Online трансляция


Трансляция симпозиумов в рамках Международного офтальмологического конгресса
Белые ночи
Белые ночи
Санкт-Петербург
29 мая - 2 июня 2017 г. Трансляция проводится из двух залов:
Зал «Стрельна»
Зал «Санкт-Петербург»


Международная конференция по офтальмологии
Восток–Запад
Восток–Запад
Уфа
8 - 9 июня 2017 г.

Партнеры


Valeant thea
Allergan Фокус
santen tradomed
sentiss



Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 24 2017
№ 23 2016
№ 22 2016
№ 21 2016
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 1 2017 г.
№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 1 2017 г.
№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 1 2017
№ 4 2016
№ 3 2016
№ 2 2016
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 1 2017
№ 5 2016
№ 4 2016
№ 3 2016
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2016
Выпуск 3. 2016
Выпуск 2. 2016
Выпуск 1. 2016
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№1 (33) Март 2017
№ 6 (32) Декабрь 2016
№ 5 (31) Октябрь 2016
№ 3 (29) Июнь 2016
....


facebooklogo     youtubelogo



Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Выделение стволовых клеток орбитальной жировой клетчатки человека


1МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Росмедтехнологии» Минздрава РФ

    Актуальность

     За последние десятилетия увеличилось количество исследований, посвященных возможности применения клеточных технологий в офтальмологии. Одним из перспективных направлений является использование стволовых клеток, в том числе выделенных из орбитальной жировой клетчатки человека. Активный научный интерес к этой ткани обусловлен уникальным нейроэктодермальным происхождением отдельных ее фракций, однако актуальными остаются многие методологические вопросы. Данные литературы о методологии выделения стволовых клеток орбитальной жировой клетчатки скудны и неоднозначны [1, 2, 4, 5]. Описанные методики включали механическое измельчение образцов жировой ткани, ферментативное расщепление раствором коллагеназы, фильтрацию и центрифугирование. При этом нет единого подхода к выбору концентрации раствора коллагеназы, продолжительности ферментативного расщепления и параметров центрифугирования.

    Авторы использовали преимущественно орбитальную жировую клетчатку из верхних жировых пространств, удаляемую при выполнении косметической блефаропластики [4, 5] в объеме до 1,0 мл [3], однако другие фракции орбитальной жировой клетчатки также представляют интерес для изучения. Альтернативным материалом может служить кадаверная жировая ткань, о чем свидетельствует единичное упоминание о возможности выделения стволовых клеток из кадаверной подкожной жировой ткани [6]. По данным Y.Shi и соавторов, при выделении в течение 24 часов после смерти донора клетки сохраняли не только свою жизнеспособность, но и способность к направленной дифференцировке. Однако не обнаружено данных об использовании кадаверной жировой клетчатки орбиты для выделения стволовых клеток.

    Цель

    Определить материал и методику для выделения стволовых клеток из орбитальной жировой клетчатки человека для дальнейшего изучения и использования в регенеративной медицине и реконструктивно-пластической хирургии.

    Материал и методы

     Использовали кадаверную ретробульбарную жировую клетчатку от 11 доноров в возрасте 41-73 лет, предоставленную Глазным банком «МНТК «Микрохирургия глаза» имени акад. С.Н. Фёдорова» Минздрава России, для выделения фракции стволовых клеток. Временной интервал от момента смерти донора до начала работы с образцами ретробульбарной клетчатки в лаборатории составлял от 15 до 25 часов.

    Выполняли различные пластические хирургические вмешательства в области орбиты, включая удаление глазного яблока, по показаниям и согласно общепринятым методикам. В ходе операций анализировали возможность доступа к различным порциям орбитального жира и допустимый объем его резекции.

    Для последующего выделения фракции стволовых клеток резецировали орбитальную жировую ткань в объеме от 0,3 мл до 0,5 мл из различных жировых пространств в процессе следующих плановых операций: блефаропластика - 3, резекция леватора - 8, эвисцерация - 1, энуклеация – 1. Выделение стволовых клеток из полученных образцов проводили в сроки до 5 часов и спустя 24 часа после резекции.

    Для контроля возможного негативного функционального и косметического эффекта в результате резекции жировой ткани проводили стандартное офтальмологическое обследование, дополненное экзофтальмометрией, до и после операции.

    Выделение стволовых клеток из орбитальной жировой клетчатки человека проводили на базе Центра фундаментальных и прикладных медико-биологических проблем ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени акад. С.Н. Фёдорова» Минздрава России с использованием следующей методики. Образец жировой ткани выдерживали в течение 2 часов в физиологическом растворе с добавлением смеси антибиотиков (пенициллин 10000 МЕ/мл, стрептомицин 10000 мкг/мл, амфотерицин 25 мкг/мл; MPBiomedicals, LLC, США). Все последующие этапы проводили в ламинарном боксе II класса безопасности MSC-Advantage (Scientific Technologies, Германия). Жировую ткань измельчали ножницами на фрагменты диаметром 1-2 мм. Полученную массу заливали раствором коллагеназы второго типа (MPBiomedicals, LLC, США) типа в сбалансированном растворе Хенкса (ПанЭко, Россия), в соотношении 1мг/мл на 1 г жировой ткани. Инкубировали в течение 60 минут при температуре 370С при постоянном помешивании в шейкере (Asys Thermostar, Biochrom, Ltd, Великобритания) при температуре 370С. После этого полученную кашицу переливали в пластиковую центрифужную пробирку, добавляли 5 мл DMEM/F12 (полная ростовая среда Игла в модификации Дульбекко и среда Хэма F12 в соотношении 1:1 по объему, ПанЭко, Россия) с 10% эмбриональной телячьей сыворотки (HyClone, Thermo Scientific, США) и центрифугировали в лабораторной центрифуге SL-40 R (Thermo Scientific, Германия) при 1000 об/мин в течение 5 минут. После этого верхнюю фракцию собирали и переносили в культуральный флакон, а среднюю удаляли из пробирки. Осадок ресуспендировали полной культуральной средой и переносили в тот же культуральный флакон, заливали DMEM/F12 с добавлением 2 ммоль L-глутамина (ПанЭко, Россия), 10% эмбриональной телячьей сыворотки и смеси антибиотиков (пенициллин 10000 МЕ/мл, стрептомицин 10000 мкг/мл, амфотерицин 25 мкг/мл; MPBiomedicals, LLC, США). Смену среды проводили на вторые сутки (при этом удалялись осевшие эритроциты и другие клетки стромально-сосудистой фракции, а также фрагменты жировой ткани), далее среду меняли каждые 3-4 дня.

    Результаты

    При работе с кадаверной ретробульбарной жировой клетчаткой получить фракцию колониеобразующих фибробластоподобных клеток удалось только в одном случае из 11 (рис. 1). Это и определило необходимость поиска альтернативного материала для выделения стволовых клеток орбитальной жировой ткани. С этой целью были определены операции, в ходе которых возможен доступ к различным порциям орбитальной жировой клетчатки. При блефаропластике верхних век и резекции леватора возможен забор жировой клетчатки в верхнем медиальном (между сухожилием верхней косой мышцы и медиальной связкой), верхнем среднем (между краем орбиты и верхней поверхностью мышцы, поднимающей верхнее веко) и верхнем латеральном (латеральнее места прикрепления верхней прямой мышцы глазного яблока) пространствах. При блефаропластике на нижних веках доступна орбитальная жировая клетчатка в нижнем медиальном (между медиальной связкой глаза и началом нижней косой мышцы), нижнем среднем (между нижней косой мышцей глаза и дном орбиты) и нижнем наружном (между наружной щечной связкой и фасциальной растяжкой нижней прямой мышцы, идущей к наружной связке век) жировых пространствах. Ретробульбарный жир вершины мышечной воронки хорошо доступен при эвисцероэнуклеации и энуклеации.

    При всех перечисленных операциях, по данным стандартного офтальмологического обследования и экзофтальмометрии, возможна резекция жировой ткани в суммарном объеме до 0,5 мл без развития асимметрии и других негативных последствий для органа зрения.

    С помощью описанной методики из всех резецированных фрагментов орбитальной жировой клетчатки удалось выделить фракцию колониеобразующих фибробластоподобных клеток (рис. 2). При сохранении образцов жировой ткани в физиологическом растворе со смесью антибиотиков при температуре +4 0C в течение 5 часов после резекции клетки были выделены из всех 11 образцов. Спустя сутки, при тех же условиях хранения, выделить интересующие нас клетки не удалось.

    Заключение

     Кадаверная ретробульбарная жировая ткань не представляется перспективным материалом для выделения фракции стволовых клеток, учитывая возраст доноров, сроки доставки материала в Глазной банк и отсутствие стабильного результата. Орбитальная жировая ткань человека, полученная интраоперационно, является оптимальным материалом для выделения стволовых клеток. При косметической блефаропластике, резекции леватора, энуклеации, эвисцероэнуклеации возможен доступ к различным порциям орбитальной жировой клетчатки. Резекция любой порции орбитального жира в объеме до 0,5 мл не сопровождается развитием негативных функционально-эстетических последствий для пациентов.

    Указанный протокол выделения стволовых клеток позволяет получить фракцию колониеобразующих фибробластоподобных клеток из всех фракций орбитальной жировой клетчатки человека, полученной интраоперационно.


Страница источника: 10

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru