Online трансляция


18-й Всероссийский конгресс катарактальных и рефракционных хирургов с международным участием
Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии
Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии
Москва
20-21 октября 2017 г.
Трансляция проводится из двух залов:
19 октября, четверг, ФГАУ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени акад. С.Н. Фёдорова», Конференц-зал главного корпуса
20 октября, пятница, г. Москва, Кутузовский проспект, 2/1 стр. 1, Большой зал

19 октября, четверг, ФГАУ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени акад. С.Н. Фёдорова», г. Москва, Конференц-зал поликлиники
20 октября, пятница, г. Москва, Кутузовский проспект, 2/1 стр. 1, Малый зал №1

Партнеры


Valeant thea
Allergan Фокус
santen tradomed
sentiss



Издания


Российская офтальмология онлайн Российская
Офтальмология Онлайн

№ 26 2017
№ 25 2017
№ 24 2017
№ 23 2016
№ 22 2016
...
Журнал Офтальмохирургия Журнал
Офтальмохирургия

№ 3 2017 г.
№ 2 2017 г.
№ 1 2017 г.
№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
...
Журнал Новое в офтальмологии Новое в
офтальмологии

№ 2 2017 г.
№ 1 2017 г.
№ 4 2016 г.
№ 3 2016 г.
...
Российская детская офтальмология Российская
детская офтальмология

№ 2 2017
№ 1 2017
№ 4 2016
№ 3 2016
...
Современные технологии в офтальмологии Современные технологии
в офтальмологии

№ 5 2017
№ 4 2017
№ 3 2017
№ 2 2017
...
Восток – Запад Восток - Запад.
Точка зрения

Выпуск 4. 2017
Выпуск 3. 2017
Выпуск 2. 2017
Выпуск 1. 2017
...
Новости глаукомы Новости
глаукомы

№1 (41) 2017
№1 (37) 2016
№1 (33) 2015

....
Мир офтальмологии Мир офтальмологии
№3 (35) Август 2017
№2 (34) Май 2017
№1 (33) Март 2017
№ 6 (32) Декабрь 2016
№ 5 (31) Октябрь 2016
....


facebooklogo     youtubelogo



Сборники статей


 Реферат RUS  Реферат ENG  Литература  Полный текст

Сравнительные аспекты биологической активности проангиогенных пептидов регуляторов ангиогенеза VEGF и ?-FGF


1Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина Российской академии медицинских наук
2Центральная клиническая больница Российской академии наук
3Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина Российской академии наук


ГУ «РОНЦ им. Блохина Н. Н. РАМН», ЦКБ РАН, ИБХ РАН, г. Москва
  
   Все современные антиангиогенные препараты, используемые в офтальмологии, направлены на блокирование фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF). Однако опыт показывает, что эти препараты оказывают неполноценный и кратковременный эффект. Одной из причин их низкой эффективности является недооценка роли избыточной продукции других проангиогенных пептидов.
  
  Цель — изучение сравнительной активности двух ключевых пептидов стимуляторов ангиогенеза: VEGF и фибробластного фактора роста — bFGF.
  
  Материал и методы. Проведен сравнительный анализ биологических эффектов in vitro и in vivo рекомбинантных пептидов VEGF165 и bFGF, предоставленных ИБХ РАН. Исследования выполнены на базе лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ ЭДиТО (доктор мед наук. наук, ведущий научный сотрудник Степанова Е . В)
  Определение сравнительного проангиогенного потенциала веществ in vitro проводили с использованием культуры эндотелиальных клеток (ЭК) мыши (SVEC-4-10). Использовали стандартные наборы тестов для оценки влияния исследуемых веществ на ключевые параметры ангиогенеза (bFGF- и V EGFзависимая пролиферация и миграция ЭК, образование капилляроподобных структур). Методы позволяли адекватно оценить влияние пептидов на этапы ангиогенеза и сопоставить их биологические эффекты, а также концентрации, необходимые для развития идентичного по амплитуде биологического эффекта.
  Клетки SVEC-4-10 высаживали в низкой плотности (6 т клеток/мл) в триплетах на 48-луночный планшет в среде, содержащей 10 % сыворотки FCS. Среда, антибиотки и препараты менялись раз в 3–4 дня. Рост клеток определялся модифицированным «митогенным методом по Crystal Violet».
  Клетки промывались PBS и фиксировались 1 % парафармальдегидом на PBS и окрашивались 0,5 % раствором Crystal Violet (Sigma Chemical Co) на этаноле. Краситель растворяли в этаноле и измеряли на спектрофотометре при 540–560 нм. Миграционная активность культивируемых ЭК мыши SVEC-4-10 анализировали модифицированным методом «раневой поверхности». Клетки (500 т/мл) высаживали в специальных камерах в 24-луночный планшет в среде ДMEM содержащей 10 % сыворотки FCS и 2 мМ глутамина, и инкубировали до образования монослоя. Затем камеры удалялись, лунки промывались раствором PBS. В течение 24 часов ЭК инкубировали в среде ДМЕМ, содержащей 2мМ глутамина. В качестве положительного контроля использовались ЭК, инкубировавшиеся в ДМЕМ с добавлением 10 % FCS. Клетки докрашивали реактивом Лейшмана. Результаты оценивали как процент мигрирующих клеток в опыте по отношению к контролю (клетки в среде ДМЕМ, содержащей 10 % эмбриональной сыворотки, 2 мМ глутамина).
  Образование трубочко-подобных структур ЭК SVEC-4-10 анализировали следующим образом.
  24-луночную плашку покрывали раствором Матригеля и инкубировали 20 минут при 37 °С до полимеризации. Затем клетки наносили в лунки, покрытые Матригелем, и инкубировали в СО2-инкубаторе в течение 4–5 часов. В качестве положительного контроля использовали ЭК, инкубировавшиеся в среде ДМЕМ без добавления препарата. Оценивали длину трубочек и количество контактов между трубочками.
  Метод имплантата Матригеля был выполнен по стандарту [Passaniti A., 1992]. Аликвоты (700 мл) Матригеля (BD Biosciences), содержащие гепарин 60 У. Е ./мл, VEGF165 (100 или 50 нг/мл) были приготовлены на льду. В качестве отрицательного контроля использовали введение Матригеля, содержащего гепарин 60 У. Е ./мл, положительного контроля — Матригель, с аналогичным содержанием гепарина и bFGF. Инъекцию Матригеля проводили подкожно, абдоминально мышам-самкам BDA. После инъекции Матригель быстро образовывал одиночный, плотный гелеобразный имплантат. Через 7 дней после введения Матригеля мышей выводили из эксперимента путем передозировки эфира. Имплантаты были удалены, фиксированы в 10 % нейтральном формалине и заключены в парафин для гистологического исследования. Гистологические исследования проводили, окрашивая имплантант гематоксилином и эозином.
  Проводили иммуногистохимические исследования срезов Матригеля с антителами против CD34.
  
  Результаты и обсуждение. Установлено, что оба проангиогенных пептида VEGF165 и b-FGF дозозависимо стимулировали пролиферацию ЭК SVEC4-10 (табл.). Однако биологический эффект bFGF был достоверно выше и проявлялся при меньшей концентрации пептида в среде для культивирования (р=0,001). Пятикратное повышение концентрации VEGF незначительно (123 %) повышало пролиферацию ЭК. Аналогичное увеличение содержания bFGF сопровождалось более значимым (180 %) биологическим эффектом стимуляции пролиферации ЭК.
  Для того, чтобы получить аналогичный биологический эффект (180 % стимуляцию) необходима концентрация VEGF165 примерно на уровне 7000 нг/мл.
  Оценка влияния VEGF165 и bFGF на миграцию ЭК SVEC-4-10 с помощью модифицированного метода «заживления раны» показала, что оба тестируемых пептида стимулировали миграцию ЭК.
  10 % FCS увеличивал миграцию клеток SVEC-4-10 на 145 %, добавление bFGF 50 нг/мл — на 139 %, а V EGF165 100 нг/мл — на 122 % по сравнению с отрицательным контролем. Таким образом, биологическая активность bFGF по стимуляции миграции ЭК в 3,5 раза выше, чем аналогический показатель VEGF. Для достижения сопоставимого эффекта bFGF необходимо добавить 400 нг/мл VEGF.
  Не обнаружено значимого влияния VEGF165 и bFGF на формирование трубочко-подобных структур в среде in vitro. Известно, что биологические эффекты многих факторов роста, включая пептидырегуляторы ангиогенеза, проявляются in vitro и не выявляются или выявляются в другой манере in vivo.
  В связи с этим, мы провели дополнительную серию экспериментов для проверки и сопоставления эффектов VEGF и bFGF in vivo. В частности, была выполнена индукция роста новых кровеносных сосудов в имплантате Матригеля in vivo. При введении Матригеля без стимуляторов ангиогенеза на гистологических срезах имплантата наблюдаются только единичные ЭК. VEGF165 и bFGF значимо увеличивали миграцию клеток и формирование кровеносных сосудов в имплантате Матригеля. VEGF165 (800 нг/мл) стимулировал миграцию ЭК в Матригель. Мигрировавшие ЭК обнаруживались не только по периферии, но и в центре. Хотя образование зрелых кровеносных сосудов было плохо выражено, в имплантанте наблюдали эритроциты. Более 50 % клеток окрашивались АТ к CD34. Добавление в Матригель bFGF (100 нг/мл) также стимулировало миграцию ЭК в центр. Формировалось значительное количество микрососудов, содержащих эритроциты (4–5 в поле зрения). Количество мигрирующих ЭК (CD34-положительных) превышало 80 %.
  
  Выводы. Результаты экспериментальных исследований доказывают, что биологическая активность bFGF по стимуляции пролиферации и миграции ЭК, образованию сосудов in vivo в 5–1,5-3,5 раза выше, чем аналогический показатель VEGF. Блокирование эффектов только VEGF не способно подавить ангиогенез в целом. Возможны обходные пути стимуляции.
  


Страница источника: 522

Сателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках X Российского общенациональн...

Фемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всероссийская научно-практическая конференцияФемтосекундные технологии в офтальмологии Юбилейная всеросси...

Федоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2017 XIV Всероссийская научно-практичес...

Федоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XIV Всероссийской научно-практической конференцииФедоровские чтения - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках XI...

Актуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XII Всероссийская научная ...

Восток – Запад 2017 Международная научно-практическая конференция по офтальмологииВосток – Запад 2017 Международная научно-практическая конфер...

Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2017 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Новые технологии в контактной коррекции.  В рамках  Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии - 2017»Новые технологии в контактной коррекции. В рамках Всеросси...

Новые технологии в офтальмологии -  2017 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии - 2017 Всероссийская научн...

XVI Всероссийская школа офтальмологаXVI Всероссийская школа офтальмолога

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»Сателлитные симпозиумы в рамках конференции «Современные тех...

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017 ХV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2017»«Живая хирургия» в рамках конференции «Современные технологи...

Роговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении кератоэктазий Научно-практическая конференция с международным участиемРоговица I. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы в лечении...

Сателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Российского глаукомного обществаСателлитные симпозиумы в рамках ХIV ежегодного конгресса Рос...

Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Сателлитные симпозиумы в рамках конференции Современные техн...

«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016«Живая» хирургия в рамках конференции Современные технологии...

Современные технологии катарактальной и рефракционной хирургии - 2016Современные технологии катарактальной и рефракционной хирург...

Сателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенационального офтальмологического форумаСателлитные симпозиумы в рамках IX Российского общенациональ...

На стыке науки и практикиНа стыке науки и практики

Федоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участиемФедоровские чтения - 2016 XIII Всероссийская научно-практиче...

Актуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная конференция молодых ученыхАктуальные проблемы офтальмологии XI Всероссийская научная к...

Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтальмохирургии с международным участием Восток – Запад 2016 Научно-практическая конференция по офтал...

Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международного офтальмологического конгресса Белые ночи - 2016 Сателлитные симпозиумы в рамках Международ...

Невские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологовНевские горизонты - 2016 Научная конференция офтальмологов

Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмологов «Невские горизонты - 2016»Сателлитные симпозиумы в рамках научной конференции офтальмо...

Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-практическая конференция Новые технологии в офтальмологии 2016 Всероссийская научно-п...

Витреоретинальная хирургия. Макулярный разрывВитреоретинальная хирургия. Макулярный разрыв

Современные технологии лечения витреоретинальной патологии - 2016 ХIV Научно-практическая конференция с международным участиемСовременные технологии лечения витреоретинальной патологии -...

Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта использования новой офтальмологической системы CENTURION®Совет экспертов, посвященный обсуждению первого опыта исполь...

HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незаменимой!HRT/Spectralis* Клуб Россия 2015 – технология, ставшая незам...

Три письма пациента. Доказанная эффективность леченияТри письма пациента. Доказанная эффективность лечения

Синдром «сухого» глаза: новые перспективыСиндром «сухого» глаза: новые перспективы

Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?Многоликий синдром «сухого» глаза: как эффективно им управлять?

Прошлое... Настоящее! Будущее?Прошлое... Настоящее! Будущее?

Проблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиумПроблемные вопросы глаукомы IV Международный симпозиум

Секундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT Lisa Tri ToricСекундо В. Двухлетний личный опыт с линзами AT Lisa Tri и AT...

Инновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной хирургииИнновации компании «Алкон» в катарактальной и рефракционной ...

Применение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических ИОЛ HOYA iSert Toric в рефракционной хирургии катарактыПрименение устройств HOYA iSert Toric. Применение торических...

Рейтинг@Mail.ru