Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

3.1.Результаты разработки техники выделения фрагментов лимба из трупных донорских глаз


1----------

     Требования к отбору донорского материала

    В настоящее время в мировой литературе отсутствуют четкие критерии отбора донорского материала для возможности проведения аллогенной лимбальной трансплантации. В связи с тем, что в большинстве Глазных банков Европы, Америки и Азии выкраивание лимбального трансплантата осуществляется из корнеосклерального кольца после иссечения кератотрансплантата, сроки забора удлиняются и составляют от 24 до 72 часов после смерти донора [94, 74]. При этом следует отметить, что длительность жизни стволовых клеток в трупном глазу с сохранением их пролиферативного потенциала до конца не исследована, но по мнению некоторых авторов составляет не более 24 часов [215]. Поэтому становится крайне важным проведение забора донорского материала, а именно иссечение АФЛ, как можно в более ранние сроки после смерти донора.

    Как известно, по мере старения организма истощается пул малодифференцированных стволовых клеток и снижается их потенциал к пролиферации и дифференцировке, поэтому крайне важно для получения максимального эффекта после трансплантации использовать стволовые клетки от доноров репродуктивного возраста.

     В связи с вышеизложенным, при отборе доноров для проведения исследований на всех этапах работы были использованы критерии, принятые в клинике ФГБУ МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Минздрава России» для заготовки кератотрансплантатов с максимально высоким уровнем прозрачного приживления [8]:

    – постмортальный период не должен превышать 18 часов;

    – возраст донора – не старше 55 лет;

    – отсутствие грубых морфологических дефектов в тканевых структурах трупного глаза, выраженного дегенеративного кольца на роговице, признаков воспалительного процесса в переднем отрезке глазного яблока;

    – показатель энергетически значимого критерия жизнеспособности (проба с 0,1% раствором адреналина) – «А» или «В» независимо от морфологических признаков.

     Таким образом, для решения поставленных задач на доклиническом и клиническом этапах работы в общей сложности в период с 2008 по 2011 г.г. было отобрано 49 доноров-трупов, характеристика которых представлена в табл. 7.

    Разработка техники микрохирургического выделения аллогенных фрагментов лимба из глаза донора-трупа

    В настоящее время в мировой практике выкраивание АФЛ проводится из корнеосклерального кольца или глазного яблока после иссечения трансплантата роговицы, что удлиняет сроки перед пересадкой или консервацией АФЛ. Кроме того, осуществление этой процедуры требует наличия специальных приспособлений для поддержания тургора перфорированного глазного яблока [42]. Поэтому одной из задач было разработать хирургическую технику выкраивания АФЛ из целого глазного яблока донора-трупа, сохраняя его герметичность, для дальнейшего иссечения корнесклерального диска, для возможности последующей трансплантации донорской роговицы реципиенту.

    При отработке техники хирургического выкраивания АФЛ было использовано 8 глазных яблок от 4-х доноров-трупов. Отработка техники хирургического выкраивания АФЛ осуществлялась в условиях стерильного бокса, с трупного глазного яблока, подготовленного для забора донорской роговицы, согласно медицинской технологии «Алгоритм заготовки трупных донорских роговиц человека для трансплантации» (ФГБУ МНТК «МГ» им. акад. С.Н.Федорова), утвержденной Министерством здравоохранения и социального развития Российской Федерации в 2010 году.

    Микрохирургические манипуляции по выкраиванию лимбальных трансплантатов выполнялись в условиях операционной, в ламинарном шкафу под операционным микроскопом с аксиальным освещением и увеличением х10.

    После антисептической обработки 5%-ным р-ром Бетадина в течение 5 минут с последующей отмывкой стерильным изотоническим раствором натрия хлорида трупный донорский глаз с помощью анатомического пинцета помещался в ложе фиксатора и зажимался его лепестками.

    После деэпителизации роговицы и удаления бульбарной коньюнктивы, алмазным или металлическим лезвием производились 2 круговых надреза: один – по границе между лимбальной и прозрачной зонами роговицы на глубину 0,5 мм (рис. 2А), другой – склеры, отступая на 2 мм от прозрачной части роговицы на ту же глубину. Далее на ту же глубину, перпендикулярно выполненному разрезу, в зависимости от длины окружности производились 5-6 равноудаленных надрезов в сторону роговицы (рис. 2Б), затем ножом-расслаивателем отсепаровывался слой ткани на заданной глубине, придерживая образующиеся лоскуты роговичным пинцетом (рис. 2В). Полученные АФЛ помещались в стерильный эппендорф, содержащий «Раствор для хранения роговицы» (ТУ № 9398-013-29039336-2008, производимого ООО НЭП «Микрохирургия глаза») в объеме 2 мл для проведения дальнейших исследований. При разработанной методике выкраивания лимбальных трансплантатов не происходит перфорации глазного яблока (рис. 2Г, 3А), что позволяет в дальнейшем выкраивать корнеосклеральный диск.

    В результате предложенной техники с одного донорского глазного яблока можно получить 5-6 фрагментов лимба, соответственно 10-12 АФЛ от одного донора, представляющих собой полоску ткани длиной 8,0 мм, шириной 2,0 мм и толщиной 0,4-0,5 мм по всей длине (рис. 4 В, Г).

     На предложенную технику выкраивания лимбального трансплантата получен патент РФ № 2475218 от 20.02.2013 г.

    Для подтверждения наличия ММСК и экспрессии HLA-G рецепторов в лимбальной зоне гистологические срезы фрагмента лимба после выкраивания были подвержены иммуногистохимическому исследованию с использованием панели маркеров ММСК и HLA-G. В результате выявлена слабая экспрессия CD90, CD105, CD44, CD29 (маркеров ММСК) (рис. 5А, Б, Д, Е) и HLA-G (маркера толерогенности) (рис. 5В), при этом отмечается единичное свечение CD45, что говорит о присутствии лейкоцитов в ткани лимба (рис. 5Г).

    Таким образом, разработанная техника хирургического выкраивания аллогенных фрагментов лимба позволяет получить АФЛ с размерами 0,4-0,5х2,0х8,0мм (толщина, ширина, длина) в количестве 10-12, в зависимости от размеров глазных яблок донора. Предложенная техника дает возможность сохранить герметичность глазного яблока для последующего выкраивания роговичных трансплантатов без нарушения их архитектоники. Иммуногистохимически было подтверждено наличие ММСК в толще выделенных фрагментов, на глубине не менее 0,2 мм, что подтвердило целесообразность дальнейших исследований.


Страница источника: 54
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru