Online трансляция


Научно-практическая конференция с международным участием
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий
Москва. Гостиница Holiday Inn Sokolniki
4 февраля 2017 г.



15-я Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием
Современные технологии лечения витреоретинальной патологии
Современные технологии лечения витреоретинальной патологии
Сочи, 16-17 марта 2017
Официальный сайт

Партнеры


Valeant thea
Allergan Фокус
santen tradomed
sentiss



Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 22 2016
№ 21 2016
№ 20 2015
№ 19 2015
№ 18 2015
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
№ 1 2016 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
№ 1 2016 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 4 2016
№ 3 2016
№ 2 2016
№ 1 2016
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 5 2016
№ 4 2016
№ 3 2016
№ 2 2016
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2016
Выпуск 3. 2016
Выпуск 2. 2016
Выпуск 1. 2016
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№ 6 (32) Декабрь 2016
№ 5 (31) Октябрь 2016
№ 3 (29) Июнь 2016
№ 2 (28) Апрель 2016
№ 1 (27) Март 2016
....


Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Материал экспериментальной части исследования (постановка пробы с дексаметазоном in vitro)


1----------

    Для оценки влияния раствора дексаметазона (раствор для инъекций, KRKA, 4 мг/мл) на популяции лимфоцитов была проведена проба in vitro на цельной крови и на выделенных лимфоцитах. В основу метода положен способ инкубации in vitro выделенных лимфоцитов с раствором дексаметазона 0,4%, описанный в 2006 г. Жуковой О.Б. [31].

    Экспериментальная часть исследования включала в себя:

    1. Оценку влияния различных концентраций и времени экспозиции раствора дексаметазона на количественный состав и уровень экспрессии поверхностных рецепторов Т-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD 25, CD127, CD161), В-лимфоцитов (CD19), NK-клеток (CD16 и CD56);

    2. Оценку влияния различных концентраций раствора дексаметазона на функциональную активность популяций лимфоцитов (активность СДГ).

    Материалом для исследования была венозная кровь практически здоровых детей разного возраста, взятая утром до приема пищи.

    В эксперименте анализировали влияние различных концентраций препарата. Терапевтическая доза дексаметазона составляет 0,01-0,02 мг/кг. Выбор количества препарата проводили из расчета терапевтической дозы на объем цикрулирующей крови. Объем циркулирующей крови рассчитывали по Баирову Г.А. (1973) [8] в зависимости от возраста: дети 1-3-х лет – 67,5-78,5 мл/кг, дети 4-6-ти лет – 65,3-79,7 мл/кг, дети 7-9-ти лет – 70,5-88,5 мл/кг, дети 10-16-ти лет – 66,5-83,5 мл/кг.

    При проведении оценки воздействия различных концентраций раствора дексаметазона на клетки периферической крови, первым этапом в пробирки, содержащие по 500 мкл цельной крови, были добавлены 2, 20 и 200 мкл (концентрация 4,0, 40,0 и 360,0 мкг/л) исследуемого лекарственного препарата. Количество лимфоцитов в пробе было одинаковым и составляло 2000-2700 клеток/мкл. В каждой группе исследуемых поверхностных рецепторов лимфоцитов (CD, cluster of differentiation) выполняли контрольную пробу, куда не вводили раствор дексаметазона. В этой серии экспериментов время экспозиции цельной крови с раствором дексаметазона составило 1 час. После чего проводили пробоподготовку, включающую инкубирование цельной крови с моноклональными антителами, с последующим лизисом эритроцитов и фиксацией клеток раствором CellFIX (BD CellFIX № 340181) по стандартной методике [58]. В эксперименте использованы флуоресцирующие моноклональные анктитела производства Beckman Coulter и Beckton Dikinson (США): CD4-FITS, CD3-FITS, CD3-PE-Cy5, CD8-PE, CD161-PE, CD(16/56)-PE, CD45-PerCP, CD25PE-Cy7, CD19-PE, CD127-PE, CD25PE-Cy7.

    Проведение эксперимента по изучению влияния раствора дексаметазона на функциональную активность исследуемых популяций лимфоцитов включало подготовку лимфоконцентрата из пробы венозной крови по стандартной методике. Полученный лимфоконцентрат разводили 8000 мкл среды RPMI-1640, предварительно подогретой до 37°С. Полученную клеточную суспензию делили на 4 пробирки по 2000 мкл. Одну пробирку (2000 мкл клеточной суспензии) оставляли в качестве контроля, в другие 3 пробирки, содержащие по 2000 мкл лимфоконцентрата, добавляли 2, 20 и 200 мкл раствора дексаметазона и выдерживали в течении 1-го часа. Потом клетки отмывали с использованием среды RPMI-1640, предварительно подогретой до 37°С в течение 10-ти минут. Клеточную суспензию после взаимодействия с раствором дексаметазона обрабатывали по методике для проточной цитофлуориметрии (проба «цитохимия»), описанной ранее.

    Проведено исследование влияния различного времени экспозиции раствора дексаметазона на митохондриальную активность исследуемых популяций лимфоцитов периферической крови в предварительно полученном лимфоконцентрате. Клеточную суспензию готовили по стандартной методике. Полученный лимфоконцентрат разводили 6000 мкл среды RPMI-1640, предварительно подогретой до 37°С. Полученную клеточную суспензию делили на 3 пробирки по 2000 мкл. Одну пробирку (2000 мкл клеточной суспензии) оставляли в качестве контроля, в другие 2 пробирки, содержащие по 2000 мкл лимфоконцентрата, добавляли 5 мкл раствора дексаметазона и выдерживали в течение 1-го и 3-х часов. Потом клетки отмывали с использованием среды RPMI-1640, предварительно подогретой до 37°С в течение 10-ти минут при 2000 об./мин. Полученные после взаимодействия с раствором дексаметазона клетки, обрабатывали по методике проточной цитофлуориметрии, описанной ранее. В исследовании использованы флуоресцирующие моноклональные антитела производства Beckman Coulter и Beckton Dikinson (США): CD4-FITS, CD3-FITS, CD3-PerCP, CD19-PE, CD161-PE, CD45-PERCP, CD45PE-Cy7, CD127-PE, CD25PE-Cy7.

    В ходе проведенного эксперимента методом проточной цитофлуориметрии были исследованы уровни экспрессии поверхностных рецепторов лимфоцитов (CD), оцениваемые по логарифму флуоресценции, количественный состав исследуемых популяций лимфоцитов и их функциональная активность (СДГ).


Страница источника: 58
Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru