Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Торможение миграционной активности клеток эпителия роговицы под влиянием экстракта амниотической мембраны


1Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова

    Актуальность

     Роговичный эпителий обладает рядом специфических свойств, которые отличают его от других типов покровного эпителия. Одним из таких свойств является выраженная способностью роговичного эпителия к центрипетальной миграции [24]. Контроль миграции эпителиальных клеток дает широкие возможности для коррекции процесса заживления эпителиальных дефектов роговицы, при этом как его стимуляция, так и ингибирование могут найти применение в офтальмологической практике. В частности, стимуляция миграционной активности может дать положительный эффект в случаях эррозий и персистирующих эпителиальных дефектов роговицы или недостаточности стволовых лимбальных клеток. Наоборот, торможение миграции необходимо в послеоперационном периоде после фоторефракционной кератоэктомии для формирования равномерного слоя эпителия.

    С целью стимуляции эпителизации роговицы широко применяется амниотическая мембрана, в основном за счет ее функции искусственной базальной мембраны [12]. Однако кроме этой функции она может проявлять себя как источник биологически активных молекул, влияющих на миграцию эпителиальных клеток [13]. Поэтому вопрос действия растворимых факторов экстракта амниотической мембраны (ЭАМ) на миграционную способность роговичных эпителиоцитов требует изучения.

    Цель

    Изучить эффект ЭАМ на заживление раны культурального монослоя эпителия роговицы.

    Материал и методы

    Образец амниона был получен через 4 часа после родов, выделен из тканей плодных оболочек в стерильных условиях и трижды отмыт стерильным раствором Хэнкса. Фрагмент амниотической мембраны массой 5.0 г был измельчен до фрагментов 4-5 мм. Масса амниотической мембраны была смешана с кварцевым песком размером частиц 0.1 и измельчена ручным способом. Амнион был суспендирован свежего в физиологическом растворе (20 мл) и центрифугирован на 2000 об/мин в течение 10 минут. Надосадочная жидкость, не содержащая различимых частиц амниотической мембраны, была собрана и отфильтрована через бактериальный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм. Аликвоты экстракта аминотической мембраны были разлиты в одноразовые флаконы-капельницы в стерильных условиях и хранились до использования при t=-20C°. Клеточная культура эпителия роговицы человека была получена из донорского материала через 36 часов после гибели донора после забора роговицы для кератопластики. После отделения внешних тканей глазное яблоко дезинфицировали раствором повидон-иода в течение 20 секунд и трижды отмывали в растворе Хэнкса. Корнеосклеральное кольцо формировали разрезом в 3 мм кзади от лимба и погружали в стерильный раствор Хэнкса, в котором проводили все дальнейшие манипуляции – разделение кольца на фрагменты 3×4 мм. Полученные фрагменты переносили в чашки Петри (3,5 см) со средой DMEM:F12 и 10% сыворотки крови крупного рогатого скота и укладывали внешней поверхностью на дно чашки. Фрамгенты инкубировали в течение 72 часов при t=37C° и атмосфере 5% CO2. После распространения эпителиальных клеток с эксплантов на дно чашек, фрагменты корнеосклерального кольца удаляли, а клетки трипсинизировали для пересева в культуральные флаконы 25 см2. Культуру выращивали в культуральных флаконах до 3 пассажа, после чего клетки были внесены в культуральные 48-луночные планшеты. После формирования монослоя в каждом образце культуры была нанесена рана монослоя шириной 1179.2±51.6 мкм и внесен экстракт амниона до концентрации 6.3%, 0.63% и 0.063%. Интенсивность заживления раны монослоя оценивали по расстоянию между краями раны через 24 и 48 часов культивирования. Культивацию проводили в среде DMEM/F12 (с 1% содержанием сыворотки крови крупного рогатого скота), при t=37C° и атмосфере 5% CO2.

    Результаты

    Через 24 часа после нанесения раны в образцах культуры с содержанием ЭАМ в концентрациях 6.3%, 0.63% и 0.063% и контроле ширина раны монослоя составила, соответственно 539.5±94.4, 474±77.2, 389.5±141.0 и 316.5±74.9 мкм. Статистически значимые различия по сравнению с контролем были выявлены для образцов с содержанием 6.3%, 0.63% (соответственно, p=0.04 и p=0.01). Через 48 часов в образцах культуры с содержанием ЭКМ в концентрациях 6.3%, 0.63% и 0.063% и контроле ширина раны монослоя составила, соответственно 433±130.3, 235.5±56.4, 159.5±100 и 132.5±53.2 мкм (рис.). Статистически значимые различия по сравнению с контролем (p<0.01) были выявлены для всех образцов.

    Обсуждение

    Амниотическая мембрана (АМ) – внутренний бессосудистый слой трехслойной плодной оболочки. Впервые успешное терапевтическое применение АМ было описано Davis в 1910 при пересадке кожи [4]. Позже применение АМ в офтальмологии было предложено Rotth в 1940 после успешного применения АМ в лечении химических ожогов роговицы [5]. Несмотря на то, что АМ широко применялась в СССР в офтальмологической практике, ее общемировая популярность отмечается лишь с 1992 года после работы Batlle [6]. Структура мембраны, которая представляет собой монослой метаболически активного кубического эпителия на бессосудистой, сравнительно бедной строме, делает ее легкой в обращении и эластичной тканью [2,9].

    Амниотическая мембрана нашла широкое применение в офтальмологии для лечения широко спектра заболеваний переднего сегмента глаза.

    АМ применяется при недостаточности стволовых лимбальных клеток, рубцующемся пемфигоиде [25] и после резекции паннуса [20], а также при буллезной кератопатии [16,7], персистирующих эпителиальных дефектах и перфорациях роговицы [1,14,10,15,23], хирургическом лечении птеригиума [17], опухолей конъюнктивы [3], восстановлении конъюнктивальных сводов [22], при лечении последствий химических ожогов переднего сегмента глаза [11] и хирургии глаукомы [8].

    Точный механизм лечебного эффекта АМ изучен не до конца, однако ключевым фактором считается способность АМ выступать в качестве базальной мембраны, способствуя миграции и прикреплению клеток.

    Однако как сам кубический эпителий, так и строма содержат ряд цитокинов и факторов роста, среди которых преобладают трансформирующий фактор роста β, эпидермальный фактор роста [21,18] и основной фактор роста фибробластов [13]. Поэтому эффекты АМ опосредованы также действием данных сигнальных молекул.

    Также было показано, что в АМ в большом количестве содержит тканевые ингибиторы матриксных металлопротеиназ (ТИМП), преимущественно ТИМП-4 и ТИМП-2 [13]. В то время как, трансформирующий фактор роста β является мощным стимулятором заживления раны культурального монослоя [19], блокирование активности матриксных металлопротеиназ оказывает тормозящее влияние на миграцию клеток в культуре, поэтому ЭАМ может проявлять как стимулирующие, так и ингибирующие эффекты в отношении клеточной миграции. С учетом того, что удельная биологическая активность этих молекул различная, а также могут иметь место различия по экстрактивности, различные образцы ЭАМ также могут иметь неодинаковые эффекты в отношении теста заживления раны культурального монослоя.

    Заключение

    По результатам данной работы ЭАМ обладает дозозависимым тормозящим действием на заживление раны культурального монослоя эпителия роговицы, что объясняется снижением миграционной способности клеток эпителия роговицы под действием ЭАМ. Данный эффект может быть опосредован ингибиторами матриксных металлопротеиназ, входящих в состав экстракта и превышением их биологической активности над активностью, входящих в ЭАМ, сигнальных молекул, стимулирующих клеточную миграцию.


Страница источника: 144
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru