не сложным, он позволяет выявить токсическое воздействие глазных капель на эпителиальные клетки роговицы при единичной и кратковременной инстилляциях.


    


    H. Takahashi, K. Tajima, T. Hattori, et al. Novel primary epithelial cell toxicity assay using porcine corneal explants // Cornea. – 2015. – Vol. 34. – P. 567–575.


Страница источника: 8

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru