Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Материал и методы исследования


1----------

     Клиническое-инструментальное исследование выполнено у 278 пациентов, которым проведена энуклеация в период 2005 -2007 и 2012 гг. Средний возраст пациентов составил 52,9 ±11,9 лет. В настоящее исследование включены 134 пациента. Критерием отбора пациентов стало наличие ткани опухоли в базе Института и наличие образцов периферической крови, а также наличие хладагента в момент исследования. Пациенты разделены на 2 группы: ретроспективная – 104 пациента, получивших лечение в период 2005-2007 г., период их наблюдения до 2012 гг., и проспективная группы - 30 пациентов, получивших лечение в 2012 году.

    В ретроспективной группе возраст пациентов составил 22 – 84 года (средний возраст 53,7 ±12,2 лет). Распределение по полу: женщин - 66 (63,4%), мужчин – 38 (36,6%). Срок наблюдения составил 41-84 месяцев (в среднем 60,9 ±8,8 месяцев). В проспективной группе возраст пациентов составил 23 – 72 года (средний возраст 51,3 ±11,9 лет). Распределение по полу: женщин - 18 (60,0%), мужчины – 12 (40,0 %). Срок наблюдения составил 13-23 месяца (в среднем 17,4 ±3,1 месяца). Таким образом, обе группы однородные и достоверно различались только по длительности наблюдения.

    Диагностика УМ основывалась на данных стандартного офтальмологического обследования (визометрия, тонометрия, периметрия, биомикроскопия, офтальмоскопия (см. рис.1), гониоскопия). Весь комплекс клинических исследований в проспективной группе выполнен автором самостоятельно. Всем пациентам проводили эхографию глазного яблока. При непрозрачных оптических средах, малых размерах опухоли по показаниям проводили дуплексное сканирование в режиме ЦДК (см. рис.2) (аппарат GE Voluson 730 Pro, ФРГ) совместно с к.м.н., Амирян А.Г. в отделе ультразвуковых методов исследования (руководитель – профессор, д.м.н. Киселева Т.Н.), флюоресцентную ангиографию (к.м.н., Склярова Н.В.), оптическую когерентную томографию (к.м.н., Мякошина Е.Б.) (отдел офтальмоонкологии и радиологии, руководитель – проф., д.м.н. Саакян С.В.) и компьютерную томографию орбит (по стандартной методике по месту жительства). Во всех случаях при проведении патогистологического исследования удаленного глаза по стандартной методике верифицирована увеальная меланома (см. рис. 3 и 4). Исследования проводили совместно с к.м.н. Захаровой Г.П. (отдел патологической анатомии и гистологии глаза , руководитель – проф., д.м.н. Хорошилова И.П.)

    При сборе анамнеза выясняли факт проживания в местах с неблагоприятной экологической обстановкой, наличие профессиональных вредностей, отягощенной наследственности по онкологическим заболеваниям, сопутствующей патологии, времени от начала появления первых жалоб до обращения к врачу.

     Образцы тканей. После энуклеации пораженного глаза биопсийный материал опухоли и интактной хориоидеи, а также образцы периферической крови (консервант: 0.5М раствор ЭДТА) сохраняли при –20 о С. Для исследования образцов ТИАБ материал собирали с цитологических препаратов.

    Исследования у ретроспективной группы пациентов (n=104) проводили на базе лаборатории молекулярной генетики Первого МГМУ им. И.М. Сеченова (заведующий лабораторией – д.б.н., проф. Залетаев Д.В.) совместно с к.м.н. Скляровой Н.В. (отдел офтальмоонкологии и радиологии МНИИ ГБ им. Гельмгольца, руководитель отдела – профессор, д.м.н. Саакян С.В). У проспективной группы пациентов (n=30) исследования проводили на базе лаборатории молекулярной диагностики и геномной дактилоскопии НИИ Генетики и селекции промышленных микроорганизмов (заведующий лабораторией – д.б.н., проф. Носиков В.В.) совместно с к.б.н. Логиновым В.И. и Бурденным А.М., по расширенной методике (полная и частичная моносомия 3, метилирование гена SEMA3B, мутации в генах GNAQ и GNA11, полиморфизм гена ABCB1).

    Геномную ДНК из образцов опухолей, условно нормальной хориоидеи и периферической крови выделяли с помощью протеиназы К с последующей фенол-хлороформной экстракцией. При выделении ДНК из цитологических препаратов собранный со стекла материал обрабатывали лизирующим буфером, содержащим протеиназу К и полученный лизат использовали в качестве матрицы для постановки ПЦР. Потерю гетерозиготности (ПГ) в хромосомных районах 1p36, 1р31.3, 3p25.3, 3p21.3, 3p14.2, 3q12, 3q26.3, 3q28 идентифицировали с использованием набора высокополиморфных маркеров. Контролем служила ДНК лейкоцитов периферической крови. Для определения метилирования СpG-островков промоторных областей генов применяли метод метил-чувствительной ПЦР. В качестве матрицы для ПЦР использовали ДНК из клеток УМ, предварительно гидролизованную рестриктазами HpaII (для генов RASSF1A, SEMA3B).

    На основе проведенного молекулярно-генетического анализа все пациенты ретроспективной группы (n=104) разделены на 4 подгруппы: 1 группа - с моносомией хромосомы 3 (n=45, 43,3%), 2 группа - с ПГ в хромосоме 1p (n=30, 28,8%), 3 группа – с метилированием гена RASSF1A (n=23, 22,1%) и 4 группа сравнения (n=29, 27,9%), у которых не выявлено ни одного из исследуемых МГИ. Отмечалось сочетание нескольких МГИ у ряда пациентов.

    По степени риска развития метастатической болезни все пациенты ретроспективной группы (n=104) были разделены на 2 подгруппы – с высоким (группа А) и низким (группа Б) риском. Для сравнения при выявлении полиморфизма гена ABCB1 выделена контрольная группа (n=60), которую составили относительно здоровые лица из различных регионов РФ, сопоставимые по полу и возрасту с проспективной группой (n=30).

    Диспансерное наблюдение осуществляли совместно с к.м.н. Амирян А.Г. в соответствии с приказом № 135 МЗ РФ от 19.04.1999 один раз в 3 месяца в течение первого года, затем один раз в 6 месяцев в течение второго года, в дальнейшем – один раз в год во взрослом консультативно-поликлиническом отделении МНИИ ГБ им. Гельмгольца. Пациенты, которые по различным причинам не могли приехать на осмотр, сообщали о себе по телефону, факсу и через родственников путем передачи справок от врачей по месту жительства. Часть данных получена путем запросов в департаменты здравоохранения по месту жительства пациентов.

    Статистическая обработка результатов выполнена автором самостоятельно. Для исследования выживаемости пациентов после лечения использовался статистический метод множительных оценок Каплана-Мейера, а для оценки различия между двумя выборками – двухвыборочный критерий Вилкоксона и регрессионная модель Кокса. Для анализа полученной информации все наблюдения разделены на 2 типа: цензурированные (незавершенные), в которых исход не наступил на момент окончания исследования (пациенты живы), либо пациенты выбыли из исследования (в том числе смерть от других причин) и нецензурированные (завершенные), при которых зафиксирована смерть пациента от метастатической болезни. Статистическую обработку результатов при оценке полиморфизма генов проводили с использованием закона генетического равновесия Харди-Вайнберга для аутосомных признаков. При сравнении частот встречаемости генотипов применяли критерий Пирсона, а для малых выборок – точный критерий Фишера. Комплексную оценку взаимосвязей между исследуемыми группами проводили с использованием логистической регрессии, определяя отношение шансов (OR) с 95%-ным доверительным интервалом (CI) с уровнем значимости принятым равным 0,05. Рассматривали также результаты статистически маргинально значимые (0,05 < P ≤ 0,1), что соответствует доверительному интервалу 94% (в отличие от стандартного доверительного интервала 95% при р = 0,05). Расчеты проводили в пакетах программ для Windows (Microsoft Excel, Statistica 6.1).


Страница источника: 8
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru