Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Экспериментальный этап исследования


1----------

     С целью оптимизации технологии УФ-кросслинкинга со скарификацией эпителия роговицы, нами был разработан новый инструмент, который благодаря особенностям своей конструкции, позволяет одним нажатием на его кнопку выполнять равномерную дозированную скарификацию эпителия роговицы, не повреждая Боуменову мембрану и передние слои стромы (Рис. 1). Длину шипов (60 мкм.) рассчитали после выполнения исследования 30-ти глаз 19-ти пациентов, в результате которого после трехкратной инстилляции 0,5% раствора проксиметакаина толщина эпителия составила в среднем 55,3±4,7 мкм. Центрирование инструмента на роговице пациента во время операции осуществляли устанавливая его внутрь посадочного фланца градуированного вакуумного кольца, предварительно наложенного концентрично лимбу на поверхность глазного яблока.

    Задачами экспериментальной части последовательно явились определение эффективности этапов доставки рибофлавина в строму роговицы при различных технологиях УФ-кросслинкинга, морфологическое исследование глубины и характера повреждения эпителия роговицы при использовании инструмента - скарификатора, а также сравнение скорости восстановления эпителия при моделировании начальных этапов различных технологий УФ-кросслинкинга.

    С целью определения глубины и характера воздействия на роговицу разработанного инструмента для дозированной скарификации эпителия роговицы, нами выполнено морфологическое исследование на 3-х кадаверных глазах не пригодных для целей трансплантации. В результате выявили, что при применении нового скарификатора происходит альтерация всех слоев эпителия роговицы вплоть до Боуменовой мембраны без нарушения целостности последней (Рис. 2).

    В связи с тем, что длительное восстановление целостности эпителия после оперативного вмешательства увеличивает риск послеоперационных инфекционных осложнений и вызывает у пациента выраженный дискомфорт, задачей эксперимента in vivo на кроликах явилось сравнение скорости восстановления эпителия при моделировании начальных этапов различных технологий УФ-кросслинкинга. В ходе данного эксперимента нами определена значительно большая скорость восстановления целостности эпителия после дозированной скарификации эпителия роговицы (на 2-й день наблюдения) по сравнению с полной деэпителизацией (на 5-й день наблюдения). Данное наблюдение нашло свое последующее подтверждение в ходе клинике, что выражалось в значительно меньшей степени и продолжительности роговичного синдрома у пациентов, которым выполняли УФ-кросслинкинг с дозированной скарификацией эпителия роговицы.

    Для точного определения возможности проникновения рибофлавина в строму роговицы в ходе выполнения различных технологий УФ–кросслинкинга нами впервые в мировой практике применена инфракрасная Фурье-спектроскопия, позволяющая достоверно обнаруживать химические вещества в биологических жидкостях и тканях. Исследование проводили на ИК - микроскопе Hyperion 2000 с кристаллом германия (Ge), совмещенным с вакуумным ИК - Фурье спектрометром модели IFS 66v/s (Bruker). Эксперимент выполнили на базе Института нефтехимического синтеза им. А. В. Топчиева РАН и Центра фундаментальных и прикладных медико-биологических проблем МНТК «Микрохирургия глаза».

     Исследование проводили на 9 донорских глазах человека (3 группы по 3 глаза) не пригодных для целей трансплантации. В первой группе моделировали этап доставки рибофлавина в строму роговицы по классической технологии УФ-кросслинкинга с полным удалением эпителия, во второй – по трансэпителиальной технологии, в третьей – по технологии с дозированным механическим нарушением целостности эпителия при помощи разработанного инструмента. Во второй группе для разрыхления контактов между клетками эпителия роговицы, в течении 30-ти минут (по 1 капле в минуту) инстиллировали 0,5% раствор проксиметакаина, содержащий в качестве консерванта бензаклония хлорид. Перед проведением Фурье-спектроскопии, на исследуемые роговицы инстиллировали 0,1% раствор риблофлавина на протяжении 30 минут (по 1 капле в минуту). Для определения полноценного пропитывания стромы роговицы рибофлавином, регистрацию ИК-спектров в режиме нарушенного полного внутреннего отражения (НПВО) проводили со стороны эндотелия и оценивали изменение полос спектра, характерных для рибофлавина. При исследовании порошковой формы рибофлавина на ИК-микроскопе, было выявлено, что самой интенсивной в его спектре является полоса 1542 см-1. Количественной характеристикой изменения ИК-спектров служило изменение относительной интенсивности полос 1542 см-1 и 1640 см-1, выраженное в процентах. Полоса 1640 см-1 была выбрана в качестве контроля в виду того, что она относится к той же пептидной связи что и полоса 1542 см-1 и отражает в ней исключительно различный тип колебаний. Следовательно, в одинаковых условиях относительная интенсивность обеих полос остается постоянной. Регистрацию ИК-спектров отражения проводили многократно с разных участков эндотелиальной стороны роговицы для выявления возможных флуктуаций. Контролем служил ИК-спектр роговиц, зарегистрированный до нанесения на них рибофлавина.

    При анализе усредненного инфракрасного спектра отражения роговиц первой группы выявили достоверное увеличение относительной интенсивности полосы 1542 см-1 по сравнению с контролем на 7,3±0,5% (таблица 1), что свидетельствовало о проникновении рибофлавина через все слои стромы роговицы после полной ее деэпителизации. Анализ усредненного спектра роговиц третьей группы показал сходные результаты, относительная интенсивность его полосы 1542 см-1 была выше на 7,8±0,6% по сравнению с контролем (таблица 1), что доказывает пропитывание всей толщи роговицы после выполнения скарификации эпителия. Относительная интенсивность полосы 1542 см-1 усредненного ИК-спектра роговиц в условиях интактного эпителия (2 группа) не имела статистически значимой разницы по сравнению с контролем (таблица 1). Данный факт указал на отсутствие проникновения рибофлавина через эпителий роговицы после инстилляции на него раствора бензалкония хлорида и обосновывает нецелесообразность использования трансэпителиальной технологии УФ-кросслинкинга в клинической практике.


Страница источника: 9

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Рейтинг@Mail.ru