Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

2.1.Экспериментальные исследования


1----------

     Необходимым условием индукции ЗОСТ на глазах с отслоенной сетчаткой является ослабление связи стекловидного тела с сетчаткой. В наибольшей степени этому условию отвечают протеолитические ферменты, индуцирующие отслоение СТ от сетчатки путем лизиса основных белков витреоретинального соединения. Преимуществом данных ферментов является то, что они ослабляют адгезию ЗГМ к ВПМ сетчатки, не вызывая при этом сморщивания СТ (витреосинерезиса), что исключает риск дополнительных тракций на сетчатку и увеличения площади ее отслойки.
    В экспериментальных исследованиях для индукции ЗОСТ использовался рекомбинантный фибринолитический фермент «Гемаза», созданный в Научно-производственном предприятии «Техноген» совместно с Российским кардиологическим Научно-производственным комплексом Минздрава РФ.
    Гемаза представляет собой лиофилизированный ферментный препарат, содержащий рекомбинантную проурокиназу, помещенную на инертном носителе, в состав которого входят декстран и хлорид натрия. Химическое название: проурокиназа рекомбинантная. Выпускается в виде лиофилизата для приготовления инъекций. Расфасован по 5000 МЕ (0,0588 мг РПУ) в стеклянных ампулах; 5 ампул упакованных в блистр.
    Гемаза под действием малых доз плазмина опосредованно катализирует превращение плазминогена в плазмин, способный вызывать гидролиз основных адгезивных гликопротеинов витреоретинальной поверхности ламинина и фибронектина, тем самым ослабляет прочность витреоретинального контакта и индуцирует отслойку стекловидного тела. Специфическая ферментативная активность Гемазы не ниже 85000 МЕ/мг белка.
    Экспериментальные исследования проводились на 26 глазах 13 кроликов породы шиншилла, из них 20 глаз составили опытную группу (табл. 1), шесть — контрольную. Вес животных колебался от 2,5 до трех килограммов. В предоперационную подготовку животных входила их маркировка, взвешивание и клиническая оценка состояния глаз.
    Следует отметить, что особенностью витреоретинального интерфейса глаз кроликов является более прочный контакт СТ с сетчаткой. В результате для индукции ЗОСТ могли потребоваться заведомо большие дозировки препарата, чем в клинике. Поэтому для экспериментальных исследований были взяты как в два раза меньшая от максимально разрешенной для интравитреального введения в клинике дозировка 250 МЕ (максимально разрешенная — 500 МЕ), так и большие дозировки — 1000 и 1500 МЕ (по 5 глаз на каждую дозировку).
    2.1.1. Инструментальные методы исследования
    До и после операции всем экспериментальным животным проводили следующие клинические методы исследования: биомикроскопию, непрямую бинокулярную офтальмоскопию, тонометрию, ультразвуковое эхоофтальмосканирование (B-скан), а также фотографирование переднего и заднего отрезка глаза. Данные исследования экспериментальных животных заносили в дневник наблюдения.
    Биомикроскопию переднего отрезка глаза осуществляли на щелевой лампе фирмы «Zeiss» (Германия) до операции, непосредственно после и через сутки после операции. Офтальмоскопию в обратном виде проводили по аналогичной схеме с помощью непрямого бинокулярного офтальмоскопа фирмы «Keeler» (Англия) с использованием асферических линз «Nicon» (Япония) силой 20 и 28 диоптрий. Тонометрию выполняли апланационным тонометром Маклакова А.Н. грузом 10,0 г по общепринятой методике. Передний и задний отрезок глаз экспериментальных животных фотографировали с помощью фундус-камеры «Topcon» (Япония).
    Ультразвуковое эхоофтальмосканирование осуществляли с помощью прибора B-скан 3000 фирмы «Sonomed» (США) по вышеописанной схеме: перед операцией, непосредственно после и через сутки после операции.
    2.1.2. Методика эксперимента
    Раствор для интравитреального введения готовили непосредственно перед операцией. Для получения 0,1 мл раствора, содержащего 250, 500, 1000 и 1500 МЕ, содержимое ампулы разбавляли соответственно в 2,0; 1,0; 0,5 и 0,33 мл физиологического раствора, после чего брали 0,1 мл полученного раствора.
    Для достижения медикаментозного мидриаза всем животным за 30 минут до операции инстиллировали 1-2 капли 1% раствора атропина и 10% раствора мезатона.
    Анестезию осуществляли внутримышечным введением раствора гексенала (150 мг/кг) и 3-х кратной инстилляцией в конъюнктивальную полость 1% раствора дикаина.
    После наложения векорасширителя под контролем операционного микроскопа в проекции плоской части цилиарного тела в 3-х мм от лимба тонкой инсулиновой иглой на шприце, не вскрывая конъюнктиву, выполняли сквозной прокол оболочек глаза. После этого в витреальную полость 20-ти опытных глаз вводили 0,1 мл раствора, содержащего Гемазу в различных дозировках: 250, 500, 1000 и 1500 МЕ. Введение препарата осуществляли под визуальным контролем кончика иглы, который располагали в центральных отделах витреальной полости. Прокол не зашивали. В витреальную полость шести контрольных глаз вводили 0,1 мл изотонического раствора NaCl.
    Следующий этап вмешательства выполняли с учетом того, что экспериментальные исследования проводились на глазах с прилежащей сетчаткой, на которых не было отслоечной болезни, а, следовательно, в стекловидном теле отсутствовал плазминоген, имеющийся в СТ и субретинальной жидкости при регматогенных отслойках сетчатки, а также плазмин, присутствующий в СТ при частичном гемофтальме. Поэтому после введения растворов и в опыте и в контроле выполняли периферическую криопексию сетчатки, так как по данным Hesse L. и Kroll P., описанным в обзоре литературы, криопексия повышает проницаемость сосудов сетчатки, способствуя выходу компонентов плазмы крови, в том числе плазминогена и плазмина, в периваскулярное пространство витреоретинальной поверхности. Таким образом, создавался субстрат для действия Гемазы.
    Операцию заканчивали инстилляцией в конъюнктивальную полость 30% раствора сульфацила натрия.
    Через 24 часа после вмешательства, после проведения клинических методов исследования и фиксирования результатов, глаза кроликов энуклеировали и направляли на морфологические исследования.
    2.1.3. Морфологические исследования
    Гистологическому исследованию подвергалась опытная серия глаз с дозировками Гемазы 500, 1000 и 1500 МЕ, а также все контрольные глаза с введенным в витреальную полость физиологическим раствором.
    Исследование проводили для определения характера деструктивных изменений глаза и их динамики в зависимости от дозировки фермента.
    Глаза изучали методом световой микроскопии. Препараты готовили по следующей методике.
    Материал фиксировали в жидкости Сент-Джиордьи (100 мл 4% водного раствора сулемы, 125 мл ацетона, 5 мл ледяной уксусной кислоты, 40 мл 10% формалина) — семь суток. Дофиксацию осуществляли в смеси: 100 мл фиксатора и 50 мл ацетона — три дня. Дальше материал проводили через ацетон, 100% спирт, спирт-эфир, заливали в целлоидин, после чего выполняли серийную резку материала. Целлоидиновые срезы толщиной 10 мк окрашивали, используя гематоксилин Гельда. При этом целлоидин не окрашивался, а волокна стекловидного тела окрашивались в сине-серый цвет. Также использовали традиционный метод окраски по Ван-Гизону.


Страница источника: 40
Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

«Живая» хирургия в рамках XVI Всероссийской конференции с международным участием «Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии»«Живая» хирургия в рамках XVI Всероссийской конференции с ме...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Секундо В. Трансплантация рефрактивной лентикулы  используя VisuMax как способ лечения осложнений операции Lasik. ВидеопрезентацияСекундо В. Трансплантация рефрактивной лентикулы  используя ...

Симпозиум компании «Алкон» с демонстрацией показательных операцийСимпозиум компании «Алкон» с демонстрацией показательных операций

Осложненная катаракта: особенности хирургии и фармакотерапииОсложненная катаракта: особенности хирургии и фармакотерапии

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии XVI Всероссийская конференция с  международным участием Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Бактериальные инфекции глаза: взгляд офтальмолога и офтальмохирургаБактериальные инфекции глаза: взгляд офтальмолога и офтальмо...

Офтальмология: диагностика проблем, пути решенияОфтальмология: диагностика проблем, пути решения

Глаукома:теория и практика. Новый взглядГлаукома:теория и практика. Новый взгляд

Актуальные вопросы в лечении и профилактике ВМДАктуальные вопросы в лечении и профилактике ВМД

Современные аспекты и новые возможности ОКТСовременные аспекты и новые возможности ОКТ

Патология глазной поверхности и глаукома. Новые возможности и новые перспективы в решении «старых» проблемПатология глазной поверхности и глаукома. Новые возможности ...

Новейшие достижения в офтальмологииНовейшие достижения в офтальмологии

X Съезд офтальмологов России X Съезд офтальмологов России

Иммуномодулирующая и противовирусная терапия при лечении воспалительных заболеваний глаз различной этиологииИммуномодулирующая и противовирусная терапия при лечении вос...

«Нова Медика»: новые горизонты офтальмологии«Нова Медика»: новые горизонты офтальмологии

Рейтинг@Mail.ru