Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Материал и методы исследования


1----------

     Клиническое-инструментальное исследование выполнено у 278 пациентов, которым проведена энуклеация в период 2005 -2007 и 2012 гг. Средний возраст пациентов составил 52,9 ±11,9 лет. В настоящее исследование включены 134 пациента. Критерием отбора пациентов стало наличие ткани опухоли в базе Института и наличие образцов периферической крови, а также наличие хладагента в момент исследования. Пациенты разделены на 2 группы: ретроспективная – 104 пациента, получивших лечение в период 2005-2007 г., период их наблюдения до 2012 гг., и проспективная группы - 30 пациентов, получивших лечение в 2012 году.

    В ретроспективной группе возраст пациентов составил 22 – 84 года (средний возраст 53,7 ±12,2 лет). Распределение по полу: женщин - 66 (63,4%), мужчин – 38 (36,6%). Срок наблюдения составил 41-84 месяцев (в среднем 60,9 ±8,8 месяцев). В проспективной группе возраст пациентов составил 23 – 72 года (средний возраст 51,3 ±11,9 лет). Распределение по полу: женщин - 18 (60,0%), мужчины – 12 (40,0 %). Срок наблюдения составил 13-23 месяца (в среднем 17,4 ±3,1 месяца). Таким образом, обе группы однородные и достоверно различались только по длительности наблюдения.

    Диагностика УМ основывалась на данных стандартного офтальмологического обследования (визометрия, тонометрия, периметрия, биомикроскопия, офтальмоскопия (см. рис.1), гониоскопия). Весь комплекс клинических исследований в проспективной группе выполнен автором самостоятельно. Всем пациентам проводили эхографию глазного яблока. При непрозрачных оптических средах, малых размерах опухоли по показаниям проводили дуплексное сканирование в режиме ЦДК (см. рис.2) (аппарат GE Voluson 730 Pro, ФРГ) совместно с к.м.н., Амирян А.Г. в отделе ультразвуковых методов исследования (руководитель – профессор, д.м.н. Киселева Т.Н.), флюоресцентную ангиографию (к.м.н., Склярова Н.В.), оптическую когерентную томографию (к.м.н., Мякошина Е.Б.) (отдел офтальмоонкологии и радиологии, руководитель – проф., д.м.н. Саакян С.В.) и компьютерную томографию орбит (по стандартной методике по месту жительства). Во всех случаях при проведении патогистологического исследования удаленного глаза по стандартной методике верифицирована увеальная меланома (см. рис. 3 и 4). Исследования проводили совместно с к.м.н. Захаровой Г.П. (отдел патологической анатомии и гистологии глаза , руководитель – проф., д.м.н. Хорошилова И.П.)

    При сборе анамнеза выясняли факт проживания в местах с неблагоприятной экологической обстановкой, наличие профессиональных вредностей, отягощенной наследственности по онкологическим заболеваниям, сопутствующей патологии, времени от начала появления первых жалоб до обращения к врачу.

     Образцы тканей. После энуклеации пораженного глаза биопсийный материал опухоли и интактной хориоидеи, а также образцы периферической крови (консервант: 0.5М раствор ЭДТА) сохраняли при –20 о С. Для исследования образцов ТИАБ материал собирали с цитологических препаратов.

    Исследования у ретроспективной группы пациентов (n=104) проводили на базе лаборатории молекулярной генетики Первого МГМУ им. И.М. Сеченова (заведующий лабораторией – д.б.н., проф. Залетаев Д.В.) совместно с к.м.н. Скляровой Н.В. (отдел офтальмоонкологии и радиологии МНИИ ГБ им. Гельмгольца, руководитель отдела – профессор, д.м.н. Саакян С.В). У проспективной группы пациентов (n=30) исследования проводили на базе лаборатории молекулярной диагностики и геномной дактилоскопии НИИ Генетики и селекции промышленных микроорганизмов (заведующий лабораторией – д.б.н., проф. Носиков В.В.) совместно с к.б.н. Логиновым В.И. и Бурденным А.М., по расширенной методике (полная и частичная моносомия 3, метилирование гена SEMA3B, мутации в генах GNAQ и GNA11, полиморфизм гена ABCB1).

    Геномную ДНК из образцов опухолей, условно нормальной хориоидеи и периферической крови выделяли с помощью протеиназы К с последующей фенол-хлороформной экстракцией. При выделении ДНК из цитологических препаратов собранный со стекла материал обрабатывали лизирующим буфером, содержащим протеиназу К и полученный лизат использовали в качестве матрицы для постановки ПЦР. Потерю гетерозиготности (ПГ) в хромосомных районах 1p36, 1р31.3, 3p25.3, 3p21.3, 3p14.2, 3q12, 3q26.3, 3q28 идентифицировали с использованием набора высокополиморфных маркеров. Контролем служила ДНК лейкоцитов периферической крови. Для определения метилирования СpG-островков промоторных областей генов применяли метод метил-чувствительной ПЦР. В качестве матрицы для ПЦР использовали ДНК из клеток УМ, предварительно гидролизованную рестриктазами HpaII (для генов RASSF1A, SEMA3B).

    На основе проведенного молекулярно-генетического анализа все пациенты ретроспективной группы (n=104) разделены на 4 подгруппы: 1 группа - с моносомией хромосомы 3 (n=45, 43,3%), 2 группа - с ПГ в хромосоме 1p (n=30, 28,8%), 3 группа – с метилированием гена RASSF1A (n=23, 22,1%) и 4 группа сравнения (n=29, 27,9%), у которых не выявлено ни одного из исследуемых МГИ. Отмечалось сочетание нескольких МГИ у ряда пациентов.

    По степени риска развития метастатической болезни все пациенты ретроспективной группы (n=104) были разделены на 2 подгруппы – с высоким (группа А) и низким (группа Б) риском. Для сравнения при выявлении полиморфизма гена ABCB1 выделена контрольная группа (n=60), которую составили относительно здоровые лица из различных регионов РФ, сопоставимые по полу и возрасту с проспективной группой (n=30).

    Диспансерное наблюдение осуществляли совместно с к.м.н. Амирян А.Г. в соответствии с приказом № 135 МЗ РФ от 19.04.1999 один раз в 3 месяца в течение первого года, затем один раз в 6 месяцев в течение второго года, в дальнейшем – один раз в год во взрослом консультативно-поликлиническом отделении МНИИ ГБ им. Гельмгольца. Пациенты, которые по различным причинам не могли приехать на осмотр, сообщали о себе по телефону, факсу и через родственников путем передачи справок от врачей по месту жительства. Часть данных получена путем запросов в департаменты здравоохранения по месту жительства пациентов.

    Статистическая обработка результатов выполнена автором самостоятельно. Для исследования выживаемости пациентов после лечения использовался статистический метод множительных оценок Каплана-Мейера, а для оценки различия между двумя выборками – двухвыборочный критерий Вилкоксона и регрессионная модель Кокса. Для анализа полученной информации все наблюдения разделены на 2 типа: цензурированные (незавершенные), в которых исход не наступил на момент окончания исследования (пациенты живы), либо пациенты выбыли из исследования (в том числе смерть от других причин) и нецензурированные (завершенные), при которых зафиксирована смерть пациента от метастатической болезни. Статистическую обработку результатов при оценке полиморфизма генов проводили с использованием закона генетического равновесия Харди-Вайнберга для аутосомных признаков. При сравнении частот встречаемости генотипов применяли критерий Пирсона, а для малых выборок – точный критерий Фишера. Комплексную оценку взаимосвязей между исследуемыми группами проводили с использованием логистической регрессии, определяя отношение шансов (OR) с 95%-ным доверительным интервалом (CI) с уровнем значимости принятым равным 0,05. Рассматривали также результаты статистически маргинально значимые (0,05 < P ≤ 0,1), что соответствует доверительному интервалу 94% (в отличие от стандартного доверительного интервала 95% при р = 0,05). Расчеты проводили в пакетах программ для Windows (Microsoft Excel, Statistica 6.1).


Страница источника: 8
Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

«Живая» хирургия в рамках XVI Всероссийской конференции с международным участием «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии»«Живая» хирургия в рамках XVI Всероссийской конференции с ме...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Секундо В. Трансплантация рефрактивной лентикулы  используя VisuMax как способ лечения осложнений операции Lasik. ВидеопрезентацияСекундо В. Трансплантация рефрактивной лентикулы  используя ...

Симпозиум компании «Алкон» с демонстрацией показательных операцийСимпозиум компании «Алкон» с демонстрацией показательных операций

Осложненная катаракта: особенности хирургии и фармакотерапииОсложненная катаракта: особенности хирургии и фармакотерапии

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии XVI Всероссийская конференция с  международным участием Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Бактериальные инфекции глаза: взгляд офтальмолога и офтальмохирургаБактериальные инфекции глаза: взгляд офтальмолога и офтальмо...

Офтальмология: диагностика проблем, пути решенияОфтальмология: диагностика проблем, пути решения

Глаукома:теория и практика. Новый взглядГлаукома:теория и практика. Новый взгляд

Актуальные вопросы в лечении и профилактике ВМДАктуальные вопросы в лечении и профилактике ВМД

Современные аспекты и новые возможности ОКТСовременные аспекты и новые возможности ОКТ

Патология глазной поверхности и глаукома. Новые возможности и новые перспективы в решении «старых» проблемПатология глазной поверхности и глаукома. Новые возможности ...

Новейшие достижения в офтальмологииНовейшие достижения в офтальмологии

X Съезд офтальмологов России X Съезд офтальмологов России

Иммуномодулирующая и противовирусная терапия при лечении воспалительных заболеваний глаз различной этиологииИммуномодулирующая и противовирусная терапия при лечении вос...

«Нова Медика»: новые горизонты офтальмологии«Нова Медика»: новые горизонты офтальмологии

Рейтинг@Mail.ru