Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:617.713

Электронная микроскопия роговичной стромы после стандартного кросслинкинга и с применением фемтолазера в эксперименте


1Чебоксарский филиал «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Росмедтехнологии»
2Научно-производственная компания Витаформ
3Глазной центр «Восток-Прозрение»

     Кератоконус является прогрессирующей, двусторонней, часто асимметричной, невоспалительной эктазией роговицы [15, 16, 20]. Распространенность кератоконуса в общей популяции составляет 1:2000 и обычно он диагностируется в течение второго и третьего десятилетия жизни [7]. Имеющиеся в настоящее время методы лечения кератоконуса (жесткие контактные линзы, послойная кератопластика, интрастромальные сегменты и кольца) в основном представляют собой вмешательства, имеющие тектоническую, оптическую либо рефракционную цель [1, 4, 5, 6, 10, 14, 21]. К сожалению, ни один из этих методов не является патогенетическим и не способен влиять на механизмы развития заболевания.

    Кросслинкинг роговичного коллагена (КРК) является методом биохимического ремоделирования роговицы и основан на совместном использовании фотосенсибилизатора рибофлавина и УФ-света длиной волны 370 нм, который был предложен в 2003 г. доктором Волензаком с соавт. [22-24, 27, 28]. КРК является единственным методом лечения, направленным на биомеханическую и структурную стабилизацию в кератоконусной роговице, что предотвращает прогрессирование эктазии [8]. КРК вызывает образование в коллагене ковалентных меж- и интрафибриллярных сшивок, которые повышают биомеханические свойства человеческой роговицы примерно на 300% [27]. «Сшивающий» эффект максимален только в передней строме [25].

     Хотя КРК зарекомендовал себя в клинической практике, по-прежнему предпринимаются усилия для изменения стандартного протокола, чтобы повысить безопасность и комфорт пациентов [13]. Широко распространенный Цюрихский протокол для КРК включает удаление эпителия роговицы для облегчения проникновения рибофлавина в строму [28].

    Однако деэпителизация сопровождается болью, ощущением инородного тела, дискомфортом в виде жжения и слезотечения в течение нескольких дней. Кроме того, при удалении эпителия уменьшается общая толщина роговицы, а последующее проведение КРК на роговице толщиной менее 400 мкм может быть причиной рубцов роговой оболочки, повреждения эндотелия и даже перфорации [11, 17, 18].

     Поэтому исследователи и клиницисты в настоящее время заинтересованы в разработке варианта КРК с максимальным сохранением эпителиального слоя при сохранении эффективности стандартного подхода. Одним из перспективных направлений является технология УФ-кросслинкинга с дозированной скарификацией эпителия роговицы, показавшая снижение степени выраженности и продолжительности послеоперационного дискомфорта пациента за счет ускоренной эпителизации роговицы по сравнению с классической технологией [3]. Также известна методика трансэпителиального кросслинкинга, при которой перед закапыванием рибофлавина для разрыхления эпителия роговицы инстиллируют сначала раствор тетракаина в течение 30 минут [9, 12, 19]. Однако при применении данной методики достигается только одна пятая часть биомеханического эффекта [26].

    На фоне этого разработанная нами методика роговичного кросслинкинга без удаления эпителия с фемтосекундным формированием интрастромального кармана для введения 0,1% раствора рибофлавина с последующим ультрафиолетовым облучением выглядит не менее актуальной [2]. Представляет интерес изучение изменений ультраструктуры стромы роговицы в различные сроки после проведения стандартного КРК и фемтокроссликинга для подтверждения эффективности новой методики.

    Цель

     Изучение и сравнение структуры тканей роговицы после стандартного КРК и фемтокросслинкинга в эксперименте.

    Материал и методы

    В работе использовали самцов кроликов породы Шиншилла массой 2-3 кг. Исследования выполняли на 18 глазах 9 кроликов. Животные были разделены на 3 группы:

    1. Опытная группа – кролики, которым проводилась процедура кросслинкинга с применением фемтолазера [2].

    2. Группа сравнения – кролики, которым проводилась процедура стандартного кросслинкинга по Цюрихскому протоколу [28].

    3. Контрольная группа – кролики, которым проводилось только фемтолазерное формирование кармана без процедуры кросслинкинга.

    Срок наблюдения составил 1 неделю, 1 и 3 мес.

    Процедура проводилась под общей (в/м 5% раствор кетамина) и местной (инстилляция 0,3% раствора инокаина) анестезией. Животным 1 группы под местной анестезией выполняли процедуру фемтокросслинкинга с помощью фемтосекундного лазера IntraLaseFS 60 кГц (Advanced Medical Optics) (рис. 1). Для этого на заданной глубине (100-110 мкм) формировали карман диаметром 9,0 мм, углом вреза 45 градусов, углом петли 45 градусов. В сформированный таким образом карман с помощью тупоконечной канюли вводили 0,1% раствор рибофлавина до полного и равномерного пропитывания стромы. Затем проводили облучение ультрафиолетовым светом плотностью мощности 3,0 мW/см² в течение 30 минут.

    Кроликам 2 группы производилось механическое удаление эпителия роговицы диаметром 9 мм, затем инстилляция 0,1% раствора рибофлавина в течение 15 минут. Облучение роговицы ультрафиолетом (3,0 мW/см² в течение 30 мин.) в обеих группах осуществляли с помощью аппарата EVOLUTION (ООО «Трансконтакт», Россия) (рис. 2).

    В 3 группе животным проводили только процедуру формирования роговичного кармана на заданной глубине (100-110 мкм) и диаметром 9,0 мм с углом вреза 45 градусов, углом петли 45 градусов с помощью фемтосекундного лазера – IntraLasе FS 60 (рис. 3).

    На сроках 1 неделя, 1 и 3 мес. кроликов выводили из эксперимента воздушной эмболией, глаза энуклеировали, роговицы вырезали с помощью трепана 9,0 мм. Выкроенные роговицы фиксировали в растворе глютаральдегида на фосфатном буфере в течение 24 часов, далее фиксировали осмием и готовили препараты для электронной микроскопии. Гистоморфологические исследования делали на трансмиссионном электронном микроскопе JЕOL 1200 EX (Япония) на базе Института биотехнологии РАН (г. Москва).

    Результаты и обсуждение

     Результаты проведенных электронно-микроскопических исследований показали, что через неделю после операции у животных 1 группы сразу под эпителием идет формирование продольных и поперечных сшивок коллагена, которые сконцентрированы вблизи базальной мембраны эпителия (рис. 4).

    К 1 мес. после процедуры кросслинкинга с применением фемтолазера сшивки коллагена в основном представлены в поверхностных слоях стромы (рис. 5).

    На сроке 3 мес. после процедуры сформированные сшивки сохраняются, вероятно, без влияния на них процессов ремоделирования (рис. 6).

    При большем увеличении в поверхностных слоях стромы определяются пласты сшитых волокон и пучков коллагена (рис. 7). Часть волокон сшито бок в бок, другая часть – конец в конец. На всех сроках наблюдения на препаратах 1 группы не обнаруживали явлений воспаления либо других осложнений.

    Во второй группе эпителизация роговицы происходила быстро, и через 1 неделю после стандартной процедуры кросслинкинга визуализируются отечные базальные клетки эпителия с признаками полиморфизма и увеличенными межклеточными пространствами, а также базальная мембрана с выраженными полудесмосомами. Это, по нашему мнению, свидетельствует о травматичности этапа удаления эпителия. В подлежащей строме видны участки поперечно сшитых коллагеновых волокон и фибрилл (рис. 8).

    Через 1 мес. после стандартной процедуры кросслинкинга базальная мембрана плотная, в поверхностных слоях стромы роговой оболочки коллагеновые волокна и фибриллы сшиты бок в бок и конец в конец. Волокна коллагена выглядят хаотически уложенными. Межуточное вещество сжато, волокна плотно соприкасаются друг с другом (рис. 9).

    Через 3 мес. в роговице животных 2-й группы волокна коллагена в продольном и поперечном направлении остаются сшитыми (рис. 10).

    Анализ микроснимков трансмиссионной электронной микроскопии после фемтокросслинкинга и стандартного КРК на всех сроках наблюдения показал одинаковое количество сшивок волокон коллагена, что можно расценить как равноценную эффективность обеих методик.

     В роговицах кроликов контрольной группы заживление эпителия и роговичной стромы на всех сроках после фемтолазерного формирования кармана, без последующей процедуры кросслинкинга, проходило без каких-либо особенностей. А именно через 1 неделю в зоне фемтолазерного формирования кармана определяются некротические отложения в строме между коллагеновыми фибриллами, вызванные деструктивными изменениями после воздействия фемтосекундного лазера. Изменений эпителия и субэпителиального слоя над стромальным карманом не визуализируются. Через 1 мес. после фемтолазерного формирования кармана эпителий и субэпителиальный слой, а также ход волокон в зоне формирования кармана не изменены, определяются единичные кератобласты (рис. 11).

    Заключение

    Исследование состояния ультраструктуры коллагена стромы роговицы экспериментальных животных выявило сопоставимые изменения в группах стандартного КРК и фемтокросслинкинга.

     Выявленные изменения в базальной мембране после стандартного КРК свидетельствуют о травматичности этапа удаления эпителия в отличие от методики КРК с введением рибофлавина в стромальный карман сформированный фемтолазером, которая является более безопасной для клинического применения.

    

    Поступила 13.08.2014

    

    Сведения об авторах:

    Паштаев Николай Петрович, докт. мед. наук, профессор, директор Чебоксарского филиала ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России;

    Поздеева Надежда Александровна, докт. мед. наук, зам. директора по научн. работе;

    Зотов Вадим Валерьевич, врач-офтальмолог

    Чебоксарский филиал ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России

    Ларионов Евгений Викторович, ведущ. научн. сотрудник, ген. директор ООО «НПК Витаформ»

    Анисимов Сергей Игоревич, докт. мед. наук, профессор, научн. директор ООО « Восток-Прозрение»


Страница источника: 22

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru