Тромбозы ретинальных вен составляют около 60 % от всей острой сосудистой патологии органа зрения и стоят на втором месте после диабетической ретинопатии по тяжести поражения сетчатки и прогноза. Среди факторов риска развития тромбоза вен сетчатки, наибольшее значение имеют следующие: изменения гемодинамических и гемореологических факторов: локальные повреждения сосудистой стенки, изменяющие местный коагуляционный потенциал; наследственные и приобретенные нарушения в различных звеньях системы гемостаза [Тульцева С. Н., Астахов Ю. С., 2010]. Особое внимание исследователей привлекали именно вопросы гомеостаза, с целью обнаружения возможных факторов риска возникновения тромбоза. В норме тромбоциты циркулируют в крови в неактивном состоянии и их взаимодействие с интактным эндотелием, выстилающим кровеносные сосуды, весьма ограничено. Только повреждение стенки сосуда запускает каскад процессов, ведущих к образованию тромба из тромбоцитов и фибрина. Однако существуют ситуации, когда тромбоциты проявляют свою активность в кровеносном русле и без наличия стимула. Это вызывает повышенный риск развития тромбоза — тромбоцитарную тромбофилию. В зависимости от того, в каком звене системы гемостаза выявляются наибольшие изменения, способствующие тромбозу, выделяют тромбоцитарную, плазмокоагуляционную и сосудистую формы тромбофилии [Петрищев Н. Н., 2007]. Верификация типа тромбофилии чрезвычайно важна для оптимизации терапии.

    В связи с этим становится актуальной необходимость изучения патогенетических механизмов, лежащих в основе тромботических расстройств, разработки и внедрения молекулярных способов идентификации вышеуказанных генетических нарушений, и оценки роли этих генетических маркеров в прогнозировании развития тромбоза ретинальных вен. Это позволит усовершенствовать протокол обследования пациентов и адекватно верифицировать риск развития заболевания, тем самым выбрать рациональную превентивную терапию, что, в свою очередь, способствует предупреждению возникновения тяжелой офтальмопатологии, приводящей к слабовидению и слепоте.

    Цель — изучить особенности распределения аллелей и генотипов полиморфизма G20210A гена протромбина среди больных тромбозом вен сетчатки.

    Материал и методы. Нами были обследованы 85 больных с тромбозом ретинальных вен и 220 здоровых лиц, не имевших офтальмопатологии и тромбоэмболических эпизодов в анамнезе. Всем исследованным проведены общепринятые офтальмологические методы исследования (в Республиканском специализированном центре микрохирургии глаза), а также молекулярно-генетические исследования (в лаборатории медицинской генетики НИИ гематологии и переливания крови РУзб). Начальным этапом нашей работы была модификация методов тестирования мутаций гена FII. В дебюте исследования были синтезированы системы олигопраймеров в Институте технической биохимии (Штутгарт, Германия) и Гематологическом научном Центре РАМН (г. Москва).

    Сбор остальных реактивов и ферментов (модификация тест-системы), необходимых для диагностики тромбофилии был осуществлен в лаборатории медицинской генетики НИИ гематологии и переливания крови. Эти компоненты были приобретены в ведущих фирмах мира («Serva», «Sigma» и т. д.) и России («ДНК-технология», «Сибэнзим» и т. д.), занимающихся в области молекулярной биологии. Адаптацию работы этих тест-систем проводили на программируемом термоциклере фирмы «Applied Biosystems» (США).

    Как известно, ген FII локализован на хромосоме 11, состоит из 14 экзонов и имеет размер около 20 тысяч пар нуклеотидов. Мутация гена протромбина G20210A (FII) характеризуется заменой нуклеотида гуанина на нуклеотид аденин в позиции 20210. Мутация была открыта Лейденской группой исследователей тромбофилии в 1996 г. [Poort S. R. et al., 1996]. Механизм прокоагулянтного действия данной мутации до сих пор точно не установлен, однако предполагается, что нуклеотидная замена G на A приводит к увеличению стабильности мРНК протромбина и повышению эффективности ее синтеза. При наличии данной мутации обнаруживается повышенное количество химически нормального протромбина. Уровень протромбина может быть в 1,5-2,0 раза выше нормы. Данная мутация наследуется по аутосомно-доминантному типу, это означает, что тромбофилия возникает даже у гетерозиготного носителя данного деффектного гена.

    В начале исследования у 220 условно здоровых доноров, не имевших в анамнезе тромботических эпизодов, нами была изучена распространенность аллельных вариантов генов наследственной тромбофилии — факторов FII протромбина (G20210 А).

    Результаты и обсуждение. В результате исследований 220 доноров у 3 были выявлены достаточно низкая частота мутации G20210 А гена FII (1,4 %), что доказывает популяционные особенности данного генетического маркера.

    В группе обследованных 85 больных с тромбозом ретинальных вен мутантный аллель гена FII был обнаружен в 4 случаях (4,7 %). Вычисленная частота мутантного аллеля данного полиморфизма в исследованной группе больных и здоровых доноров составила 2,6 % и 0,7 %, соответственно (Х2 = 3,1; Р = 0,04; OR = 3,5; 95 % CI 0,777—15,85). Шанс развития тромбоза у носителей данного аллеля был в 3,5 раза выше, по сравнению с группой контроля. При этом частота распределения гетерозиготного носительства среди больных и группа контроля составила 4,7 % и 1,4 %, соответственно. Гомозиготный генотип данного полиморфизма в обеих группах выявлен не был. Вычисленная вероятность развития тромбоза вен сетчатки среди носителей данного полиморфизма в 3,6 раза достоверно выше, по сравнению с группой контроля (Х2 = 3,05; Р = 0,04; OR = 3,6; 95 % CI 0,7825—16,31).

    Оценка особенности распределения аллельных вариантов и генотипов данного гена у больных с тромбозом вен сетчатки в зависимости от пола показала, что различия в частотах встречаемости аллели и генотипов G20210A гена протромбина между обследованными больными мужчинами также носили достоверный характер, при этом риск развития тромбоза у носителей мужчин был намного, т. е. в 4,8 раз выше, чем у здоровых лиц (Х2 = 4,3; Р = 0,03; OR = 4.8; 95 % CI 0,9428— 24,66). Необходимо подчеркнуть, что шанс развития тромбоза сетчатки среди женщин также был высоким (в 2,0 раза), однако такое различие оказалось статистически недостоверным.

    Выводы. Достоверное преобладание числа носителей гетерозиготного генотипа у данных больных может свидетельствовать о присутствии патогенетической связи, т. е., ассоциации между этим типом генотипа и случаями тромбоза ретинальных вен.