Online трансляция


Трансляция симпозиумов в рамках Международного офтальмологического конгресса
Белые ночи
Белые ночи
Санкт-Петербург
29 мая - 2 июня 2017 г. Трансляция проводится из двух залов:
Зал «Стрельна»
Зал «Санкт-Петербург»


Международная конференция по офтальмологии
Восток–Запад
Восток–Запад
Уфа
8 - 9 июня 2017 г.

Партнеры


Valeant thea
Allergan Фокус
santen tradomed
sentiss



Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 24 2017
№ 23 2016
№ 22 2016
№ 21 2016
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 1 2017 г.
№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 1 2017 г.
№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 1 2017
№ 4 2016
№ 3 2016
№ 2 2016
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 1 2017
№ 5 2016
№ 4 2016
№ 3 2016
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2016
Выпуск 3. 2016
Выпуск 2. 2016
Выпуск 1. 2016
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№1 (33) Март 2017
№ 6 (32) Декабрь 2016
№ 5 (31) Октябрь 2016
№ 3 (29) Июнь 2016
....


facebooklogo     youtubelogo



Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:617.713-089.843

Экспериментальное обоснование эффективности различных методов доставки рибофлавина в строму роговицы как начального этапа выполнения УФ-кросслинкинга


1МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Росмедтехнологии» Минздрава РФ

    Химическое поперечное связывание коллагена роговицы с использованием ультрафиолетового излучения и фотосенсибилизатора (0,1%-ный раствор рибофлавина), получившее в литературе сокращенное название УФ-кросслинкинг, наряду с имплантацией роговичных сегментов является одним из перспективных направлений лечения кератэктазий различного генеза. Данная процедура направлена на стабилизацию патологического процесса путем повышения биомеханической прочности, способствующей сохранению формы эктазированной роговицы и препятствующей дальнейшему выпячиванию. В основе УФ-кросслинкинга лежит образование дополнительных ковалентных связей между волокнами коллагена роговицы, инициированных высвобождением свободных радикалов кислорода под воздействием УФ-излучения в присутствии рибофлавина [1-3, 9-11].

    К настоящему моменту в клинической практике используются несколько методик доставки рибофлавина в строму роговицы как первого этапа процедуры УФ-кросслинкинга. Это — многократные инстилляции рибофлавина после полной механической деэпителизации роговицы, а также использование различных препаратов-разрыхлителей, нарушающих связи клеток эпителия роговицы. С целью химического нарушения целостности эпителия, как правило, используют растворы местных анестетиков, содержащие раствор бензалкония хлорида.

     Эффективность классической методики доказана рядом клинических исследований, однако полная деэпителизация приводит к значительному дискомфорту пациента в послеоперационном периоде, светобоязни, слезотечения, а также к увеличению риска послеоперационных инфекционных осложнений [10]. Трансэпителиальный УФ-кросслинкинг лишен выше перечисленных недостатков. Однако его эффективность многим исследователям представляется сомнительной ввиду того, что нарушение связей между клетками базального слоя эпителия, как правило, не является достаточным для полноценного прохождения рибофлавина и пропитывания им стромы роговицы [4, 7, 8]. УФ-кросслинкинг с частичным механическим нарушением целостности эпителия с этой точки зрения представляется перспективным. Однако сообщения о его клиническом применении являются единичными, и экспериментальных доказательств пропитывания стромы роговицы раствором рибофлавина при его применении нами не обнаружено [6].

    Цель

    Изучение в эксперименте глубины проникновения 0,1%-ного раствора рибофлавина в строму роговицы при моделировании различных методик УФ-кросслинкинга и оценка степени альтерации передней поверхности роговицы при применении нового инструмента для дозированной скарификации эпителия.

    Материал и методы

    Исследование провели на 12 глазах человека, полученных от 10 доноров (трупов) без признаков патологии роговицы, которые не соответствовали критериям отбора донорского материала для целей кератопластики. Возраст доноров варьировал от 30 до 39 лет. Интервал от момента смерти до энуклеации не превышал 8 часов, от момента смерти до проведения эксперимента — не более 11 часов.

    Были выделены 4 экспериментальных группы по 3 глаза. Для обнаружения рибофлавина в строме роговицы применяли инфракрасную Фурье-спектроскопию с регистрацией ИК-спектров отражения. В 1, 2 и 3 группах изучали степень пропитывания стромы роговицы раствором рибофлавина. Для этого цельный кадаверный глаз помещали в специальный фиксатор, затягивая его крепление таким образом, чтобы тонус глаза соответствовал нормальному. В 1-й группе, перед инстилляцией на роговицу 0,1%-ного раствора рибофлавина в физрастворе, эпителий полностью механически удаляли скребцом, что соответствовало начальному этапу выполнения кросслинкинга по классической методике. Во 2-й группе эпителий роговицы донорского глаза оставляли интактным, однако для увеличения проницаемости на его поверхность на протяжении 30 минут капельно наносили раствор анестетика (0,5%-ный пропаракаин), содержащий бензалкония хлорид. Данная методика ранее уже была описана в литературе и нашла свое применение в клинической практике [7, 8]. В 3-й группе выполняли дозированное механическое нарушение целостности эпителия с помощью специального инструмента-скарификатора.

    Скарификатор оригинальной конструкции был разработан нами с целью оптимизации технологии УФ-кросслинкинга1. Его отличительная особенность — в конструкции рабочей части, представляющей собой часть полусферы, снабженную шипами, расположенными на внутренней (рабочей) поверхности и имеющими длину, равную 60 мкм, общее количество которых равно 95 (рис. 1). После наложения скарификатора на роговицу при нажатии на подпружиненный плунжер устройства шипы выдвигаются и входят в соприкосновение с передней поверхностью роговицы. 0,1%-ный раствор рибофлавина наносили на переднюю поверхность роговицы в течение 30 мин со скоростью 1 капли в минуту. После чего излишки рибофлавина смывали физиологическим раствором до получения прозрачных смывных вод и удаляли эпителий в случаях, когда он был сохранен. Роговицу высекали трепаном диаметром 8,0 мм и переносили на предметный столик ИК-микроскопа.

    Для определения полноценного пропитывания стромы роговицы рибофлавином регистрацию спектров проводили со стороны эндотелия. Регистрировали несколько ИК-спектров отражения с разных участков роговицы со стороны эндотелия для выявления возможных флуктуаций. Спектры регистрировали в режиме нарушенного полного внутреннего отражения (НПВО) на ИК-микроскопе Hyperion 2000 с кристаллом Германия (Ge), совмещенным с вакуумным ИК-Фурье-спектрометром модели IFS 66v/s (Bruker).

    Спектры усредняли по 50 сканам.

    В режиме «НПВО» ИК-микроскопа регистрировали спектры рибофлавина в виде порошка. При сравнении ИК-спектра отражения рибофлавина в порошковой форме с ИК-спектром отражения роговицы выявляли полосы спектра, не совпадающие по положению и интенсивности. Именно эти полосы служили индикатором присутствия рибофлавина в роговице. О полном проникновении рибофлавина через всю толщу роговицы свидетельствовало увеличение относительной интенсивности полос ее ИК-спектра, характерных для рибофлавина. В качестве контроля для оценки фонового спектра интактной роговицы служили усредненные ИК-спектры деэпителизированных роговиц 1-й группы перед началом инстилляции рибофлавина.

    Глаза 4-й группы использовали для изучения морфологии роговицы методом световой микроскопии. Определяли глубину и характер нарушений целостности эпителия, а также наличие повреждений Боуменовой мембраны и передних слоев стромы роговицы после применения инструмента-скарификатора.

    В ходе данной группы экспериментов донорский глаз закрепляли в специальном фиксаторе, регулируя его таким образом, чтобы тонус глаза соответствовал нормальному. Далее на глаз устанавливали скарификатор, нажимали на кнопку инструмента, при этом слегка её ротируя в нажатом положении (в пределах 50-100). Далее роговицу выделяли и фиксировали в 10%ном растворе нейтрального формалина, промывали проточной водой, обезжиривали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Выполняли серии гистологических срезов с применением окраски гемотоксилин-эозином. Препараты изучали под микроскопом фирмы Leica DM LB2 (Германия) при увеличении х50, х100, х200, х400 крат с последующей фоторегистрацией.

     Все вышеперечисленные исследования выполняли на базе Института нефтехимического синтеза им. А.В. Топчиева РАН и в Лаборатории патологической анатомии и гистологии глаза ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Фёдорова» Минздрава России.

    1 Заявка на патент РФ № 2013130332 от 04.07.2013 г.

    Результаты

    При исследовании порошковой формы рибофлавина на ИК-микроскопе было выявлено, что самая интенсивная полоса находится в спектре 1542 см-1. Данная полоса относится к сопряженным связям «С=С» и «С=N» в конденсированных ароматических кольцах рибофлавина и менее всего подвержена влиянию взаимодействия с растворителем, что приводит к сохранению интенсивности этой полосы в спектре раствора. Количественной характеристикой изменения ИК-спектров служило изменение относительной интенсивности полос 1542 см-1 и 1640 см-1, выраженное в процентах. Полоса 1640 см-1 была выбрана в качестве контроля в виду того, что она относится к той же пептидной связи, что и полоса 1542 см-1, и отражает в ней исключительно различный тип колебаний, следовательно, в одинаковых условиях их относительная интенсивность остается постоянной.

    При анализе усредненного инфракрасного спектра отражения роговиц первой группы выявили достоверное увеличение относительной интенсивности полосы 1542 см-1 по сравнению с контролем на 7,3±0,5%, что свидетельствовало о проникновении рибофлавина в строму роговицы (рис. 2).

    Относительная интенсивность полосы 1542 см-1 усредненного ИК-спектра роговиц в условиях интактного эпителия (2 группа) не имела статистически значимой разницы по сравнению с контролем (рис. 3).

    Анализ усредненного спектра роговиц третьей группы показал сходные результаты. Относительная интенсивность его полосы, равная 1542 см-1, была выше на 7,8±0,6% по сравнению с контролем (рис. 4).

    Результаты ИК-спектроскопии в исследуемых группах суммированы в табл.

    В результате изучения морфологии 3-х донорских роговиц человека после применения скарификатора (4-я исследуемая группа) было определено, что в зоне воздействия шипов инструмента имел место сквозной дефект всех слоев переднего эпителия роговицы, включая базальный. При этом ни в одном случае альтерация эпителия не сопровождалась повреждением Боуменовой мембраны и передних слоев стромы роговицы (рис. 5).

    Обсуждение

     В работах, посвященных изучению проникновения рибофлавина в строму роговицы человека при использовании классической методики УФ-кросслинкинга, ранее был применен метод спектрофотометрии, основанный на регистрации спектра, прошедшего через центр роговицы и поглощенного ею УФ-излучения (спектр поглощения). Спектр регистрировали в интервале 400-700 нм, после чего результаты сравнивали со спектром поглощения чистого рибофлавина [4, 5].

    Однако вышеописанный способ имеет существенный недостаток, заключающийся в том, что он не позволяет достоверно распознать присутствие рибофлавина в строме роговицы вследствие того, что спектр поглощения излучения рибофлавина, как и других веществ, не является специфическим, что может привести к ошибочной интерпретации результатов исследования.

    Именно поэтому нами для обнаружения рибофлавина в строме роговицы применена инфракрасная Фурье-спектроскопия, являющаяся одним из наиболее распространенных физико-химических методов исследования структуры химических веществ.

    Он доказал свою высокую эффективность при обнаружении химических веществ в биологических жидкостях и тканях [13].

    Известно, что ИК-спектры отражения являются специфичными для каждого вещества благодаря тому, что отражают наличие каждой функциональной химической группы в их составе и характер химических связей в молекуле. Мы исходили из предпосылки, что полученный с помощью инфракрасной Фурье-спектроскопии ИК-спектр отражения рибофлавина является уникальным и позволит четко идентифицировать его присутствие в ткани роговицы. Полное пропитывание стромы роговицы рибофлавином является обязательным условием успешного выполнения УФ-кросслинкинга [12].

    В ходе эксперимента нами смоделированы возможные варианты доставки рибофлавина в строму роговицы: классический, предполагающий полное удаление эпителия, трансэпителиальный с химическим разрыхлением межклеточных контактов и с использованием метода дозированной скарификацией эпителия.

    В результате было выявлено полное пропитывание роговицы рибофлавином после её полной деэпителизации и отсутствие такового при использовании трансэпителиального метода.

    Последнее обосновывает нецелесообразность её использования в клинической практике. Напротив, дозированная скарификация эпителия при помощи предложенного нами оригинального инструмента обеспечила дозированное механическое нарушение целостности всей толщи эпителия и позволила раствору рибофлавина пропитать всю толщу роговицы.

    В отличие от аналогов, предложенный нами инструмент имеет вогнутую рабочую часть с кривизной, повторяющей форму передней поверхности роговицы, и расположенными на ней шипами длиной 60 мкм, что исключает неравномерное воздействие на поверхность роговицы и сводит к минимуму риск повреждения Боуменовой мембраны и передних слоев стромы роговицы [6]. Результаты морфологического исследования показали, что при применении предложенного нами скарификатора происходит механическое нарушение целостности всей толщи эпителия. При этом важным является тот факт, что целостность базального слоя эпителия также оказалась нарушенной. Известно, что именно он является наиболее труднопроходимым барьером для раствора рибофлавина [4]. Кроме того, отсутствие повреждений Боуменовой мембраны и передних слоев стромы роговицы подтвердило безопасность данного метода и инструмента для его осуществления и обосновало возможность дальнейшего применения в клинической практике.

    Выводы

    На основе инфракрасной Фурье-спектроскопии донорских роговиц человека с регистрацией ИК-спектров отражения доказано полноценное пропитывание стромы роговицы 0,1%-ным раствором рибофлавина при использовании метода дозированной скарификации эпителия, сравнимое с таковым при полной деэпителизации роговицы, что является фактором, создающим предпосылки для достижения высокого эффекта при применении последующих этапов УФ-кросслинкинга.

    Дозированная альтерация эпителия на фоне отсутствия повреждения Боуменовой мембраны и передних слоев стромы, обеспечивающая доступ рибофлавина к ткани роговицы, обосновывает целесообразность использования предложенного инструмента-скарификатора в клинической практике.


Страница источника: 24

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru