Online трансляция


Научно-практическая конференция с международным участием
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий
Москва. Гостиница Holiday Inn Sokolniki
4 февраля 2017 г.



15-я Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием
Современные технологии лечения витреоретинальной патологии
Современные технологии лечения витреоретинальной патологии
Сочи, 16-17 марта 2017
Официальный сайт

Партнеры


Valeant thea
Allergan Фокус
santen tradomed
sentiss



Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 22 2016
№ 21 2016
№ 20 2015
№ 19 2015
№ 18 2015
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
№ 1 2016 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
№ 1 2016 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 4 2016
№ 3 2016
№ 2 2016
№ 1 2016
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 5 2016
№ 4 2016
№ 3 2016
№ 2 2016
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2016
Выпуск 3. 2016
Выпуск 2. 2016
Выпуск 1. 2016
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№ 6 (32) Декабрь 2016
№ 5 (31) Октябрь 2016
№ 3 (29) Июнь 2016
№ 2 (28) Апрель 2016
№ 1 (27) Март 2016
....


Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Оптимизация технологии УФ-кросслинкинга


1----------

     Исследования, направленные на оптимизацию технологии УФ-кросслинкинга с дозированной деэпителизацией роговицы, состояли из нескольких этапов.

    На первом этапе мы сочли целесообразным создать новый инструмент для проведения дозированной скарификации эпителия роговицы, обладающего, во-первых, рабочей поверхностью, повторяющей форму роговицы, во-вторых, способностью к самоцентрации и, в-третьих, позволяющего одним движением, не затрагивая передние слои стромы, проводить ее равномерную, дозированную деэпителизацию.

    Разработанный инструмент для дозированной скарификации эпителия роговицы (заявка на патент № 2013130332 от 04.07.2013 г., положительное решение о выдаче патента от 02.07.2014 г.) состоит из полого цилиндрического корпуса, один торец которого отрыт, а в закрытом торце имеется сквозное центральное отверстие с фланцем. Рабочая часть расположена внутри корпуса и состоит из основания, боковой цилиндрической и рабочей поверхности. При этом основание и боковая цилиндрическая поверхность рабочей части конгруэнтны внутренней поверхности корпуса, а основание рабочей части в центре жестко соединено с кнопкой посредством штока с пружиной, проходящего через отверстие корпуса. Это дает возможность осуществлять возвратно-поступательные движения по отношению к корпусу. При этом пружина располагается вокруг штока между кнопкой и закрытым торцом корпуса, рабочая поверхность рабочей части, выполненная вогнутой по кривизне роговицы, обращена к открытому торцу корпуса, а 90 шипов (микроигл), расположенных на рабочей поверхности рабочей части в количестве 25 шипов на см², имеют длину 60 мкм (Рис. 3).

    С целью определения необходимой длины микроигл скарификатора для выполнения дозированной деэпителизации роговицы было проведено исследование толщины эпителия роговицы 30 глаз 19-ти пациентов с I-III стадиями кератоконуса до и после закапывания раствора анестетика, применяемого на этапе подготовки (премедикации) к УФ-кросслинкингу. В каждом случае толщину эпителия измеряли дважды: до и после трехкратной инстилляции по 1-й капле 0,5% раствора проксиметакаина с интервалом 2 минуты. Регистрацию толщины корнеального эпителия проводили на приборе CIRRUS HD-OCT.

    Полученные результаты свидетельствовали о том, что средняя толщина эпителия в центре роговицы до инстилляции раствора анестетика составила 46,9+1,2 мкм, после трехкратной инстилляции 0,5% раствора проксиметакаина данный показатель оказался достоверно выше (p<0,01), составив 55,3+1,3 мкм (Рис. 4).

    Аналогичные расчеты провели для толщины эпителия в 3-х миллиметрах от центра роговицы. В данной зоне средняя толщина эпителия до инстилляции раствора анестетика составила 56,2+1,2 мкм. После трехкратной инстилляции 0,5% раствора проксиметакаина данный показатель также достоверно увеличился (p<0,01) и составил 60,3+1,4 мкм.

    Таким образом, результаты расчетов свидетельствовали об увеличении толщины эпителия в центре роговицы после использования раствора анестетика до 55,3+1,3 мкм, что указывало на достаточную длину микроигл в разработанном скарификаторе 60 мкм для проведения УФ – кросслинкинга без повреждения передних слоев стромы роговицы.

    Для исследования глубины и характера повреждения роговицы при использовании разработанного инструмента скарификатора были проведены экспериментальные исследования ex vivo с использованием 3-х кадаверных глаз. В ходе эксперимента их закрепляли в специальном держателе и затягивали его крепление таким образом, чтобы тонус кадаверных глаз соответствовал таковому у живого человека. Далее на глаз устанавливали разработанный скарификатор для дозированной деэпителизации, нажимали на его кнопку и слегка ротировали в нажатом положении (в пределах 5-10°). После этого глаз фиксировали в растворе формалина. Материал исследования подвергали стандартной гистологической обработке с подготовкой серии срезов с применением окраски гематоксилин-эозином. Препараты изучали под микроскопом фирмы Leica DM LB2 (Германия) при увеличении х50, х100, х200, х400 крат с последующей фоторегистрацией.

    Результаты морфологических исследований свидетельствовали о нарушении целостности эпителия роговицы на всю его глубину, включая базальный слой. При этом Боуменова мембрана и передние слои стромы роговицы оставались без повреждений (Рис. 5).

    На втором этапе исследований проводили моделирование доставки рибофлавина в строму роговицы по различным методикам УФ-кросслинкинга с определением степени проникновения в роговицу рибофлавина, что является необходимым условием результативности вмешательства. Исследования проводили совместно с аспирантом Мерзловым Д.Е.

    Для обнаружения рибофлавина в строме роговицы нами впервые была применена инфракрасная Фурье-спектроскопия, являющаяся одним из наиболее распространенных физико-химических методов исследования структуры различных химических веществ. Исследование проводили на 9-и кадаверных глазах, в роговицах которых предварительно не было обнаружено каких-либо рубцов или помутнений.

    Ход эксперимента заключался в следующем. Глаза были разделены на 3 группы по 3 глаза в каждой группе. В I группе перед закапыванием на роговицу раствора рибофлавина эпителий предварительно удаляли, что соответствовало условию выполнения УФ-кросслинкинга по стандартной методике (контроль). Во II группе эпителий не удаляли, а закапывали на него в течение 30 минут 0,5% раствор алкаина, содержащего бензалкония хлорид, увеличивающего проницаемость роговицы, тем самым моделируя этап доставки рибофлавина в строму роговицы по методике трансэпителиального УФ-кросслинкинга. В III группе для увеличения проницаемости эпителия проводили механическое нарушение его целостности с помощью описанного выше разработанного инструмента для дозированной скарификация эпителия роговицы. Затем выделяли роговицу и помещали ее на предметный столик ИК-микроскопа эндотелием вверх.

     Предварительно спектры отражения рибофлавина в порошковой форме регистрировали в виде полос спектра (индикаторы присутствия рибофлавина), в режиме нарушенного полного внутреннего отражения на ИК-микроскопе Hyperion 2000 с кристаллом Ge, совмещенным с вакуумным ИК-Фурье спектрометром IFS 66v/s (Bruker). Спектры усредняли по 50 сканам. Самые интенсивные полосы выявляли в спектрах 1542 см-1 и 1641 см-1.

    Далее раствор рибофлавина в течение 30 минут капельно наносили на переднюю поверхность кадаверной роговицы, после чего смывали физиологическим раствором до прозрачных смывных вод и удаляли эпителий, если он не был удален ранее.

    Затем роговицу помещали на предметный столик ИК - микроскопа и с помощью его объектива регистрировали ИК - спектры отражения с разных участков роговицы со стороны эндотелия для выявления возможных флуктуаций. Проводили сравнение полученных ИК-спектров отражения, при этом о проникновении рибофлавина в роговицу свидетельствовало появление в ИК - спектре полос, характерных для рибофлавина.

    Следует отметить, что для сравнительного анализа выбрали полосу 1542 см-1, которая относится к сопряженным связям «С=С» и «С=N» в конденсированных ароматических кольцах рибофлавина и менее всего подвержена влиянию растворителя, что приводит к сохранению интенсивности этой полосы в спектре раствора.

    Количественной характеристикой изменения ИК-спектров служило изменение относительной интенсивности полос 1542 см-1 и 1640 см-1, выраженное в процентах. Полосу 1640 см-1 выбрали для сравнения в виду того, что она относится к той же пептидной связи, что и полоса 1542 см-1 и отражает в ней исключительно различный тип колебаний, следовательно, в одинаковых условиях их относительная интенсивность остается постоянной.

    При анализе усредненного ИК-спектра отражения роговиц I группы (стандартная методика - контроль) выявили достоверное увеличение относительной интенсивности полосы 1542 см-1, на 7,3%±0,5%, что свидетельствовало о полном проникновении рибофлавина в строму роговицы. Отсутствие, в сравнении с контролем статистически значимого изменения ИК-спектра роговиц, на которые был нанесен 0,5% алкаин (II группа), указывало на отсутствие факта проникновения рибофлавина через эпителий роговицы, что ставит под сомнение эффективность трансэпителиального УФ-кросслинкинга. Наличие достоверных изменений относительной интенсивности полос ИК-спектра роговиц в III группе (на 7,8 ± 0,6 %) свидетельствовало о том, что дозированное механическое нарушение целостности эпителия обеспечивает полное пропитывание роговицы рибофлавином, что указывает на высокую эффективность вмешательства (таблица 1).

    Таким образом, в ходе исследования было впервые доказано, что благодаря высочайшей специфичности ИК-спектров отражения для химических веществ, метод инфракрасной Фурье-спектроскопии может быть успешно использован для изучения возможности проникновения рибофлавина в строму роговицы, что является определяющим критерием эффективности УФ-кросслинкинга, в прямую зависящую от глубины проникновения рибофлавина в строму роговицы.

    На заключительном этапе экспериментальных исследований проводили сравнение скорости восстановления целостности эпителия роговицы после моделирования различных методик УФ-кросслинкинга in vivo. Этот показатель является важным критерием безопасности УФ-кросслинкинга, учитывая, что большинство таких осложнений его послеоперационного периода, как роговичный синдром, вирусные и бактериальные кератиты обусловлены удалением эпителия во время операции [165, 316, 327, 426].

    Исследование провели на 12 глазах 6 кроликах породы Шиншилла, распределенных на 3 группы по 2 кролика (4 глаза) в каждой группе. На глазах I группы проводили полную деэпителизацию роговицы (моделирование начального этапа стандартной методики УФ-кросслинкинга). Во II группе выполняли дозированную скарификацию эпителия роговицы при помощи описанного выше нового инструмента скарификатора (моделирование начального этапа методики дозированного УФ-кросслинкинга). В III группе на роговицы глаз кроликов инстиллировали 0,5% раствор алкаина, содержащего бензалкония хлорид (моделирование начального этапа методики трансэпителиального УФ-кросслинкинга). Дефекты эпителия диагностировали с помощью флуоресцеиновой пробы.

    В результате исследований полную эпителизацию роговицы в I группе зафиксировали на 5-й день наблюдения, во II группе – на 2-й день эксперимента. Что касается III группы, то на протяжении всего периода наблюдения дефектов роговицы не обнаруживали.

    Таким образом, в ходе проведенных исследований установили, что разработанный инструмент-скарификатор позволяет проводить дозированную скарификацию эпителия роговицы без опасности повреждения передних слоев ее стромы, обеспечивая при этом пропитывание всей ее толщины раствором рибофлавина. Данное обстоятельство предполагает снижение степени выраженности роговичного синдрома и риска развития послеоперационных инфекционных осложнений при его использовании на начальном этапе дозированного УФ-кросслинкинга в клинике.

    Анализ результатов инфракрасной Фурье-спектроскопии убедительно свидетельствует о том, что после полной деэпителизации роговицы, также как и после дозированного нарушения целостности ее эпителия происходит пропитывание всей толщины стромы роговицы рибофлавином. Что касается применения раствора алкаина, содержащего бензалкония хлорид для увеличения проницаемости эпителия роговицы, то он не обеспечивает практически никакого эффекта проникновения рибофлавина в строму роговицы.

    Результаты экспериментальных исследований in vivo свидетельствуют о восстановлении целостности эпителия роговицы после ее частичной деэпителизации на следующий день после операции, в то время как после полной деэпителизации роговицы эпителиальный покров восстанавливается только на 5-е сутки.


Страница источника: 72
Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru