Online трансляция


18-й Всероссийский конгресс катарактальных и рефракционных хирургов с международным участием
Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии
Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии
Москва
20-21 октября 2017 г.
Трансляция проводится из двух залов:
19 октября, четверг, ФГАУ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени акад. С.Н. Фёдорова», Конференц-зал главного корпуса
20 октября, пятница, г. Москва, Кутузовский проспект, 2/1 стр. 1, Большой зал

19 октября, четверг, ФГАУ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени акад. С.Н. Фёдорова», г. Москва, Конференц-зал поликлиники
20 октября, пятница, г. Москва, Кутузовский проспект, 2/1 стр. 1, Малый зал №1

Партнеры


Valeant thea
Allergan Фокус
santen tradomed
sentiss



Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 26 2017
№ 25 2017
№ 24 2017
№ 23 2016
№ 22 2016
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 3 2017 г.
№ 2 2017 г.
№ 1 2017 г.
№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 2 2017 г.
№ 1 2017 г.
№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 2 2017
№ 1 2017
№ 4 2016
№ 3 2016
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 5 2017
№ 4 2017
№ 3 2017
№ 2 2017
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2017
Выпуск 3. 2017
Выпуск 2. 2017
Выпуск 1. 2017
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№3 (35) Август 2017
№2 (34) Май 2017
№1 (33) Март 2017
№ 6 (32) Декабрь 2016
№ 5 (31) Октябрь 2016
....


facebooklogo     youtubelogo



Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:617.764-07

Диагностический потенциал электронно-микроскопического анализа слезной жидкости человека


1Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук
2Новосибирский филиал «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава РФ

    Современная цивилизация становится все более компьютеризированной, что неизбежно ведёт к возрастанию нагрузок на орган зрения человека и, соответственно, к увеличению частоты офтальмологических заболеваний, приводящих к потере трудоспособности и снижению качества жизни. Значительно уменьшить риск потери зрения позволяет ранняя диагностика офтальмологических заболеваний, разработка методов которой является крайне актуальной задачей [9, 14, 23]. Важнейшим элементом эффективных диагностических методов является доступный для анализа субстрат, адекватно отражающий состояние исследуемой системы. При офтальмологических заболеваниях таким субстратом может быть слезная жидкость (СЖ) – постоянная микросреда переднего отдела глаза, участвующая в метаболических процессах глазного яблока и орбиты. СЖ легко получить, а процесс сбора безопасен для органа зрения [4, 5]. СЖ прозрачная, или слегка опалесцирующая, имеет слабощелочную реакцию и плотность около 1,008,содержит 97,8% воды, электролиты, низкомолекулярные метаболиты, клеточный детрит, слизь и многочисленные белки, основную долю которых составляют лизоцим, лактоферрин и липокалин [5, 12, 15, 23].

    Состав СЖ изменяется при офтальмологических и ряде системных заболеваний [20, 21, 23], изменения слезной пленки связывают с сухостью глаз, – распространенным нарушением зрения [8, 10, 12].

    Анализ научной литературы показал высокую информативность исследований физико-химических, биохимических, иммунологических параметров СЖ для понимания патогенеза многих офтальмологических заболеваний. Первые работы по изучению иммунобиохимических показателей в СЖ начали проводиться в конце 90-х гг. прошлого столетия и успешно развиваются в настоящее время. Авторами научных публикаций установлены активность процессов перекисного окисления липидов, дисбаланс содержания цитокинов, факторов роста, активация синтеза специфических антител, появление биохимических маркеров воспаления и деструкции в слезной жидкости при многих офтальмологических заболеваниях, таких как глаукома, диабетическая ретинопатия, увеиты и др. [1-5, 17, 18]. Таким образом, СЖ предстает в качестве универсального индикатора нарушения обменных процессов при патологических состояниях органа зрения [20].

    Однако публикации, посвященные изучению СЖ, отражают результаты иммунологических и биохимических исследований, морфологическое изучение слезной жидкости не проводилось.

    Между тем, возможности современных микроскопических методов позволяют исследовать в биологических

    жидкостях не только клетки, но и субклеточные структуры. Активно развивающимся направлением диагностических исследований с использованием электронной микроскопии является анализ в биологических жидкостях микрочастиц, передающих сигналы от клетки к клетке, в том числе экзосом.

    Микрочастицы и экзосомы формируются всеми клетками организма и несут многочисленные маркеры, в том числе маркеры многих заболеваний [13, 16, 22]. Следует подчеркнуть, что экзосомы и микрочастицы СЖ не исследованы, до сих пор не опубликовано прямых доказательств их присутствия в СЖ.

     Цель

    Мы провели электронно-микроскопическое изучение СЖ с целью выявления и характеризации её структурных, компонентов, включая микрочастицы, и экзосомы, и оценки пригодности СЖ для диагностики офтальмологических заболеваний.

    Материал и методы

    Образцы слезной жидкости

    Пробы рефлекторной СЖ были собраны у пациентов с диагнозом диабетической ретинопатии (8 случаев), у пациентов с гиперметропией (2 случая), у пациентов с глаукомой (5 случаев), у пациентов с катарактой (4 случая) и у пациента с макулодистрофией (1 случай).

    Забор слезы проводили из нижнего конъюнктивального свода глаза в сухую герметичную пробирку в количестве 0,3-0,4 мл, как было описано ранее [5, 6]. Было получено информированное согласие всех пациентов на использование данных обследования в научных целях, и согласие комитета, по биомедицинской этике Новосибирского филиала МНТК «Микрохирургия глаза» (г. Новосибирск) на проведение исследования.

    Электронная микроскопия

    Пробы СЖ центрифугировали 15 мин при 14 000 об/мин, супернатант исследовали методом негативного контрастирования (НК) [7], а осадки фиксировали 4%-ным параформальдегидом, обрабатывали стандартным методом [11] и получали ультратонкие срезы на ультратоме Ultracut-6 (Reichert-Young, Австрия). Образцы изучали в просвечивающем электронном микроскопе JEM 1400 (Jeol, Япония) с цифровой фотокамерой Veleta (SIS, Германия).

    Результаты и обсуждение Структурные компоненты, супернатанта СЖ человека.

    Все исследованные образцы супернатанта СЖ содержали два основных компонента: микрочастицы и белковые макромолекулярные агрегаты, (ММА). Микрочастицы размером до 250 нм имели преимущественно округлую и неправильную форму, среди них выявлялись мембранные и немембранные, с гладкой или неровной поверхностью, с дополнительной «капсулой» из вещества низкой молекулярной плотности. Несмотря на разнообразие морфологических признаков, выделялисьнекоторые закономерности в структуре и количестве микрочастиц. Так, мембранные частицы обычно имели правильную округлую или чашеобразную, форму, гладкую поверхность и не были связаны с ММА. Во всех образцах присутствовали округлые мембранные везикулы размером 40-100 нм, часто – чашеобразной формы (рис. 1б-в, д-ж).

    Структура этих везикул соответствует экзосомам, описанным в различных биологических жидкостях людей [19].

    Другим распространенным вариантом мембранных микрочастиц СЖ являются микрочастицы, окруженные «капсулой», имеющие гладкую поверхность и форму, близкую к округлой (рис. 1г).

    Большинство микрочастиц, связанных с ММА, не имеют мембраны, их форма часто неправильная (рис. 1а). Соотношение мембранных и немембранных частиц, а также их морфологический профиль могут варьировать в зависимости от офтальмологической патологии. Так, было выявлено, что в образцах людей, больных диабетической ретинопатией, существенно выше содержание мембранных частиц, чем в других исследованных образцах.

     Ультраструктурная характеристика осадков СЖ человека

    Электронно-микроскопическое исследование ультратонких срезов осадков, полученных при центрифугировании СЖ, выявило во всех образцах большое количество внеклеточного матрикса – разнообразных волокон, которые образуют сплошную сеть на срезах (рис. 2а). Морфология и количество волокнистого матрикса варьируют в зависимости от заболевания пациента. Так, в осадках СЖ больных макулодистрофией содержание матрикса крайне низкое.

    Во всех исследованных осадках СЖ были обнаружены мембранные пузырьки различного размера, среди которых выделяются небольшие округлые везикулы размером от 150 до 300 нм, несущие на поверхности белковые «нити», проникающие внутрь (рис. 2б). Наружная часть «нитей» может достигать в длину до 100 нм. Интересно, что данные «нити» различаются: одни – тонкие длинные извитые (70-100 нм), другие – короткие и толстые с небольшими шариками на концах (30-40 нм).

    Одна и та же везикула может нести на своей поверхности оба типа «нитей».

    Такие «мохнатые» везикулы встречались во всех образцах, кроме образцов людей с гиперметропией.

    Осадки СЖ содержат также фрагменты разрушенных клеток и клеточный детрит в виде скоплений пузырьков, часто встречаются эпителиальные клетки, морфология которых различается (рис. 3б). По-видимому, это – клетки эпителия роговицы, которые слущиваются и попадают в СЖ. Все эпителиальные клетки несут микроворсинки на поверхности, электронно-прозрачная цитоплазма заполнена тонкими волоконцами, наблюдаются редкие митохондрии, всегда присутствуют элементы эндосомально-лизосомального аппарата. На срезах клеток эпителия выявляются мультивезикулярные тельца, что говорит о том, что обнаруженные в СЖ методом негативного, контрастирования экзосомы могут выделяться клетками роговицы. Эпителиальные клетки встречаются во всех образцах, однако максимальное их количество обнаружено в образцах от людей, больных катарактой, а минимальное – в осадках СЖ человека с глаукомой. Кроме эпителиальных клеток на срезах отмечаются макрофаги, лимфоциты (рис. 3а) и полиморфноядерные лейкоциты (нейтрофилы) (рис. 3в).

    Лейкоциты обнаруживаются преимущественно в образцах пациентов с диабетической ретинопатией, при других заболеваниях эти клетки крайне редки.

    В отдельных осадках СЖ были обнаружены бактериальные клетки (рис. 3г).

    Заключение

    Исследование СЖ человека методом электронной микроскопии позволило визуализировать и идентифицировать её структурные компоненты.

    Жидкая фракция СЖ содержит микрочастицы, включая экзосомы, макромолекулярные агрегаты и волокна. В осадках СЖ обнаружены различные типы клеток и пузырьков, а также волокнистый матрикс. Выявление различий в содержании и морфологии структурных компонентов СЖ при различных офтальмологических заболеваниях свидетельствует о высоком диагностическом потенциале СЖ и перспективности поиска диагностических и прогностических маркеров заболеваний на доклиническом этапе развития патологического процесса.


Страница источника: 104

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru