Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Влияния экстракта амниотической мембраны на развитие неоваскуляризации роговицы после щелочных ожогов


1Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова

    Введение

     Длительное время ведется поиск новых средств для лечения заболеваний роговицы. При ожогах роговицы и кератитах с 40-х годов в качестве биогенного стимулятора применялась амниотическая мембрана (АМ) [18, 25]. На настоящий момент установлено, что применение АМ стимулирует регенерацию клеток роговичного эпителия за счет содержания эпидермального фактора роста (EGF) [12, 14], оказывает антибактериальный эффект, угнетает фиброз и ангиогенез [5, 17, 23]. Кроме того, АМ обладает низкой иммуногенностью, так как содержит неполные HLA-A, B, C и DR антигены и поэтому реакции отторжения АМ наблюдаются крайне редко [3, 9], а также является субстратом для выращивания стволовых и эпителиальных клеток за счет наличия базальной мембраны [10, 24]. Однако применение АМ связано с необходимостью хирургического вмешательства, что исключает возможность быстрого применение данного метода лечения после получения повреждения или химического ожога роговицы [1, 11]. Кроме того, хранение АМ требует создания и поддержания определенных условий [19]. Одна из гипотез, объясняющая механизмы терапевтического эффекта трансплантации консервированной АМ, которая представляет собой инертную ткань, не содержащую живых клеток, гласит, что влияние консервированной АМ на процессы репарации, главным образом обусловлено изменением локальной среды за счет факторов роста и цитокинов, которые локализуются в эпителиальных клетках [8, 21]. В связи с этим уделяется особое внимание сохранению морфологии эпителия при консервации АМ [20, 24]. В настоящее время разработано несколько методик получения экстракта амниотической мембраны (ЭАМ) [2, 6, 7, 16, 22]. Однако, данных об использовании ЭАМ и в литературе недостаточно.

    Цель

    Оценить влияние инстилляций жидкого ЭАМ на развитие неоваскуляризации роговицы после тяжелых щелочных ожогов роговицы и лимба и вероятность развития перфорации в отдаленные сроки после ожога роговицы в эксперименте на кроликах.

    Материал и методы

    Образец амниона был получен через 4 часа после родов, выделен из тканей плодных оболочек в стерильных условиях и трижды отмыт стерильным раствором Хэнкса. Фрагмент амниотической мембраны массой 5.0 г был измельчен до фрагментов 4-5 мм. Масса амниотической мембраны была смешана с кварцевым песком размером частиц 0.1 и измельчена ручным способом. Амнион был суспендирован в физиологическом растворе (20 мл) и центрифугирован на 2000 об/мин в течение 10 минут. Надосадочная жидкость, не содержащая различимых частиц амниотической мембраны, была собрана и отфильтрована через бактериальный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм. Аликвоты экстракта аминотической мембраны были разлиты в одноразовые флаконы-капельницы в стерильных условиях и хранились до использования при t=-20C°.

    Экспериментальное исследование проводили на 6 половозрелых кроликах (12 глаз) породы шиншилла, весом 2,5-3,0 кг. У животных были смоделированы щелочные ожоги роговицы (50% площади) и лимба (180°). Ожоги выполнялись под местной анестезией аппликацией 1M раствора NaOH в течение 1 минуты, с последующей тщательной нейтрализацией остатков щелочи достаточным количеством физиологического раствора. После нанесения ожога все животные получали инстилляции гентамицина 4 раза в сутки в оба глаза и экстракта амниотической мембраны в неконтрольный (левый) глаз в течение 20 суток. В ходе наблюдения у животных регулярно оценивали площадь неоваскуляризации роговицы. Заключение о влиянии исследуемого препарата на вероятность развития перфорации роговицы и окончательную оценку интенсивности неоваскуляризации делали через 30 суток.

    Результаты

    На 4 сутки после ожога площадь неоваскуляризации на контрольных и неконтрольных глазах составила 5,5±1,2% и 7,5±1,7%, соответственно (p=0.23). Статистически значимое увеличение площади неоваскуляризации при применении экстракта амниотической мембраны по сравнению с контролем было зафиксировано на 7 сутки 12,1±3,2% и 28,5±12,7%, соответственно (p=0.01) и сохранялось на протяжении всего периода наблюдения, составив к исходу 30 суток 43,3±4,7% и 81,9±19,7%, соответственно (p=0.02) (рис.). Соотношение наличия или отсутствия перфорации роговицы среди контрольных и неконтрольных глаз составило 2/4 и 4/2, соответственно (p=0.15).

    Обсуждение

    Достоверно установлено присутсвие в АМ эпидермального фактора роста (EFG), фактора роста фибробластов (bFGF) и фактора роста кератиноцитов (KGF), трансформирующего фактора роста (TGF) альфа и бета, фактора роста гепатоцитов (HGF) и фактора роста нервов (NGF) [15]. Действие данных факторов направлено на стимуляцию эпителизации. С помощью метода иммуносорбентного анализа в составе АМ был обнаружен фактор роста сосудов (AGF) и васкулоэндотелиальный фактор роста (VEGF) [3, 14]. Данные факторы оказывают сильное влияние на проницаемость сосудов, являются мощными ангиогенными белками. Кроме того, в АМ входят тканевые ингибиторы металлопротеиназ (TIMP), действие которых прямо противоположно. Они обладают деградирующей способностью в отношении почти всех компонентов внеклеточного матрикса и подавляют неоваскуляризацию [4].

    В ходе нашего экспериментального исследования было установлено, что экстракт амниотической мембраны не вызывает увеличения риска развития перфорации роговицы в отдаленные сроки после ожога. Нами не было установлено увеличения числа перфораций, что позволяет сделать вывод, что в рассмотренной нами экспериментальной модели преобладают эффекты выделенных из АМ ростовых факторов, а не тканевых ингибиторов металлопротеиназ. Мы не исключаем, что при рассмотрении другой модели возможно получение иного результата.

    Результаты проведенного экспериментального исследования демонстрируют стимулирующее влияние ЭАМ на неоваскуляризацию роговицы после тяжелых щелочных ожогов роговицы и лимба. Применение же АМ в классическом виде угнетает ангиогенез [18]. Данный факт может означать, что полученный нами ЭАМ включает преимущественно факторы, стимулирующие неоваскуляризацию (AGF и VEGF), и содержит меньшее количество тканевых ингибиторов металлопротеиназ, либо биологическая эффективность тканевых ингибиторов металлопротеиназ в рамках нашего исследования меньше эффективности ростовых факторов.

    Развитие неоваскуляризации является защитным механизмом, направленным на ускорение репаративных процессов в поврежденной области. Стимуляция неоваскуляризации при применении ЭАМ в рамках нашего исследования может объяснить отсутствие увеличения числа перфораций в опытной группе, а при других условиях или при увеличении числа наблюдений может показать положительные эффекты в отношении предотвращения развития перфораций. Это может найти применение в клинической практике, например при тяжелых ожогах или глубоких язвах.

    Заключение

    Экстракт амниотической мембраны стимулирует неоваскуляризацию роговицы после тяжелых щелочных ожогов роговицы и лимба и не вызывает увеличения риска развития перфорации роговицы в отдаленные сроки после ожога.


Страница источника: 147

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru