Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

3.1.Результаты разработки техники выделения фрагментов лимба из трупных донорских глаз


1----------

     Требования к отбору донорского материала

    В настоящее время в мировой литературе отсутствуют четкие критерии отбора донорского материала для возможности проведения аллогенной лимбальной трансплантации. В связи с тем, что в большинстве Глазных банков Европы, Америки и Азии выкраивание лимбального трансплантата осуществляется из корнеосклерального кольца после иссечения кератотрансплантата, сроки забора удлиняются и составляют от 24 до 72 часов после смерти донора [94, 74]. При этом следует отметить, что длительность жизни стволовых клеток в трупном глазу с сохранением их пролиферативного потенциала до конца не исследована, но по мнению некоторых авторов составляет не более 24 часов [215]. Поэтому становится крайне важным проведение забора донорского материала, а именно иссечение АФЛ, как можно в более ранние сроки после смерти донора.

    Как известно, по мере старения организма истощается пул малодифференцированных стволовых клеток и снижается их потенциал к пролиферации и дифференцировке, поэтому крайне важно для получения максимального эффекта после трансплантации использовать стволовые клетки от доноров репродуктивного возраста.

     В связи с вышеизложенным, при отборе доноров для проведения исследований на всех этапах работы были использованы критерии, принятые в клинике ФГБУ МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Минздрава России» для заготовки кератотрансплантатов с максимально высоким уровнем прозрачного приживления [8]:

    – постмортальный период не должен превышать 18 часов;

    – возраст донора – не старше 55 лет;

    – отсутствие грубых морфологических дефектов в тканевых структурах трупного глаза, выраженного дегенеративного кольца на роговице, признаков воспалительного процесса в переднем отрезке глазного яблока;

    – показатель энергетически значимого критерия жизнеспособности (проба с 0,1% раствором адреналина) – «А» или «В» независимо от морфологических признаков.

     Таким образом, для решения поставленных задач на доклиническом и клиническом этапах работы в общей сложности в период с 2008 по 2011 г.г. было отобрано 49 доноров-трупов, характеристика которых представлена в табл. 7.

    Разработка техники микрохирургического выделения аллогенных фрагментов лимба из глаза донора-трупа

    В настоящее время в мировой практике выкраивание АФЛ проводится из корнеосклерального кольца или глазного яблока после иссечения трансплантата роговицы, что удлиняет сроки перед пересадкой или консервацией АФЛ. Кроме того, осуществление этой процедуры требует наличия специальных приспособлений для поддержания тургора перфорированного глазного яблока [42]. Поэтому одной из задач было разработать хирургическую технику выкраивания АФЛ из целого глазного яблока донора-трупа, сохраняя его герметичность, для дальнейшего иссечения корнесклерального диска, для возможности последующей трансплантации донорской роговицы реципиенту.

    При отработке техники хирургического выкраивания АФЛ было использовано 8 глазных яблок от 4-х доноров-трупов. Отработка техники хирургического выкраивания АФЛ осуществлялась в условиях стерильного бокса, с трупного глазного яблока, подготовленного для забора донорской роговицы, согласно медицинской технологии «Алгоритм заготовки трупных донорских роговиц человека для трансплантации» (ФГБУ МНТК «МГ» им. акад. С.Н.Федорова), утвержденной Министерством здравоохранения и социального развития Российской Федерации в 2010 году.

    Микрохирургические манипуляции по выкраиванию лимбальных трансплантатов выполнялись в условиях операционной, в ламинарном шкафу под операционным микроскопом с аксиальным освещением и увеличением х10.

    После антисептической обработки 5%-ным р-ром Бетадина в течение 5 минут с последующей отмывкой стерильным изотоническим раствором натрия хлорида трупный донорский глаз с помощью анатомического пинцета помещался в ложе фиксатора и зажимался его лепестками.

    После деэпителизации роговицы и удаления бульбарной коньюнктивы, алмазным или металлическим лезвием производились 2 круговых надреза: один – по границе между лимбальной и прозрачной зонами роговицы на глубину 0,5 мм (рис. 2А), другой – склеры, отступая на 2 мм от прозрачной части роговицы на ту же глубину. Далее на ту же глубину, перпендикулярно выполненному разрезу, в зависимости от длины окружности производились 5-6 равноудаленных надрезов в сторону роговицы (рис. 2Б), затем ножом-расслаивателем отсепаровывался слой ткани на заданной глубине, придерживая образующиеся лоскуты роговичным пинцетом (рис. 2В). Полученные АФЛ помещались в стерильный эппендорф, содержащий «Раствор для хранения роговицы» (ТУ № 9398-013-29039336-2008, производимого ООО НЭП «Микрохирургия глаза») в объеме 2 мл для проведения дальнейших исследований. При разработанной методике выкраивания лимбальных трансплантатов не происходит перфорации глазного яблока (рис. 2Г, 3А), что позволяет в дальнейшем выкраивать корнеосклеральный диск.

    В результате предложенной техники с одного донорского глазного яблока можно получить 5-6 фрагментов лимба, соответственно 10-12 АФЛ от одного донора, представляющих собой полоску ткани длиной 8,0 мм, шириной 2,0 мм и толщиной 0,4-0,5 мм по всей длине (рис. 4 В, Г).

     На предложенную технику выкраивания лимбального трансплантата получен патент РФ № 2475218 от 20.02.2013 г.

    Для подтверждения наличия ММСК и экспрессии HLA-G рецепторов в лимбальной зоне гистологические срезы фрагмента лимба после выкраивания были подвержены иммуногистохимическому исследованию с использованием панели маркеров ММСК и HLA-G. В результате выявлена слабая экспрессия CD90, CD105, CD44, CD29 (маркеров ММСК) (рис. 5А, Б, Д, Е) и HLA-G (маркера толерогенности) (рис. 5В), при этом отмечается единичное свечение CD45, что говорит о присутствии лейкоцитов в ткани лимба (рис. 5Г).

    Таким образом, разработанная техника хирургического выкраивания аллогенных фрагментов лимба позволяет получить АФЛ с размерами 0,4-0,5х2,0х8,0мм (толщина, ширина, длина) в количестве 10-12, в зависимости от размеров глазных яблок донора. Предложенная техника дает возможность сохранить герметичность глазного яблока для последующего выкраивания роговичных трансплантатов без нарушения их архитектоники. Иммуногистохимически было подтверждено наличие ММСК в толще выделенных фрагментов, на глубине не менее 0,2 мм, что подтвердило целесообразность дальнейших исследований.


Страница источника: 54

 ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества ХV Юбилейный конгресс Российского глаукомного общества

Сателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХV Юбилейного конгресса Росс...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Эндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференцияЭндокринная офтальмопатия Научно-практическая конференция

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Рейтинг@Mail.ru