Online трансляция


Научно-практическая конференция с международным участием
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий
Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий
Москва. Гостиница Holiday Inn Sokolniki
4 февраля 2017 г.



15-я Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием
Современные технологии лечения витреоретинальной патологии
Современные технологии лечения витреоретинальной патологии
Сочи, 16-17 марта 2017
Официальный сайт

Партнеры


Valeant thea
Allergan Фокус
santen tradomed
sentiss



Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 22 2016
№ 21 2016
№ 20 2015
№ 19 2015
№ 18 2015
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
№ 1 2016 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
№ 2 2016 г.
№ 1 2016 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 4 2016
№ 3 2016
№ 2 2016
№ 1 2016
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 5 2016
№ 4 2016
№ 3 2016
№ 2 2016
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2016
Выпуск 3. 2016
Выпуск 2. 2016
Выпуск 1. 2016
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№ 6 (32) Декабрь 2016
№ 5 (31) Октябрь 2016
№ 3 (29) Июнь 2016
№ 2 (28) Апрель 2016
№ 1 (27) Март 2016
....


Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст
УДК:617.735-08

Содержание лютеина и его окисленных форм в тканях глаза человека в пренатальном развитии


1Институт биохимической физики им. Н.М. Эммануэля Российской академии наук
2Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова Российской академии наук
3Институт теоретической и экспериментальной биофизики Российской академии наук
4Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова Минздравсоцразвития России

     Из общего числа циркулирующих в плазме крови человека каротиноидов только лютеин и зеаксантин являются основными для тканей глаза человека [24]. Во взрослом глазу человека их находят в сетчатке, ретинальном пигментном эпителии, сосудистой оболочке, радужке, хрусталике и цилиарном теле. Единственная ткань, где ни лютеин, ни зеаксантин не были обнаружены, — это стекловидное тело [7, 8].

    Каротиноиды в глазу выполняют важные физиологические функции, такие как светофильтрующая и антиоксидантная, предохраняющие сетчатку и хрусталик от опасности повреждающего действия света и активных форм кислорода. Предполагается участие каротиноидов в предотвращении катаракты и снижении риска развития других заболеваний глаза, например, таких как старческая макулярная дистрофия [13, 19].

    Несмотря на то что в стекловидном теле взрослого глаза каротиноиды не выявлены, тем не менее, у плодов человека с 15-й по 28-ю неделю в этой структуре глаза был обнаружен лютеин [1, 3]. Имеется также работа, свидетельствующая о присутствии лютеина в пренатальной сетчатке в зоне развивающейся макулы [9]. В хрусталике в пренатальном развитии человека в отличие от стекловидного тела были обнаружены только окисленные формы лютеина, но не сам лютеин [4]. Другие ткани глаза у плодов человека на присутствие каротиноидов исследованы не были.

    Цель

    Исследовать роговицу, склеру, глазной нерв, ретинальный пигментный эпителий (вместе с сосудистой оболочкой) (РПЭ + СОб) и цилиарное тело вместе с радужкой (ЦтР) на присутствие в них лютеина и/или окисленных форм лютеина, а также стекловидное тело (СТ) на присутствие окисленных форм лютеина.

    Материал и методы

    Исследовали ткани глаза — роговицу, склеру, глазной нерв, ретинальный пигментный эпителий вместе с сосудистой оболочкой (РПЭ + СОб), цилиарное тело вместе с радужкой (ЦтР) и стекловидное тело (СТ). Материал глаз получали от абортивных плодов человека с 12-й по 28-ю неделю беременности. Плоды поступали в ФГБУ «НЦ акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова» из лицензированных учреждений Минздрава России, действующих в рамках законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан, и в соответствии с утвержденным перечнем медицинских показаний. Возраст плодов соответствует срокам, установленным врачом-акушером. Всего в работе использовано 49 образцов от глаз плодов разных возрастов: хрусталиков — 19, РПЭ + СОб — 4, ЦтР — 6, роговиц — 2, глазного нерва — 1, склеры — 2, СТ — 15 (табл. 1, 2, 3).

     Содержание каротиноидов и их окисленных форм контролировали с помощью хроматографического анализа (ВЭЖХ). Экстракцию каротиноидов из нативных тканей глаза проводили в системе «хлороформ-метанол-вода» в соотношении 2:1:1 (по объему). Для этого ткани предварительно тщательно гомогенизировали в гомогенизаторе с 0,5 мл воды, после чего добавляли остальные растворители для проведения экстракции. Перемешивали на электрической мешалке типа вортекс (ELMI Sky Line, Tipe V-3, Латвия) 2 мин. и затем инкубировали 10 мин. при температуре 4° С. После этого смесь центрифугировали на центрифуге MLW K 26 D (680 g, 10 мин., 4??С), отбирали нижний хлороформный слой и упаривали его на водоструйном насосе. Осадок растворяли в 100 мкл метанола непосредственно перед проведением анализа ВЭЖХ. Для анализа использовали аликвоту 30 мкл. Для хроматографического разделения методом ВЭЖХ на обращенной фазе был использован хроматограф производства фирмы Knauer (Германия), который состоял из двух насосов К-120, спектрофотометрического детектора K-2501 и колонки Диасфер 120 С18 (4*150 мм, размер сорбента 5 мкм). Детектирование осуществляли по поглощению на спектрофотометрическом детекторе K-2501 на длине волны 430 нм. Разделение проводили путем линейного градиентного элюирования в системе от 100% растворителя А (10% метанола + 90% ацетонитрила) до 100% растворителя В (100% этилацетат) за 70 минут. Скорость потока 1 мл/мин.

    Для расчета количественного содержания каротиноидов в исследуемых образцах был использован внешний стандарт лютеина или его окисленных форм [4], для расчета концентраций были использованы коэффициенты экстинкции (E1%, 1 см) 2800 для продуктов окисления лютеина при 443 нм [6] и 2550 при 445 нм — для лютеина [23].

    В качестве контроля были использованы раствор лютеина (La Roch, Швейцария) и раствор окисленных форм лютеина в метаноле. Для получения окисленных форм лютеина раствор лютеина в метаноле облучали видимым светом, как было описано ранее [4].

    Показателем содержания лютеина и окисленных форм лютеина в исследуемых тканях глаза служили относительные единицы, полученные как отношение массы каротиноидов (в нг) к влажной массе ткани (мг).

    Результаты и обсуждение

    Контроли стандарта лютеина (темнового) (рис. А) и продуктов его окисления (после облучения темнового стандарта лютеина в течение 1 часа видимым светом в присутствии кислорода воздуха) (рис. Б) [4] свидетельствуют о том, что на хроматограммах ВЭЖХ, полученных из экстрактов тканей роговицы (рис. Д), склеры (рис. Е), глазного нерва (рис. Ж), РПЭ + СОб (рис. З) и ЦтР (рис. И, табл. 1), представлены два пика в той же области, что и пики на хроматограммах лютеина, образующиеся при его облучении (фотоокислении) (рис. Б, табл. 2). Следовательно, можно заключить, что в экстрактах из этих нативных тканей глаза содержатся окисленные формы лютеина. Такую же картину мы наблюдали прежде и для хрусталика (рис. Г) [4]. Ранее нами было показано присутствие неокисленной формы лютеина в стекловидном теле глаза плодов человека [1, 3]. В данной работе мы провели более детальное исследование и показали, что в стекловидном теле, наряду с лютеином, обнаруживаются также и его окисленные формы (рис. В, табл. 3).

    Помимо стекловидного тела и хрусталика, нами впервые исследованы и другие ткани глаза, такие как роговица, склера, глазной нерв, РПЭ + СОб и ЦтР в пренатальном развитии плодов человека. В них было обнаружено присутствие окисленных форм каротиноидов. При этом неокисленных форм каротиноидов в этих тканях, как и в хрусталиках, нами не обнаружено. Единственная ткань глаза в ходе пренатального развития, в которой обнаруживаются как окисленные формы, так и сам лютеин, — это стекловидное тело (рис. В, табл. 3). Не наблюдалось также какой-либо закономерной количественной динамики содержания окисленных форм лютеина в изученных тканях с возрастом плодов (табл. 1-3).

    Обсуждение

    Отсутствие окисленных форм лютеина в тканях некоторых из исследованных глаз может быть объяснено либо слишком малым их количеством, недостаточным для их определения, либо отсутствием их в этих тканях (табл. 1-3), что, возможно, объясняет разброс, характерный для каротиноидов и, как правило, является отражением поступления каротиноидов с пищей [12, 17].

    В то же время лютеин, присутствующий в стекловидном теле, показывает четкую динамику изменения его содержания с 16 по 28 неделю [1]. При этом было показано, что в ходе пренатального развития лютеин в стекловидном теле исчезает после 28-й недели и уже не обнаруживается на 30-й неделе, как и в глазах взрослого человека [1, 3].

    Таким образом, у плодов человека раннего плодного периода развития лютеин присутствует только в стекловидном теле [1, 3] и сетчатке [9]. В остальных тканях глаза сам лютеин не обнаруживался, но присутствовали его окисленные формы. Вопрос, является ли присутствие окисленных форм лютеина в исследованных тканях транзиторным, как это было показано для лютеина в стекловидном теле [1, 3], или они будут определяться в этих тканях и в более поздние сроки пренатального развития, остается открытым. Вместе с тем, присутствие окисленных форм лютеина и зеаксантина было показано в сетчатке глаза взрослого человека [15].

    Если антиоксидантная и светофильтрующая функции лютеина в структурах глаза не вызывают сомнения, то физиологическое значение присутствия в них окисленных форм каротиноидов в пренатальном развитии остается не совсем ясным. Возможно, окисление каротиноидов происходит в процессе выполнения ими защитной антиоксидантной функции, предохраняя развивающиеся ткани глаза от опасности свободно-радикального повреждения [5, 11]. Действительно, было показано, что каротиноиды образуют окисленные формы, реагируя с активными формами кислорода [10], защищая ткани от окислительного стресса [18, 21, 22].

    Возможной функцией каротиноидов и, в частности, окисленных форм лютеина может быть функция депо кислорода [2, 20]. Также существуют данные о том, что окисленные формы каротиноидов ведут себя как биологически активные молекулы [16].

    Заключение

    Поскольку глаз в исследуемый период развития активно формируется, то не исключено, что лютеин и его окисленные формы выполняют морфогенетическую функцию для становления структурной и функциональной организации глаза. В любом случае, обнаружение лютеина и его окисленных форм в тканях глаза человека в ходе пренатального развития представляет существенный интерес для понимания физиологии пренатального и постнатального глаза.

    Поступила 31.05.2012


Страница источника: 31
Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Занимательная аккомодологияЗанимательная аккомодология

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Заболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторонЗаболевания глазной поверхности. Взгляд со всех сторон

Интересное об известномИнтересное об известном

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru