Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Материал и методы исследования


1----------

    Клиническое исследование основано на анализе данных обследования 97 пациентов (194 глаза, 72 мужчины, 25 женщин) с бинокулярной оптической нейропатией. Критерии для включения больных в исследование с подозрением на наследственную ОН были следующие:

    1. Двустороннее, симметричное, одновременное или последовательное безболезненное снижение остроты зрения, острое или хроническое;

    2. двусторонняя центральная или центроцекальная скотома;

    3. двусторонняя дисхроматопсия;

    4. в острой стадии заболевания гиперемия ДЗН, извитость ретинальных сосудов, отек перипапиллярного СНВС или нормальная неизмененная картина глазного дна;

    5. в хронической стадии заболевания частичная АЗН с диффузной или височной бледностью ДЗН, истончением перипапиллярного СНВС.

    Критериями исключения в исследование являлись: другая установленная этиология бинокулярной ОН (воспалительная, ишемическая, инфильтративная, компрессионная, травматическая, токсическая).

    Отсутствие наследственного анамнеза по частичной АЗН не исключало отбор пациентов для исследования.

    В контрольные группы были набраны здоровые добровольцы для проведения электрофизиологических исследований (ЭФИ), определения критической частоты слияния мельканий (КЧСМ) (10 человек, 20 глаз), зрительно вызванных потенциалов (ЗВП) (17 человек, 34 глаза), ОКТ (17 человек, 33 глаза), а также для биопсии кожи и проведения цитологических исследований (6 человек). Группы пациентов и группы контроля были однородны по возрасту (критерий Колмогорова-Смирнова, p >0,1).

    Материалом для клеточного исследования служили фибробласты кожи 23 пациентов, в том числе 13 пациентов с НОНЛ, 2 пациента с АДОН, 8 пациентов без выявленных мутаций.

    В ходе проведения работы использовали традиционные офтальмологические методы обследования: визометрию с максимальной коррекцией аметропии, рефрактометрию, биомикроскопию, тонометрию обратную офтальмоскопию; дополнительные методы обследования: исследование цветового зрения, компьютерную периметрию на периметре Octopus 900 (Interzeag AG, Switzerland), ОКТ сетчатки и зрительного нерва с помощью спектрального ретинотомографа RTVue-100 (США) (преимуществом данного томографа является наличие уникального протокола анализа комплекса ГКС, который успешно используется в ранней диагностике нейродегенеративных заболеваний), электрофизиологические методы обследования - порог электрической чувствительности сетчатки (ПЭЧ), лабильность зрительного анализатора (ЛЗА) и КЧСМ на электроофтальмометре «Lametesk» (Россия), ЗВП на универсальной электрофизиологической установке «Tomey EP-1000, Multifocal» (Германия).

    Для молекулярно-генетических исследований использовались образцы венозной крови 97 пациентов, собранной в пробирку с ЭДТА. Дизайн молекулярно-генетического исследования основывался на характере типа наследования частичной АЗН. Всем пациентам с доказанным аутосомнодоминантным типом наследования (по отцовской линии) проводили поиск мутаций в «горячих» участках (экзонах 8, 14, 15, 16, 18, 27, 28) гена OPA1.

    Пациентам с наследственным анамнезом по частичной АЗН, но без доказанной передачи по отцовской линии вначале проводили исследование на наличие трех наиболее часто встречающихся мутаций мтДНК m.14484 T >C m.3460 G >A m.11778G >A, затем при отрицательном результате проводили поиск более редких девяти мутаций мтДНК: m.3733G >A, m.4171C >A, m.10663T >C, m.14459G >A, m.14482C >G, m.14482C >A, m.14495A >G, m.14502T >C, m.14568C >T. При отсутствии исследуемых мутаций осуществляли поиск мутаций в горячих участках гена ОPA1 яДНК.

    При отсутствии семейного анамнеза по частичной АЗН исследовали вышеперечисленные мутации мтДНК и участки яДНК. Для выявления мутаций использовали стандартные методы молекулярно-генетического исследования: ПЦР, сиквенс, MLPA, электрофорез.

    Для цитологического исследования фибробласты кожи культивировали в среде DMEM (Dulbecco`s modified Eagle`s medium) и для микроскопии помещали их в специальную камеру. Для изучения мембранного потенциала митохондрий клетки окрашивали потенциалзависимым флюоресцентным красителем TMRE (этиловый эфир тетраметилродамина). Чтобы определить изменение потенциала внутренней мембраны митохондрий, к клеткам добавляли олигомицин – ингибитор V комплекса дыхательной цепи митохондрий, до конечной концентрации 10 мкМ. При помощи флюоресцентного микроскопа Axiovert 200 М (Zeiss, Германия) делали фотографии клеток, по которым с помощью программы ImageJ измеряли интенсивность флюоресценции митохондрий до и через 30 мин после добавления олигомицина.

    Статистический анализ и оценка достоверности получаемых результатов проведены с помощью программы Statistica 6.0. Статистический анализ результатов проводили с использованием непараметрических статистик (критерий Манна-Уитни, Колмогорова-Смирнова, критерий Вилкоксона, дисперсионный анализ Краскела-Уоллиса, ранговая корреляция по Спирмену).


Страница источника: 9

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru