Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Результаты собственных исследований


1----------

     Для рентгенофлуоресцентного анализа (XRF) роговичные диски выкраивали при помощи корнеальных трепанов диаметром 7–8 мм. Затем при помощи трепана диаметром 2 мм выкраивали два сегмента (условно центральный и периферический в нижнем отделе роговицы) (рис. 1).

    Образцы подвергали эвапорации в беспылевой камере: температура – +20°C, относительная влажность – 65% и атмосферное давление – 1 атм. В качестве источника излучения использовали рентгеновскую медную трубку: ускоряющее напряжение на трубке – 30 кВ, экспозиция – 300 с.

    В центральной и периферической зоне роговичных дисков в норме выявлено наличие меди, цинка и железа. При КК в периферической зоне выявлено накопление меди, цинка, железа; в центральной зоне эти элементы отсутствовали. Содержание меди в периферической зоне при КК превышает норму в среднем в 20,6 раза, цинка – в 7,8 раза, железа – в 3,7 раза.

     Для энергодисперсионной рентгеновской спектроскопии со сканирующей электронной микроскопией (SEM-EDS) роговичные диски выкраивали при помощи корнеальных трепанов диаметром 7–8 мм и подвергали быстрому замораживанию в жидком азоте при температуре –195,75°C с последующей лиофилизацией при температуре –5°C и давлении в 50–60 Па. Через центральную зону роговичного диска был произведен косо-сагиттальный срез (рис. 2). На гистологическом срезе выделяли 5 субпараллельных профилей длиной 850 точек. На поверхности роговицы выделяли профиль, параллельный караю среза, длиной 1000 точек.

    Необходимый регистрируемый диапазон энергий рентгеновского спектра составлял 4,445–9,982 кэВ. В каждой точке получали спектр при ускоряющем напряжении 20 кВ, токе на образце 520 пА, в расширенном режиме давления EP и в режиме низкого вакуума, время экспозиции – 18 сек.

     Карты распределения, построенные по результатам интерполяции данных, показали, что в норме железо (рис. 3 A), медь и цинк распределены относительно равномерно в толще роговицы. При КК выявлено аномальное избыточное накопление железа, меди и цинка в передних слоях периферической зоны роговичного диска (рис. 3 Б, В и Г).

    Полученные результаты свидетельствует в пользу того, что кольцо Флейшера формируется в результате осаждения минеральных элементов на физико-химическом барьере (увеличение pH или Eh) в тканях роговицы.

    Недостаточность металлов и нарушение активности металлозависимых ферментов в центральной зоне роговицы ведут к эктазии из-за деструктивных процессов, сопровождающихся алкализацией среды и развитием оксидативного стресса (увеличение pH и Eh). В пределах предложенной схемы просматривается возможный «порочный круг» (рис. 4).

    Для электронно-зондового рентгеноспектрального анализа РСМА производили забор слезы при помощи микропипетки из зоны слезного ручья «в одно касание». Пробы высушивали в контейнере на токопроводящей углеродной пленке в беспылевых условиях при относительной влажности 85% и температуре +18°C до получения лиофилизата («кристаллограмма»). Далее пробы вакуумировали с целью их эвапорации. Изображения получали в отраженных электронах BSE, вторичных электронах SE и в режиме построения микротопограмм поверхности TOPO с последующим спектральным анализом и локальным элементным микрокартированием.

    Основными минеральными составляющими слезной жидкости являются хлор, натрий, калий и бор. Минеральные продукты представлены двумя твердыми фазами: с преимущественным содержанием хлорида калия и хлорида натрия (рис. 5). Логарифмическое весовое соотношение NaCl/KCl в норме и при КК составляет в среднем 5,6 и 5,3, с диапазоном 4,0–6,9 и 3,6– 7,7, соответственно. В норме в составе кристаллов хлорида калия концентрация бора варьировала 7,89–26,50 ат.%, в составе хлорида натрия 0,00–18,02 ат.%; при КК – 0,00–32,95 ат.% и 0,00–32,42 ат.%, соответственно.

    Наличие бора в слезе свидетельствует о том, что боратная буферная система на основе гидратированного тетраборат-аниона: 8 H3BO3 - 10 H2O + 2 H2B4O7 – может выступать в качестве составляющей механизма, поддерживающего нормальное кислотно-основное состояние слезы.

     Для изучения кислотности слезы в норме и при КК была разработана оригинальная методика pH-метрии. Забор слезной жидкости проводили лакмусовой тест-полоской (Сомов Е.Е., 1995; Connor A.J., Severn P., 2009; Stevens S., 2005) путем однократного касания конъюнктивы в средней трети нижнего свода. Использовали специальные индикаторные бумаги высокой чувствительности с возможным диапазоном измерений от 6,4 до 8,0 и интервалом 0,2 ед. pH (Macherey-Nagel, Германия). Разработанная оригинальная компьютерная программа «PHA» позволяет проводить колориметрическую оценку pH с точностью до 0,01 ед. pH (рис. 6). Оценку результатов осуществляли через 1–4 мин. после забора слезы.

    Слеза имеет выраженный гетерогенный характер и содержит в своем составе, как свободную слезную жидкость, так и более вязкий (слизистый) компонент. При этом pH вязкого компонента существенно выше по сравнению с этим параметром свободной слезной жидкости. При анализе проб здоровых пациентов в подгруппе А и пациентов с миопическим астигматизмом в подгруппе Б контрольной группы было выявлено наличие вязкого компонента слезы в 34 и 21 случае, соответственно.

    Сравнительный анализ показал, что кислотность свободной слезной жидкости у здоровых лиц не зависит от возраста (p > 0,05), тогда как кислотность вязкого компонента снижается с возрастом (r = –0,616, p < 0,05) (рис. 7). Кислотность свободной слезной жидкости у здоровых лиц имеет нормальное распределение Гаусса.

     Отсутствие отличий в распределении кислотности слезы между здоровыми добровольцами и пациентами с миопическим астигматизмом (p > 0,05) позволило объединить две субвыборки в одну единую контрольную группу (норма). В норме отсутствует связь кислотности слезы с латерализацией глаз, наличием вязкого компонента в пробах, половой принадлежностью, табакокурением и аллергоанамнезом (p > 0,05).

    При КК вязкий компонент слезы был обнаружен в 15 образцах.

    Кислотность вязкого компонента при КК в относительно молодом возрасте существенно ниже нормы и приближается к физиологической норме только с возрастом (r = –0,573, p < 0,05) (рис. 8). Распределение кислотности свободной слезной жидкости при КК носит полимодальный характер (рис. 9).

    При КК связь кислотности свободной слезной жидкости с результатами кератометрии, индексами иррегулярности роговицы и наличием кольца Флейшера отсутствует (p > 0,05). При КК была выявлена слабая положительная корреляционная связь между результатами кератопахиметрии и кислотностью свободной слезной жидкости (r = 0,263, p < 0,05).

     В табл. 3 представлены результаты pH-метрии слезы в норме и при КК.

    Осмометрия слезы пациентов с КК показала, что параметры осмолярности слезы остаются в пределах нормы. Результаты статистической обработки полученных данных свидетельствуют о возрастной изменчивости данного параметра (r = 0,526, p < 0,05) (рис. 10).

    Полученные данные согласуются с результатами, ранее проведенных исследований в отношении возрастной динамики осмолярности слезы: в норме происходит ее физиологическое повышение с возрастом (Craig J.P., Tomlinson A., 1998; Mathers W.D. et al., 1996).


Страница источника: 14

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru