Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Методы исследования исходной реактивности организма Исследование эндокринного статуса


1----------

    Определение концентрации кортизола. Кортизол – стероидный гормон пучковой зоны коры надпочечников, является регулятором всех видов обменных процессов в организме. Кортизол начинает усиленно синтезироваться в ответ на стресс и играет ключевую роль в защитных реакциях организма [68].

    Концентрация кортизола определялась в сыворотке крови. Забор крови проводился утром, натощак. Перед исследованием исключались интенсивные физические нагрузки, по возможности стресс.

    Исследование концентрации кортизола в сыворотке крови проводилось иммунохемилюминесцентным методом на иммунохемилюминесцентной системе ADVIA Centaur фирмы Bayer, тест-наборы - той же фирмы.

    Сущность метода заключалась в образовании антител к кортизолу (присоединенному к молекуле альбумина). Определенное количество этих антител и меченые молекулы кортизола добавляли к пробе, в которой нужно было определить содержание кортизола, при этом возникали конкурентные взаимоотношения при связывании с антителами меченого и содержащегося в пробе кортизола. Определяли радиоактивность комплекса кортизол – антитело. Если в исследуемой пробе было много кортизола, он обусловливал сильную конкуренцию за ограниченную связь с антителами, от чего в свою очередь зависит ограниченное связывание радиоактивного кортизола. В результате последний в основном остается в несвязанном состоянии. Далее определяли количество несвязанного меченого кортизола.

    Концентрацию кортизола определяли автоматически по калибровочной кривой и измеряли в нмоль/л.

    Определение концентрации тестостерона. Тестостерон – основной мужской половой гормон, секретируемый клетками Лейдига семенников у мужчин, а также в небольших количествах яичниками у женщин.

    Концентрацию общего тестостерона определяли в сыворотке крови радиоиммунологическим методом с помощью набора РИА – тестостерон – «Белорис».

    Исследования проводили в дублях. В пробирки с калибровочными пробами (0,05 мл), контрольной сывороткой (0,05 мл), образцами пациентов (0,05 мл) вносили по 0,1 мл раствора (125-йод)-прогестерона. Затем во все пробиркивносили по 1 мл смеси преципитирующего реагента с антисывороткой. После тщательного перемешивания инкубировали 2 часа при температуре 18-25° С. После инкубации пробирки центрифугировали при комнатной температуре в течение 20 минут при 1500-2000g.

    После удаления надосадочной жидкости пробирки помещали в сцинтилляционный счетчик для измерения скорости счета (125-йод)-прогестерона в каждой пробирке. Время счета – 1 минута.

    Концентрацию общего тестостерона определяли автоматически по калибровочной кривой и измеряли в нмоль/л.

    Определение концентрации тиреотропного гормона гипофиза. Тиреотропный гормон гипофиза (ТТГ) – гликопротеин, выделяемый аденогипофизом. ТТГ действует главным образом на щитовидную железу, стимулируя синтез тироксина и трийодтиронина и выделение их в кровь.

    Тиреотропный гормон гипофиза исследовали в сыворотке крови иммуноферментным полуавтоматическим методом на базе системы иммуноферментного анализа фирмы «Хоффманн-Ла Рош», Швейцария, с помощью набора TSHEIA DIA plus.

    Метод определения ТТГ гипофиза является одностадийным твердофазным иммуноферментным методом, основанным на принципе «сэндвича», при проведении которого используются высокоспецифичные мышиные моноклональные антитела против ТТГ гипофиза.

    Исследования проводили в дублях. Калибровочные пробы (100 мкл), образцы сыворотки пациентов (100 мкл) и контрольную сыворотку (100 мкл) инкубировали 30 минут при температуре 37°С и постоянном встряхивании в одну стадию с шариком (по одному в пробирке), покрытым антителами к ТТГ гипофиза и конъюгатом – вторыми моноклональными анти-ТТГ антителами, ковалентно связанными с пероксидазой (200 мкл). После трехкратной промывки шарики инкубировали в течение 15 минут при температуре 37°С и постоянном встряхивании с 250 мкл рабочего раствора субстрата (один объем субстратного раствора тетраметилбензидина гидрохлорида и четыре объема субстратного буфера перекиси водорода). Реакцию прекращали добавлением 1 мл серной кислоты. Концентрацию ТТГ гипофиза в образце измеряли при 450 нм против фоновой пробы на фотометре Roche. Содержание ТТГ определяли автоматически по калибровочной кривой и измеряли в мМЕ/л [36; 68; 200].

    Референтные величины концентрации ТТГ в сыворотке крови – 0,4-4,2 мМЕ/л.

    Определение концентрации тироксина и трийодтиронина. Тиреоидные гормоны (тироксин и трийодтиронин) являются важнейшими участниками в поддержании гомеостаза организма, так как влияют на все обменные процессы.

    Тироксин (Т4) и трийодтиронин (Т3) исследовали в сыворотке крови иммуноферментным полуавтоматическим методом на базе иммуноферментного анализа фирмы «Хоффманн-Ла Рош», Швейцария.

    Тироксин – основной гормон щитовидной железы. Его концентрация превышает таковую Т3 в 60 раз.

    В работе мы определяли общий уровень Т4, так как до 99,9% его циркулирует в первично связанной форме с тироксинсвязывающим преальбумином. У здоровых людей Т4 содержит 90% протеинсвязанного йода. Определение Т4 проводили с помощью набора Т-4 EIA Cobascore, «Хоффманн-Ла Рош», Швейцария. Метод определения Т4 является одностадийным конкурентным твердофазным иммуноферментным анализом, при котором используются высокоспецифичные мышиные моноклональные антитела против Т4.

    Исследование проводили в дублях. Калибровочные пробы (20 мкл), образцы сыворотки пациентов (20 мкл), контрольную сыворотку (20 мкл) инкубировали в течение 30 минут при температуре 37°С и постоянном встряхивании в темноте в одну стадию с шариками (по одному на каждую пробирку), покрытыми ковалентно связанными с белком-носителем Т4 и конъюгатоммоноклональных мышиных анти-Т4 антител с пероксидазой хрена (250 мкл). После трехкратной промывки шарики инкубировали в течение 15 минут при температуре 37°С и постоянном встряхивании с 250 мкл рабочего раствора субстрата (один объем субстратного раствора тетраметилбензидина гидрохлорида и четыре объема субстратного буфера перекиси водорода). Реакцию прекращали добавлением 1 мл серной кислоты. Концентрацию Т4 в образце измеряли при 450 нм против фоновой пробы на фотометре Roche. Содержание Т4 определяли автоматически по калибровочной кривой и измеряли в нмоль/л.

    Референтные величины концентрации общего Т4 в сыворотке крови у мужчин – 59-155 нмоль/л.

    Трийодтиронин синтезируется щитовидной железой, но основное количество Т3 образуется вне щитовидной железы при дейодированииТ4 в периферических тканях. Приблизительно 99,5% Т3, циркулирующего в крови, связано с белками, такими как тироксинсвязывающий глобулин, тироксинсвязывающий преальбумин и альбумин.

    Определяли общий уровень Т3, так как только 0,5% гормона находится в свободной форме. Определение проводили с помощью Т-3 EIA DIA plus, «Хоффманн-Ла Рош», Швейцария. Метод является одностадийным конкурентным твердофазным иммуноферментным анализом, при котором используются высокоспецифичные моноклональные антитела овцы против Т3.

    Исследование проводили в дублях. Калибровочные пробы (50 мкл), образцы сыворотки пациентов (50 мкл), контрольную сыворотку (50 мкл) инкубировали в течение 30 минут при температуре 37°С и постоянном встряхивании в темноте в одну стадию с шариками (по одному на каждую пробирку), покрытыми полигаптеном (конъюгат Т3 с белком) и конъюгатоммоноклональных овечьих анти-Т3 антител с пероксидазой хрена (250 мкл). После трехкратной промывки шарики инкубировали в течение 15 минут при температуре 37°С и постоянном встряхивании с 500 мкл рабочего раствора субстрата (один объем субстратного раствора тетраметилбензидина гидрохлорида и четыре объема субстратного тетраметилбензидина гидрохлорида буфера перекиси водорода). Реакцию прекращали добавлением 1 мл серной кислоты. Концентрацию Т3 в образце измеряли при 450 нм против фоновой пробы на фотометре Roche. Содержание Т3 определяли автоматически по калибровочной кривой и измеряли в нмоль/л.

    Референтные величины концентрации общего Т3 в сыворотке крови – 1,08-3,14 нмоль/л.

    Исследование показателей эндогенного воспаления и эндотелиальной дисфункции

     Определение концентрации микроальбумина в моче. Микроальбуминурия – это экскреция альбумина с мочой, превышающая допустимые нормальные значения, но не достигающая степени протеинурии. В норме экскретируется не более 30 мг альбумина в сутки, что эквивалентно концентрации альбумина в моче менее 20 мг/л при ее разовом анализе. При протеинурии экскреция альбумина с мочой превышает 300 мг/сут. Таким образом, диапазон колебаний концентрации альбумина в моче при микроальбуминурии составляет от 30 до 300 мг/сут или от 20 до 200 мг/л. Появление у пациента постоянной микроальбуминурии свидетельствует о начальных стадиях поражения клеточных мембран почечного клубочка.

    Определение микроальбуминурии проводилось с помощью иммунотурбидиметрии, это метод количественное измерение концентрации специфических белков по изменению мутности раствора при реакции антиген-антитело. Метод характеризуется достаточно высокой чувствительностью, которую можно повысить за счет использования латексных частиц.

    В ходе реакции образец мочи пациентов взаимодействовал со специфической антисывороткой, образуя осадок, который измерялся турбидиметрически при длине волны 340 нм. Концентрация микроальбумина определялась методом построения стандартной кривой. Количество сформированного комплекса было прямо пропорционально величине микроальбумина в образце.

    Определение концентрации С-реактивного белка высокочувствительным методом (hsCRP). Длительное время считалось, что клинически значимым является повышение концентрации С-реактивного белка выше 5 мг/л, при значениях ниже этой величины констатировалось отсутствие системного воспалительного ответа. Точное определение концентрации С-реактивного белка не считали клинически значимым. Однако ситуация изменилась, когда для повышения чувствительности метода антитела к С-реактивному белку стали иммобилизировать на частицах латекса. Это увеличило чувствительность определения С-реактивного белка примерно в 10 раз [20;101;170;213]. Метод был назван высокочувствительной иммунотурбидиметрией с латексным усилением. Обнаружено, что в норме в плазме крови всегда присутствуют «базовые» концентрации С-реактивного белка, то есть тот его уровень, который выявляется у здоровых людей.

    Референтное значение hsCRP составляет от 0,05 до 10 мг/л.


Страница источника: 47

XVII Всероссийская школа офтальмологаXVII Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2018 ХVI Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица II. Топография роговицы. Аберрации глаза 2018 Научн...

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Рейтинг@Mail.ru